湖南特色刺葡萄果皮中优势次生代谢物质分析

以‘夏黑’葡萄和‘阳光玫瑰’葡萄为对照,利用超高效液相色谱质谱联用技术广泛靶向代谢组学的方法,对果皮中的次生代谢产物进行组学分析,结合统计学方法筛选出湖南省3个刺葡萄品种果皮中的差异代谢物质。结果表明:本试验共检测到737种代谢物质,其中‘湘刺1号’检测出的代谢物质有711种,‘湘刺2号’检出666种,‘湘刺4号’检出710种;不同刺葡萄品种果皮的代谢物质有较大差异,主要表现为类黄酮化合物含量的差异,其中‘湘刺2号’的原花青素相对含量较高,‘湘刺4号’的花色苷和类黄酮物质相对含量较高,‘湘刺1号’果皮中含有较多的槲皮素-3-O-桑布双糖苷、丁香亭-3-O-(6″-乙酰)葡萄糖苷、柠檬素-3-O-葡萄糖苷、芍药花素-3-O-芸香糖苷和锦葵色素-3-O-(6″-O-乙酰)葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷,且香豆酰阿魏酰酒石酸和紫丁香苷仅在‘湘刺1’号中检出。

葡萄新品种‘紫秋’

从野生刺葡萄资源中选育出的新品种‘紫秋’,植株生长势强,适应性强,耐旱、耐粗放栽培,抗病性强,适合南方高温、多湿气候条件,而且结果早,产量高,果实味甜,风味好,市场上颇受欢迎。

大孔树脂对刺葡萄籽中原花青素的纯化

运用正交试验筛选树脂,探索原花青素在所选树脂上的吸附和解吸工艺条件.结果表明,所考察的YWD-06C、YWD-09F、YWD-03K7、YWD-04B1、HPD-300、HPD-700、D-101和DS-401树脂中,YWD-06C树脂为葡萄籽原花青素纯化的最佳树脂;最佳吸附条件:吸附温度20℃,吸附时间6h,溶液pH值为4;最佳解吸条件:解吸液为60%的乙醇水溶液,pH值为4,解吸时间6h,解吸温度25℃.通过动态试验,确定吸附速率为4B/h,洗脱速率为2BV/h,经该工艺所得纯化物中原花青素的含量达92.57%.

基于SRAP标记的刺葡萄亲缘关系分析

运用SRAP标记对分布在湖南省内的21份刺葡萄资源进行遗传多样性与亲缘关系分析。结果表明:从84对SRAP引物组合中筛选出的7个引物组合中共扩增出61条带,其中有34条稳定的多态性条带,多态性比率为55.7%;运用NTSYS软件计算出21份材料的成对遗传相似系数为0.80～0.99,在遗传相似系数0.92处可将全部材料划分为3个类群;UPGMA聚类分析表明,在湖南省境内分布的刺葡萄有6个基本类型,并推测出了农大1号至农大9号育种材料(2003年由湖南农业大学运用秋水仙素处理不同地区刺葡萄种籽得到的诱变材料,由于经过3次搬迁,现已遗失亲本档案)的亲本。

刺葡萄籽油功效成分及其动物学药理作用研究

目的:研究刺葡萄籽油中的功效成分及其动物学药理作用。方法:使用GC/MS对甲酯化和未经甲酯化处理的刺葡萄籽油进行分析,研究籽油中的功效成分,并以小白鼠为研究对象进行刺葡萄籽油的喂食。结果:超临界CO_2萃取的刺葡萄籽油的GC/MS分析结果表明,刺葡萄籽油成分以脂肪酸为主,其中不饱和脂肪酸含量占87%,不饱和脂肪酸主要为亚油酸,其含量达82.32%,高于已有报道的葡萄籽油中亚油酸含量;未经甲酯化处理的籽油经GC/MS分析发现,刺葡萄籽油中含有一种具有较强生物活性的成分—角鲨烯,而赤霞珠葡萄的GC/MS分析中没有发现,也未见葡萄属植物中含有角鲨烯成分的研究报道。通过动物学药理作用实验发现,刺葡萄籽油不仅能显著降低血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量,还能够在降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的同时,提高高密度脂蛋白胆回醇(HDL-C)的含量。结论:刺葡萄籽油中含有多种对人体有益的功效成分,值得人们进一步地研究。

秋水仙素对刺葡萄植株形态的影响

以经秋水仙素处理后加倍的四倍体剌葡萄植株为试材,观察其叶片形态、枝蔓节间长度与粗度、叶片气孔、棚栏组织等的变化.结果表明,与二倍体相比,四倍体植株的叶片变厚,叶形指数变小,叶色变深,叶表面皱缩粗糙,节间变短,植株变矮;叶片气孔密度减小,保卫细胞增大,叶片栅栏组织增厚.

