Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义

目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。

gp130结合分子融合蛋白的表达、纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合的蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究。我们在原核表达ＧＡＭｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融合蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ。其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空载体转染的工程菌裂解液均无交叉反应。３株ｍＡｂ腹水抗体效价为（１．２４．８）×１０－７，同变性与非变性、单体与聚合体形式的ＧＡＭＴｈｉｏ融合蛋白都能起反应，用于Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的效果满意，为ＧＡＭ的功能研究提供了重要的手段。

人gp130结合分子与TLE1分子通过同源的Q结构域相互作用

目的 确定人gp130结合分子 (GAM)与transducinlikeenhancerofsplit 1(TLE1)分子间是否存在相互作用及相互作用的结构基础 ,以深入研究这两种分子的功能。方法 扩增编码GAM与TLE1分子不同结构域的cDNA ,构建含有这些不同结构域的酵母双杂交载体 ,通过酵母双杂交系统分析和免疫共沉淀试验 ,研究这两种分子间的相互作用。结果 DNA序列测定证实成功构建了含GAM与TLE1分子不同结构域的酵母双杂交载体 ,酵母双杂交分析表明GAM与TLE1分子通过氨基端的Q结构域相互结合 ,免疫共沉淀试验证实了这一发现。

gp130单克隆抗体B-S12的生物学特性研究

目的 研究gp130单克隆抗体B S12的生物学特性。方法 用细胞计数和3 H TdR掺入的方法观察人多发性骨髓瘤细胞株XG 1和XG 2在抗gp130的单抗B S12与它们的Fab片段和F(ab′) 2 片段作用下 ,细胞增殖和生长情况 ;此外 ,也观察gp130单抗B P8以及IL 6和IL 6R单抗B E8和B R6对B S12单抗在这 2个细胞株上作用的影响。结果 B S12可刺激XG 1和XG 2细胞增殖 ,并维持它们的长期生长 ,但B S12的这些作用有赖于它保持完整的二价结合力。B E8和B R6对B S12的作用无影响 ,B P8则可协同增强B S12的作用。结论 B S12为刺激型抗gp130的单抗 ,可起着类似于IL 6的作用。

GAM cDNA稳定转染的M1细胞系的建立与鉴定

目的为搞清 GAM在 gp130介导的信号传导中所起的作用。方法选择在 IL - 6刺激下出现分化和增殖抑制的M1细胞系 ,分别用正向和反向插入 GAM c DNA的真核表达载体 p EF- BOS与 p SV2 - neo质粒共转染 ,经 G418选择培养筛选得到稳定转染的细胞 ,并用半套式 PCR方法证实了 GAM基因与这两种细胞基因组 DNA的整合。结果流式细胞仪分析表明正向 GAM c DNA转染的 M1细胞中 GAM的表达水平明显升高 ,3H掺入实验表明 GAM表达水平升高使 M1细胞对 IL - 6的反应性下降。结论 GAM高表达 M1细胞的建立为深入研究 GAM在