禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定

用PCR从禽白血病病毒 (AvianLeukosisVirus ,ALV)RAV_1,RAV_2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞 (CEF)分别扩增出 1.2kb囊膜基因片段。分别将上述PCR产物的KpnⅠ /SaⅡ酶切片段克隆到质粒pGEM_3zf(+ )中得到 3个重组子即pGEM_3zf_RAV_1env、pGEM_3zf_RAV_2env和pGEM_3zf_Eenv。酶切分析和序列测定结果表明克隆的PCR片段分别来自ALVRAV_1,RAV_2和内源性E亚群病毒 。

J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定

近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒DNA ,依据原型毒株HPRS_10 3cDNA序列设计并合成一对引物 ,经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E_element基因在内的近 1.8kb的DNA片段 ,将其连到pMD18_T载体上 ,转化大肠杆菌JM10 9,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定 ,得到了阳性重组质粒pMD18_T_JL2 /env ,核苷酸序列测定结果表明 ,该片段为J_亚群禽白血病病毒囊膜基因 ,其中亚型特异性片段gp 85和标准对照毒株HPRS_10 3的同源率为 94 % ,所编码氨基酸的同源率为 87%。