HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析

HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准"。构建了gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。选定HIV-1gp160基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blot测定融合蛋白的抗原特异性。构建的HIV-1gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。应用Western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。

CD4^+单核细胞中HIV-1 gp120与gp160质粒的构建与表达

采用ｐＳＭＴＥ７作为质粒，进行ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因对ＣＤ４阳性单核细胞Ｕ９３７－２的导入与表达，ｅｎｖ基因导入细胞在微量重金属镉的诱导下，激活启动子表达ｇｐ１２０及ｇｐ１６０，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转移显色后，可得到清晰的ｅｎｖ目的条带．此外，通过流式细胞仪对表达的ｇｐ１２０与ＣＤ４位点的结合作了分析，验证了该表达蛋白的结构与活性．从实验系可以观察到表达ｇｐ１６０的ＣＤ４细胞株由于表达ｇｐ１６０而引起细胞死亡，而表达ｇｐ１２０的细胞株在表达ｇｐ１２０时不受任何影响．

HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析

目的：HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的“金标准”。因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。方法：选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性。结果：构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。结论：应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。