超临界CO_2萃取刺葡萄籽油及其成分分析

以刺葡萄种子为原料,采用单因素试验和正交试验设计,研究了超临界CO2萃取刺葡萄籽油的工艺,并用气相色谱-质谱联用仪对刺葡萄籽油的化学成分进行了分析.结果表明,超临界CO2萃取刺葡萄籽油的适宜工艺条件为:种子粉碎粒径0.40～0.53mm,萃取压力30MPa,萃取温度35℃,分离温度55℃,分离压力12MPa,在此条件下油脂萃取率为13.5%.GC/MS分析显示,刺葡萄籽油成分以脂肪酸为主,其中不饱和脂肪酸含量占87%,不饱和脂肪酸主要以亚油酸为主,含量为82.32%;饱和脂肪酸主要为硬脂酸和棕榈酸,相对含量分别为9.03%,3.26%.

腺枝葡萄与刺葡萄对葡萄黑痘病和霜霉病的抗性

比较腺枝葡萄和刺葡萄2种野生葡萄与红地球、户太8号2个栽培品种对葡萄黑痘病和霜霉病的抗性差异;腺枝葡萄和刺葡萄嫁接不同栽培品种后,通过调查砧穗组合的抗病性,分析腺枝葡萄与其他野生葡萄资源赋予接穗抗病性的差异。结果表明,腺枝葡萄对黑痘病和霜霉病的抗性均较强,刺葡萄抗黑痘病,但不抗霜霉病;嫁接后,刺葡萄作砧木的组合,抗病性明显增强。由此可以认为,腺枝葡萄和刺葡萄均可作为真菌病害抗性育种的资源,刺葡萄可作为砧木育种材料。

超临界CO_2萃取刺葡萄籽原花青素的工艺研究

刺葡萄(Vitis davidii Foex．)是属于葡萄属东亚种群的一个种,在湖南西部和南部的山区分布广泛,资源丰富,其果实酸甜、风味浓,但其果粒小,种子多,从种子中提取天然活性物质——原花青素的前景可能更为广阔。目前关于刺葡萄的研究报道少,为此本文以“紫秋”刺葡萄种子为原料,采用单因素试验和正交试验,探讨了超临界CO2萃取刺葡萄籽原花青素的工艺。研究结果表明,超临界CO2萃取刺葡萄籽原花青素的适宜工艺条件为:萃取压力30MPa,萃取温度55℃,料液比1:0．8,60％的乙醇为夹带剂,在此条件下,原花青素的产率为17．58 mg/100g,纯度可达89．7％。

刺葡萄种内遗传多样性研究进展

刺萄萄主要分布在我国长江中下游及以南地区,是中国野生萄萄中果粒最大的一个种,其果实高抗炭疽病和白腐病,在湖南、江西、福建、贵州等省的部分地区一直作为鲜食和酿酒品种栽培利用。刺葡萄种内遗传多样性较为丰富,为了充分挖掘利用刺葡萄资源,提高刺葡萄资源的利用效率,本文从刺葡萄的物候学、花器类型、形态性状、果实理化性状、花粉形态、DNA遗传水平和抗性等方面进行种内多样性的研究和综述,以期为刺葡萄种质资源的保护、鉴定评价和发掘利用奠定基础。

中国野生刺葡萄抗白腐病NBS-LRR类抗病基因同源序列的分离与鉴定

【目的】通过同源克隆法从刺葡萄‘高山2号’叶片中得到抗白腐病基因的同源片段,为筛选葡萄抗白腐病基因奠定基础。【方法】根据已知植物抗病基因NBS-LRR保守区设计简并引物,从高抗葡萄白腐病刺葡萄‘高山2号’的基因组DNA与cDNA上得到抗病基因同源片段(RGAs),并对其表达分析进行检测。【结果】从刺葡萄‘高山2号’上获得了10个NBS-LRR类抗病基因同源片段,10条葡萄RGAs间在氨基酸水平上的同源性表现出丰富的多态性,进一步分析发现,在10条葡萄RGAs中,4个推测所属基因为non-TIR-NBS-LRR类抗病基因,6个所属基因为TIR-NBS-LRR类抗病基因。定量PCR分析表明,NB7基因受到白腐菌的诱导,而且NB7基因在刺葡萄叶片中为低丰度表达,NBS6基因受到白腐菌的诱导后为下调表达。【结论】在刺葡萄上成功获得了抗病基因同源序列,通过荧光定量PCR分析发现,NB7基因与NBS6基因都受到白腐菌的诱导表达,为最终克隆得到葡萄抗白腐病基因奠定基础。

