响应面优化草鱼鱼鳔酶溶胶原蛋白的提取工艺

为提高草鱼下脚料鱼鳔中胶原蛋白的提取率,采用响应面法优化胃蛋白酶提取草鱼鱼鳔胶原蛋白。探讨加酶量、提取时间和液料比3个因素对提取率的影响;在单因素试验的基础上进行响应面优化试验。结果表明:胃蛋白酶提取草鱼鱼鳔胶原蛋白的最佳工艺条件为加酶量40mg/g、提取时间48h、液料比80:1(mL/g),在此工艺条件下胶原蛋白实际提取率为17.82%,与模型预测值(18.04%)接近。方差分析显示,模型可靠,3个因素均对草鱼鱼鳔胶原蛋白的提取率影响显著。

草鱼鱼鳔胶原性质的研究

为了有效利用鱼类废弃物,从草鱼鳔中提取酸溶性胶原(ASC)和酶溶性胶原(PSC)并对其部分性质进行研究。ASC和PSC的提取得率以干基计分别为4.7%和11.1%;ASC和PSC的紫外光谱表明,最大吸收峰都接近于230nm;氨基酸组成分析表明,ASC和PSC中羟脯氨酸和羟赖氨酸的总含量分别为16.87%和17.55%;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱显示草鱼鳔胶原至少由两条不同的α链(α1和α2)组成,与I型胶原相似;ASC和PSC热变性温度(Td)分别为33.0、34.8℃,比猪皮胶原的热变性温度(37℃)低3～4℃。结果表明,草鱼鳔胶原有可能替代或作为补充陆生动物胶原广泛应用于工业领域。

鲟鱼和草鱼鱼鳔酶溶性胶原蛋白的理化性质比较

以鲟鱼鱼鳔和草鱼鱼鳔为原料,比较分析两种鱼鳔酶溶性胶原蛋白(PSC)的理化性质。通过胶原蛋白得率、氨基酸组成、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱、傅里叶红外光谱、圆二光谱、微量热仪分析两种鱼鳔PSC的组成及理化性质的差异。结果表明,鲟鱼鱼鳔基本营养成分中的粗脂肪和羟脯氨酸含量均显著高于草鱼鱼鳔(P<0.05);鲟鱼鱼鳔PSC得率80.63%显著高于草鱼鱼鳔PSC得率49.85%(P<0.05);两种鱼鳔PSC都属于I型胶原蛋白;鲟鱼鱼鳔PSC的α链相对分子质量和二聚体β链的含量低于草鱼鱼鳔PSC;氨基酸组成中鲟鱼鱼鳔PSC中的丝氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、组氨酸和精氨酸的含量显著高于草鱼鱼鳔PSC(P<0.05),草鱼鱼鳔PSC中的丙氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸的含量显著高于鲟鱼鱼鳔PSC(P<0.05);两种鱼鳔PSC具有相似的二级结构;鲟鱼鱼鳔PSC的变性温度29.26℃显著低于草鱼鱼鳔PSC变性温度36.01℃(P<0.05)。在两种鱼鳔PSC之间,草鱼鱼鳔PSC比鲟鱼鱼鳔PSC有更好的热稳定性,但是鲟鱼鱼鳔PSC比草鱼鱼鳔PSC有更高的得率。

草鱼肝胆综合征综合治疗试验

为探索草鱼(Ctenopharynodon idellus)肝胆综合征的治疗方法,根据不同的水质条件和患病症状,以3种不同的治疗方案对101例初步诊断的草鱼肝胆综合征进行综合治疗。结果表明,没有细菌性出血病并发时,采取外用水质改良剂或消毒杀菌剂,内服免疫肝胆宝、复合维生素CE或四黄粉合剂和内服黄芪多糖、板兰根、三黄类植物提取物合剂及复合维生素CE进行综合治疗均能有效地治愈草鱼肝胆综合征。

微载体规模化培养草鱼鳔细胞以增殖Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的工艺研究

为优化草鱼(Ctenopharyngodon idella)鳔细胞(CiSB)细胞悬浮培养工艺,以提高基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)含量,利用Cytodex 1微载体悬浮培养系统规模化培养CiSB和Ⅱ型GCRV,对CiSB细胞初始接种密度、搅拌转速和微载体浓度等工艺参数进行摸索和优化。结果显示,在CiSB细胞贴壁期,以转速30 r·min^(-1)、每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌方式培养最佳,4 h后细胞贴附率可达96%以上;在微载体密度2 g·L^(-1)、细胞初始接种密度2×10^(5)个·mL^(-1)、搅拌速度30 r·min^(-1)的条件下,初始培养血清浓度设定为10%,培养3 d后更换50%的培养基并使血清浓度达到5%,可获得最佳的细胞生长效能。CiSB经消化转移放大至1 L,微载体上细胞贴附均匀、生长良好。接种Ⅱ型GCRV至规模化培养的CiSB细胞,拷贝数最高达6.2×10^(5)拷贝数·μL^(-1)。研究结果可为草鱼出血病疫苗的规模化生产工艺研究提供依据。

草鱼鱼鳔酶解液的抗氧化活性及理化性质研究

以草鱼鱼鳔为原料,利用生物酶降解技术制备鱼鳔酶解液。以1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为试验指标,分别考察了酶种类、温度、时间、料液比、酶量等因素对酶解效果的影响。并采用高效液相色谱法(HPLC)和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)分别对草鱼鱼鳔酶解液中的游离氨基酸、重金属含量进行分析。筛选出最佳酶解条件为:木瓜蛋白酶0.5%,温度55℃,酶解时间5 h,料液比50 mg/mL。在此条件下,DPPH清除率可达78.92%。结果表明,草鱼鱼鳔酶解液中呈味氨基酸甘氨酸、丙氨酸和精氨酸含量较高,重金属含量远低于现行《国家标准保健食品》的重金属检出限。

草鱼肝胆综合症综合诊断实例研究

采取常规检查诊断、生化诊断、病理诊断及水质分析等手段,对101例草鱼肝胆综合症病例的发病原因、症状进行了归纳分析,将患病草鱼病症划分为3个类型。认为长期大量投喂单一精饲料、养殖水体亚硝酸盐含量过高是引起草鱼肝胆综合症的主要原因。提出对草鱼肝胆综合症的诊断应以肝胆形态、颜色及鳃丝炎症作为主要诊断依据,肠道炎症、尾鳍发白及鳃盖充血作为辅助诊断依据。