EGH受体、IGF-I型受体、FSH受体和LH受体mRNA在绍鸭各级卵泡颗粒层和膜层中的表达

采用相对定量反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)的方法 ,以 β actin为内标 ,测定绍鸭排卵前卵泡F1 、F3、F5及大白卵泡 (LWF)颗粒层与膜层中GH受体 (GHR)、IGF I型受体 (IGF IR)和FSH受体 (FSHR)、LH受体 (LHR)mRNA表达水平 ,以分析生长轴和生殖轴激素对绍鸭卵泡发育的协同调节作用。结果表明 :在所测定的各级卵泡中 ,GHRmRNA在膜层的表达水平均显著高于颗粒层 ,膜层中大白卵泡表达量最高 ,而颗粒层中GHRmRNA水平在各级卵泡之间没有明显差异 ;相反 ,IGF IRmRNA在同级卵泡颗粒层的表达水平显著高于膜层 ,颗粒层和膜层中IGF IRmRNA表达在各级卵泡之间的差异均不显著 ,只是大白卵泡的膜层与其他等级卵泡的膜层相比 ,IGF IR的表达量呈现较高的趋势 ;FSHRmRNA表达的变化趋势类似于IGF IR ,同级卵泡颗粒层中的表达量高于膜层 ;LHRmRNA在各级卵泡膜层中表达没有明显差异 ,而颗粒层中LHRmRNA随着卵泡发育成熟逐级显著增加 ,且F5和LWF卵泡膜层的LHRmRNA显著高于颗粒层 ,与GHRmRNA的表达相似。结果提示 ,GH和IGF I调节卵巢功能的优势作用位点和机制不尽相同 ;GHR和LHR协同表达与IGF IR和FSHR协同表达可能对卵泡发育起到精细的调节作用 ;而LHR在卵泡颗粒层中表达的逐级显著增加可能与卵泡等级的建立和排卵有关。

microRNA对哺乳动物卵泡发育的影响

卵巢是动态变化的实质性器官,一个发情周期内卵巢上的卵泡始终经历着募集、选择、优势化等生理过程。卵母细胞以及外周的颗粒细胞和膜细胞共同组成卵巢上功能性单位—卵泡,卵泡发育受卵泡生殖细胞和体细胞间内分泌、自分泌、旁分泌的共同调控。microRNA (miRNA)是一种重要的转录后调控方式,通过与靶基因的3'-UTR结合转录后抑制或降解靶基因的方式,在调控动物卵巢卵泡的发生、发育、颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇激素合成分泌等方面发挥重要作用。本文主要对miRNA在哺乳动物卵泡发育中的最新研究进展,包括miRNA对卵泡发育、颗粒细胞、膜细胞功能的影响及其在卵巢上的表达分析等进行综述。通过了解miRNA在卵泡发育中的作用,为进一步解析哺乳动物繁殖性状调控的分子机制奠定基础。

鹅等级卵泡颗粒细胞层形态观察及卵泡激素受体表达研究

通过对鹅卵泡中的颗粒细胞层进行形态学观察和分析,为在颗粒细胞水平深入研究鹅卵泡的选择与发育过程奠定形态学基础。采集处于产蛋期的皖西白鹅大白、F5、F3和F1卵泡,福尔马林固定后制作石蜡切片,H&E法染色,光镜观察颗粒细胞层形态;机械法分离F5卵泡颗粒细胞,提取总RNA,Real-time quantitative PCR(q RT-PCR)检测分析鹅等级卵泡促卵泡素受体(follicule stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA、促黄体素受体(luteinizing horomone receptor,LHR)mRNA表达情况。结果表明:鹅卵泡颗粒细胞层厚度随等级卵泡发育表现为先增加后下降;与卵泡等级发育和排卵相关的FSHR mRNA表达伴随卵泡发育先增加后降低,LHR mRNA表达伴随卵泡发育持续增加。

ID3影响鸡卵泡发育与选择的分子机制

为探究DNA分化抑制因子3(ID3)影响卵泡选择的分子机制,试验观察比较了35周龄与75周龄京红1号蛋鸡卵泡形态、大小及数量差异,采用实时荧光定量PCR检测ID3在不同发育阶段卵泡中的表达,并通过CRISPRi技术与rhBMP2蛋白分别调控鸡小黄卵泡颗粒细胞中ID3的表达,检测卵泡选择相关基因卵泡刺激素受体(FSHR)与类固醇生成急性调节蛋白(StAR)相对表达量。结果显示:35周龄京红1号蛋鸡等级卵泡数目显著高于75周龄蛋鸡(P<0.05);ID3在35周龄京红1号蛋鸡不同发育阶段卵泡中表达差异不显著(P>0.05),但75周龄蛋Fx(F6/7)卵泡中ID3表达显著高于其他卵泡(P<0.05),且75周龄蛋鸡的大白卵泡、小黄卵泡、Fx卵泡、F3卵泡、F1卵泡及卵巢基质中的ID3表达显著高于35周龄蛋鸡(P<0.05);通过CRISPRi抑制ID3表达时,FSHR与StAR的表达会显著增加(P<0.05);10、50、200 ng/mL rhBMP2能显著诱导ID3的表达(P<0.05),FSHR与StAR的表达下降,但差异不显著。研究证实ID3与鸡卵泡发育选择密切相关,并明确其影响卵泡选择的分子机制,对延长蛋鸡产蛋持久性具有重要意义。