刺葡萄愈伤组织UFGT基因克隆及表达分析

为从细胞水平上揭示刺葡萄3-O-类黄酮葡萄糖基转移酶(UFGT)基因调控花青素合成的功能,以刺葡萄愈伤组织为试验材料,根据刺葡萄愈伤组织转录组UFGT序列片段,利用RT-PCR结合RACE技术克隆得到VdUFGT基因,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,VdUFGT基因cDNA和DNA开放阅读框(ORF)分别为1 371 bp和1 448 bp,包含2个外显子和1个内含子,编码456个氨基酸,为带负电荷的不稳定的亲水性蛋白,具有一个UDPGT结构域,是UDPGT超家族成员,包含UDP-黄酮糖基转移酶特征区域。由UFGT同源基因编码蛋白所构建的系统发育树,与植物进化的关系相一致,6个葡萄属植物聚为一支。RT-qPCR分析表明,刺葡萄红色愈伤组织VdUFGT转录水平极显著高于白色愈伤组织,培养25 d的2个细胞培养物差异可达79倍;在刺葡萄愈伤组织连续培养过程中,红色愈伤组织中Vd UFGT转录水平变化幅度较大,在愈伤组织快速生长中期和衰老初期分别出现峰值,而刺葡萄白色愈伤组织VdUFGT转录水平与红色愈伤组织相比变化幅度不大,且始终维持在一个较低的水平。说明VdUFGT对刺葡萄红色愈伤组织细胞培养物中的花青素生物合成有重要的调控作用,这种调控作用主要发生在刺葡萄愈伤组织细胞快速生长中期和细胞衰老初期。本研究结果为进一步阐明VdUFGT调控刺葡萄细胞花青素合成的机制奠定了理论基础。

桑叶葡萄和刺葡萄果皮中酚类物质的组成分析

采用超声波辅助法,利用甲醇从桑叶葡萄和刺葡萄果皮中提取花色苷,利用乙酸乙酯从两种葡萄果皮中提取非花色苷,液质联用定性定量分析两种葡萄果皮中花色苷及非花色苷酚的组成。桑叶葡萄果皮共检测出花色苷20种,非花色苷酚6种。刺葡萄果皮中共检测出花色苷6种,非花色苷酚15种。刺葡萄果皮中主要的花色苷是花翠素3,5-二葡萄糖苷和二甲花翠素3,5-二葡萄糖苷,而桑叶葡萄果皮以二甲花翠素3,5-二葡萄糖苷和3'甲基花翠素-3,5-二葡萄糖苷为主。两种野生葡萄果皮中主要的非花色苷酚是阿魏酸酒石酸酯及其衍生物,阿魏酸己糖酯和槲皮素-3-O-鼠李糖苷,刺葡萄果皮中非花色苷酚的含量比桑叶葡萄中的多。

刺葡萄酿酒酵母菌株的分离与筛选

为寻找适合酿造刺葡萄果酒的酵母菌株,从刺葡萄原酒、新鲜刺葡萄以及经初发酵过滤所得的刺葡萄皮渣中分离提取得到90株酿酒酵母,并对经发酵试验初步筛选出的5株酵母进行了耐酒精、耐糖、耐酸和耐二氧化硫的性能测定比较,最终筛选出1株发酵性能优良的菌株(B54)。该菌株具有很高的耐酒精能力,在18%的酒精浓度条件下也能迅速启动发酵,同时在高浓度SO2(250 mg/L)条件下发酵启动最快,并能耐受2.0%浓度的柠檬酸,较其他菌株具有更强的耐酸性,因此可作为刺葡萄酿酒的专用菌株。

刺葡萄籽油软胶囊在老年人中抗氧化效果的观察

目的探讨刺葡萄籽油软胶囊在老年人中抗氧化效果。方法测定30例服刺葡萄籽油,30例服安慰剂及30例服维生素C老年人服药物90 d前后的SOD(超氧化物歧化酶),GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)酶活力及总抗氧化能力(T-AOC)值,比较其之间的差别。结果三项指标在服用刺葡萄籽油和维生素C前后与安慰剂患者比较有统计意义的差别(P<0.01),并且在服用刺葡萄籽油与维生素C后,两组患者上述指标亦有明显的差别(P<0.05)。结论刺葡萄籽油有较强的抗氧化作用,其抗氧化疗效明确。

