甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析

通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 .

6株T4类噬菌体尾丝蛋白gp37基因密码子特性比较

利用多种生物信息学软件对本实验室分离的1株T4类多价烈性噬菌体Bp7尾丝蛋白gp37基因与其他5株T4类噬菌体gp37基因进行密码子特征的分析比较。结果显示:Bp7与其他5株T4类噬菌体gp37基因密码子使用模式基本一致;Bp7尾丝蛋白gp37基因密码子偏好性较低,且偏爱使用以A或U为结尾的密码子;除AUG(Met)和JGG(Trp)外,确定了17种高频密码子;6株菌体gp37之间密码子偏好性比较发现,Bp7与JS98密码子使用最相近,与T4和T4T相对较远;gp37基因密码子的使用模式可能受中性突变和选择压力的共同作用。gp37基因密码子的分析结果将为Bp7尾丝蛋白的基因改造,以进一步拓宽其裂解谱及提高表达水平提供理论指导。

J亚群禽白血病病毒gp37基因的克隆和序列分析

近两年我们从国内不同省份先后分离和鉴定了 8株J亚群禽白血病病毒 (ALV_J) ,并对其中的 5株进行了gp3 7基因的克隆和序列分析。结果表明 ,我们分离的 5株ALV_J之间的同源性为 94.6%～ 99.0 % ;与国内最早分离的SD990 1、SD990 2和YZ990 1等毒株之间的同源性分别为 95 .3 %～ 98.5 %、95 .6%～ 99.0 %和 94.9%～ 98.6% ;与国际最先报道的原型株HPRS_1 0 3之间的同源性为 93 .4%～ 95 .1 % ;与其它国外毒株的同源性为 92 .7%～ 96.8%。这表明我国ALV_J的gp3 7基因正在不断发生变异 ,但相对于gp85基因的变异性要小。

J亚群禽白血病病毒跨膜蛋白gp37基因克隆与表达

禽白血病病毒(ALV)跨膜蛋白(TM)在病毒-细胞融合过程中起关键作用,其蛋白内部存在的许多高度保守序列有可能成为抗病毒的重要靶点。对TM结构和功能的深入研究将为抗禽白血病病毒乃至其它反转录病毒相关制剂的研制提供科学的理论基础。本研究通过PCR从本实验室分离的ALV-J山东汶上毒株获得表达TM的gp37基因,克隆连接pMD18-T载体并测序,从已构建的质粒pMD18-T-gp37中酶切回收gp37基因,构建重组转移载体pFastBacHTb-gp37。利用昆虫杆状病毒表达系统对gp37基因进行表达,通过间接免疫荧光和Western blot检测gp37基因表达产物,间接免疫荧光显示,重组杆状病毒感染的sf9细胞呈现明显的强阳性反应;Western blot分析,重组病毒感染的sf9细胞蛋白显示出约21kD的阳性条带。结果表明,gp37基因在sf9细胞内表达成功。

昆虫病毒gp37/fusolin基因研究进展

昆虫病毒gp37 fusolin基因属病毒复制非必需基因 ,其编码的蛋白能形成一种纺锤形包涵体 (spindlebodies,SBs) ,该包涵体内不含有病毒粒子。Fusolin蛋白形成的SBs与纯化的Fusolin蛋白均能提高靶昆虫对杆状病毒的敏感性 ,推测GP37蛋白也具有类似的功能。对gp37 fusolin基因的深入研究 。

斜纹夜蛾核多角体病毒gp37及其邻近序列的克隆及分析

从斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中克隆了 gp37基因 .分子生物学软件分析表明 ,在 gp37基因内部存在糖基化位点 .含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG) ,推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因 .通过GP37蛋白的同源性比较 ,绘制了以 gp37基因为基础的杆状病毒进化树 ,发现与以多角体蛋白基因 (polyhedrin)为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异 .以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒 (Bombyxmorinucleopolyhedrovirus,BmNPV)与杆状病毒代表种———苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamultinucleocapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)分开 ,根据 gp37基因分析则将二者归到同一分枝 。

K亚群禽白血病病毒分离株基因测序与鉴定分析

为了对从江苏省某种鸡场保种的崇仁麻鸡血浆中分离的禽白血病病毒(ALV)进行序列测定和亚群鉴定,试验采用ELISA法检测血浆样品p27抗原,并用从阳性血浆中分离的病毒接种DF1细胞进行免疫荧光检测,提取前病毒DNA,用ALV亚群鉴定引物进行PCR鉴定,前病毒DNA分3段扩增并测序,对测序结果进行拼接,用MEGA 7.0软件以NJ法对分离株病毒gp85基因编码的氨基酸序列和参考株进行遗传进化分析,采用DNAStar 7.0软件以Clustal W法对参考株与分离株病毒的gp37基因进行比对分析。结果表明:有1份样品的p27抗原ELISA反应呈阳性,免疫荧光检测也呈阳性,将该分离株命名为JS20CR13。K亚群引物PCR检测出大小为560 bp的目的片段。前病毒全基因组总长7 481 bp,其中env基因大小为1 617 bp(gp85基因1 008 bp,编码336个氨基酸;gp37基因大小为609 bp,编码203个氨基酸)。与各参考株对比,分离株JS20CR13的gp85基因序列与K亚群参考株同源性为94.0%~99.0%,明显高于其他亚群;gp85基因编码氨基酸序列与已经鉴定为ALV-K的参考株病毒位于同一个进化分支,而与其他亚群的遗传进化距离较远。分离株JS20CR13的gp37基因序列与ALV-K参考株JS14CZ01同源性最高,达99.0%。说明分离株JS20CR13与已经鉴定为ALV-K的参考株病毒位于同一个进化分支,分离株为K亚群ALV。

差异极大的不同准种隐藏于同一J亚型禽白血病病毒野毒株中

2012年山东省某地方品系鸡发生疑似血管瘤的肿瘤病例,对发病鸡群随机抽取9只鸡分别接种鸡胚成纤维细胞和DF-1细胞进行病毒分离鉴定,结果显示,在鸡的3种常见肿瘤病毒中仅分离到9株J亚型禽白血病病毒（ALV-J）,定名为LY1201-LY1209.选取LY1201株扩增同时包含有gp85和gp37的env基因,扩增产物连接T载体后转化大肠杆菌,对鉴定后的9个阳性克隆子进行测序和序列分析.结果显示,9个克隆子其相对保守的gp37氨基酸同源性为98.5%~100.0%,而其gp85序列之间氨基酸同源性仅为96.6%~100.0%;其中2个克隆子与其他7个克隆子相比在gp85的210#~219#缺失了10个氨基酸,这表明在LY1201存在着差异极大的不同ALV准种,并且变异较大的gp85基因比gp37基因能更好地显示ALV-J准种的多样性;在9个克隆子中3个克隆子gp85和gp37氨基酸同源性均为100.0%,表明这3个准种为同一准种,代表了在该分离株中占优势的准种.本研究利用单一基因证明了禽反转录病毒的准种多样性,并在单一病毒株中发现了差异极大的不同准种,特别是发现了一个具有明显缺失的ALV-J准种.