斑马鱼gpr112a基因敲除品系的构建

GPR112蛋白作为黏附类G蛋白偶联受体(aGPCRs)家族的一员,由GPR112基因编码。它含有7个跨膜结构域,与G蛋白相互作用行使其功能。斑马鱼作为研究脊椎动物发育的重要模式生物,其基因组中含有GPR112的同源基因gpr112a,且在幼鱼和成鱼中均有表达。为了研究GPR112在脊椎动物生存和发育中的作用,利用CRISPR-Cas9技术构建了gpr112a基因敲除斑马鱼品系。首先,合成用于靶向gpr112a基因第二外显子的一对sgRNAs,经显微注射得到F0代嵌合体斑马鱼。然后,对嵌合体与野生型斑马鱼杂交所得的F1代斑马鱼进行基因型鉴定,筛选gpr112a突变杂合子,并对其gpr112a突变等位基因进行Sanger测序,以确定gpr112a基因敲除品系的建立。之后,gpr112a突变杂合子斑马鱼自交,获得gpr112a纯合子突变斑马鱼。经显微成像并观察发现,受精后7 dpf的gpr112a突变纯合子斑马鱼并没有出现与野生型差异明显的表型,这可能是斑马鱼机体的代偿机制所致。此研究为探究GPR112基因在脊椎动物生存和发育中的作用开辟了道路。