大孔树脂对刺葡萄酒渣中提取的白藜芦醇的纯化工艺研究

通过静态吸附-解吸试验从6种大孔树脂中筛选出最适合刺葡萄酒渣中白藜芦醇纯化的大孔树脂,并对其进行静态、动态吸附-解吸工艺条件优化,结果表明:供试树脂中,大孔树脂H103为最适树脂,其静态吸附-解吸最优条件为:上样液质量浓度为0.65 mg/mL,上样液pH值为3,洗脱液为体积分数70%乙醇;动态吸附-解吸最优条件为:上样流速1.5 mL/min,上样液体积6 BV;洗脱流速0.5 m L/min,洗脱液体积6 BV,在此条件下,树脂H103对白藜芦醇的吸附量为55.7 mg/g,解吸率为89.86%,经树脂H103纯化后,样品纯度由11.54%提高至59.76%。

刺葡萄籽油微胶囊化研究

用喷雾干燥法制备刺葡萄籽油微胶囊,并对其进行显微观察和抗氧化试验.结果表明,刺葡萄籽油微胶囊壁材配方对微胶囊化效率的影响从大到小依次为阿拉伯胶与变性淀粉质量比、乳化剂用量、芯材与壁材质量比、固形物含量,经正交试验得到其优化值分别为20∶38.5、5%、0.3∶1、25%;刺葡萄籽油微胶囊化工艺参数对微胶囊化效率的影响从大到小依次为出风温度、进风温度、乳化时间、乳化液温度,经正交试验得到其优化值分别为92℃、190℃、5min、60℃.在上述优化条件下制备的刺葡萄籽油微胶囊化效率在90%以上,微胶囊产品具有良好的抗氧化性能和微观结构.

刺葡萄种子及籽油的理化特性

以紫秋刺葡萄种子为试材,在分析种子特性基础上,对超临界CO2和溶剂萃取的刺葡萄籽油理化性质进行了研究,结果表明,采用超临界CO2萃取的刺葡萄籽油与溶剂提取法相比,其籽油澄清、无沉淀、无异味,加热不变色,碘价高(13.45g·kg-1)、皂化价高(195mg·g-1)、酸价低(2.08mg·g-1)、游离脂肪酸少、油脂质量好,无溶剂残留,能满足食品、药品等行业对产品高质量的要求,超临界CO2萃取技术是提取刺葡萄籽油的最佳方法。刺葡萄种子小(平均单粒质量0.03g),但籽油含量高(15.6%),碘价高,酸价及不皂化物低,籽油质量好,在保健食品、化妆品工业上具有重要利用价值。

刺葡萄混酿对巨峰冰葡萄酒色泽与品质的影响

为了提高巨峰冰葡萄酒花色苷含量,改善其色泽,以鲜食葡萄和刺葡萄为巨峰冰葡萄酒酿造原料,研究了巨峰葡萄和刺葡萄按不同比例混合发酵对发酵期间花色苷、总酚、色差、总糖、可溶性固形物、酒精度、pH、总酸、挥发酸等理化指标及酒体感官品评的影响。不同比例刺葡萄混酿组的花色苷含量、总酚含量、色差值显著高于巨峰葡萄组(P<0.05),混酿1∶1组花色苷含量达到208.50mg/L;且巨峰葡萄与刺葡萄以1∶1的比例混合发酵时色差值和感官品评分值达到最大,分别为17.16和(78±2.79)分;但不同比例刺葡萄混酿组的总糖、总酸、挥发酸含量与巨峰葡萄组无显著性差异(P≥0.05)。巨峰葡萄与刺葡萄以1∶1的比例混酿能很好地改善巨峰冰葡萄酒的色泽和口感,酿制出优质巨峰冰葡萄酒,为刺葡萄及普通红葡萄资源的利用开发提供了理论基础。

刺葡萄自然发酵酿酒研究

以湖南省怀化市的含糖量为15.8%的刺葡萄(V.davidii Foex)为酿酒原料,利用刺葡萄上的野生酵母发酵。试验表明,在25℃下自然发酵彻底,酒精度达到7.80%vol,干浸出物含量也达到最高值,具有独特的香味和口感;刺葡萄上的野生酵母群落中具有抗SO2能力较强的菌种;抗酒精能力强的酵母较少,但通过前期发酵的培养,再加糖发酵可以得到14.2%vol的刺葡萄酒。