人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用

建立以重组表达HCMV蛋白为抗原的检测试剂盒，提高试剂盒的敏感性及特异性。从病毒及质粒中分别扩增gp52（281～433aa，f1）及pp65（361～473aa，f2）2个片段，以不同酶切位点同时插入到pTrcHisB载体上，筛选正确的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。表达蛋白rp52～65占菌体总蛋白的30％，以包涵体的形式存在，分子量为35000.以金属螯合亲和层析（IMAC）及分子筛方法纯化表达蛋白，纯度达到96％，得率为22．9％。以间接法检测HCMVIgM阳性血清，敏感性达到90．4％（19／21）。融合蛋白具有良好的抗原性，可代替gp52及pp65作为HCMVIgM抗体检测试剂盒的包被抗原。