根癌病生防菌E26菌株产生细菌素的初步研究

根癌病是葡萄生产中的一种重要病害。葡萄土壤杆菌E26(Agrobacterium vitis E26)是葡萄根癌病的生防菌株,在平皿培养时能产生抑制根癌病菌生长的细菌素(土壤杆菌素E26)。本研究针对E26菌株产生土壤杆菌素的生物学性状进行研究,初步分离纯化了土壤杆菌素E26并且分析了其部分理化性质和生物学特性。E26菌株在pH 7.0的改良AB液体培养基中能够正常生长并产生对葡萄根癌病菌K308(A.vitis K308)有明显抑制作用的土壤杆菌素E26。用活性炭吸附和70%乙醇洗脱可以从发酵液中分离土壤杆菌素E26;再经过DEAE-Cellulose阴离子交换柱层析和CM-Cellulose阳离子交换柱层析可以部分纯化土壤杆菌素E26。土壤杆菌素E26在80℃处理30min和在室温pH 3.0～9.0处理1 h,抑菌活性均不受影响。部分纯化的土壤杆菌素E26不仅对来自葡萄和其它寄主的17株供试的根癌病菌有显著抑制作用,而且对茄科青枯病菌、番茄疮痂病菌、水稻白叶枯病菌、棉花细菌性角斑病菌和白菜软腐病菌也有抑制作用。

葡萄根癌病病原菌类型鉴定及几种杀菌剂和抗菌素对其抑菌效果

以‘巨峰’葡萄茎部及根部癌瘤为材料,于培养基上分离根癌病原菌相似菌株,采用与生长素合成有关基因序列引物及葡萄土壤杆菌6b特异基因序列引物对这些菌株DNA进行PCR扩增,其中有6株菌株中扩增获得特异性目的条带,鉴定为葡萄土壤杆菌章鱼碱类型。通过对向日葵的接种试验,筛选出毒性最强株系。采用抑菌圈法检测了9种杀菌剂和抗菌素对该菌株的抑菌效果。结果表明:72%农用硫酸链霉素对该菌株的抑制作用显著,其200倍稀释液抑菌圈直径为38.84mm;其次为三氯异氰尿酸和80%乙蒜素,二者抑菌圈直径分别为17.37mm和10.66mm。参试的20%龙克菌、80%多菌灵、3%中生菌素、40%可杀得三千、2%春雷霉素、25%叶枯唑对该菌株无明显抑制作用。

葡萄根癌生防菌株E26生防效果的离体检测方法研究

【目的】筛选葡萄离体茎段和叶片的最适表面消毒条件、离体培养基和接种方法,建立生防菌株E26防治葡萄根癌病效果的离体检测方法。【方法】通过比较6种表面消毒方法,4种培养基和2种接种方法,建立最优的E26生防效果离体检测方法;并通过与温室、大田生防效果的比较以及瘤组织切片观察、冠瘿碱纸电泳检测验证该离体检测方法的准确性。【结果】在1/2B5培养基的基础上改良出适合于葡萄离体茎段培养用的MSC1/2B5培养基;筛选出葡萄离体茎段的最佳消毒条件和接种方法,建立了检测E26生防效果的离体茎段接种法。该方法的检测结果与葡萄活体植株的检测结果基本一致,能够快速准确地反映E26的防效;并且,瘤组织切片观察和冠瘿碱纸电泳检测结果证实了该离体检测方法的可靠性。叶圆片法检测时,根癌瘤只能在葡萄叶圆片的叶脉处形成,瘤组织较小,难以准确反映E26的生防效果。【结论】本研究建立的离体茎段检测E26的生防效果是一种比较理想的离体检测E26生防效果的方法。

转座子Tn5对葡萄根癌病生防菌MI15的诱变

以含自杀性质粒pMO75::Tn5的铜绿假单胞菌PAO1826和含自杀性质粒pSUP2021::Tn5的大肠杆菌S17-1为供体菌,以葡萄根癌病生防菌MI15为受体菌,进行接合杂交.当供体菌和受体菌菌体数量比例为1∶1和1∶5时可以产生转移接合子,而当菌体数量比例为5∶1时不能产生转移接合子.共筛选了117株转移接合子,获得了3株不产细菌素的MI15突变株,用光敏生物素标记的Tn5DNA探针与突变株染色体DNA进行斑点杂交,3株突变株均呈阳性反应,证明Tn5转座子已插入到MI15菌株的染色体上引起插入突变并抑制了细菌素的产生.

葡萄砧木抗寒与抗根癌病的研究

对17个葡萄砧木品种抗寒性与抗根癌病的研究发现,不同砧木在两种抗性上存在明显差异。供试葡萄砧木中属于极抗寒的有4种,抗寒的6种,较抗寒的2种,较不抗寒的5种;属于抗病的4种,中度抗病的4种,中度感病的4种,感病的5种。其中河岸1号、河岸2号、河岸3号、河岸6号抗病性较强,超过了贝达和山葡萄,其抗寒性与贝达相近或稍强,可作为抗寒与抗根癌病砧木在葡萄生产中试用。

葡萄根癌病的研究进展

葡萄根癌病是葡萄产区重要的致死性病害之一。该文主要从葡萄根癌病的致病菌、致病机理、侵染过程、防治方法等几个方面综述了目前对葡萄根癌病的研究现状,为其防治提供理论依据。

葡萄根癌病研究进展及防治措施

葡萄根癌病由葡萄土壤杆菌(Allorhizobium vitis)引起,主要通过伤口侵染,促使植物细胞产生过量的生长激素,从而形成瘤状物,影响植株的营养吸收,进而降低葡萄产量和品质。本文综述了葡萄根癌病的发病症状、病原菌种类、病原菌的基因组信息及分类地位,比较分析了基于特异性引物建立的葡萄土壤杆菌的PCR、荧光定量PCR、数字微滴PCR、环介导等温扩增技术等分子生物学检测技术的优缺点,阐述了病原菌的发病机制及对该病的综合防治方法,为葡萄根癌病的后期研究及生产防治提供参考。

葡萄根癌病病原菌的筛选及鉴定

明确引起济南南部山区葡萄根癌病的病原菌种类,为病害防治提供科学依据。以形态学为基础,结合生理生化及分子生物学方法对‘赤霞珠’葡萄根癌病样品进行分离鉴定。结果表明,从根部肿瘤组织中利用MW选择性培养基分离纯化了12株类似于根癌土壤杆菌的细菌。形态学和16S rDNA检测表明12株菌均为根癌土壤杆菌属。其中生化Ⅰ型5株、生化Ⅱ型4株、生化Ⅲ型3株。采用针刺涂抹法接种胡萝卜圆盘、向日葵、葡萄幼苗,确定了2株强毒性菌株JC02、JC05。2个株菌均为生化Ⅲ型菌株。质粒生物学鉴定表明JC02、JC05菌株含有Ti质粒,为章鱼碱类型。研究表明,为害济南南部山区‘赤霞珠’葡萄根癌病的病原菌为葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)。