Gremlin-1在骨关节炎中的研究进展

Gremlin-1是一种骨形态发生蛋白(BMP)拮抗剂,通过与受体直接结合并抑制BMP信号传导而发挥作用,其中BMP参与了骨骼组织正常发育以及维持体内平衡的过程,据研究显示,由Gremlin-1抑制BMP蛋白在骨关节炎(OA)的发生、发展中有着极大的意义,如今,有许多学者研究发现Gremlin-1与OA的进展有密切的联系,值得注意的是,Gremlin-1还参与了相关信号通路干扰间充质干细胞的细胞活力以及介导成骨细胞分化的过程,致使OA的进一步恶化。因此本文主要从Gremlin-1基因出发,探讨与OA的关系以及介导的相关信号通路抑制骨形成过程而影响OA进展做一综述。

血清ADPN、FKN、Gremlin在糖尿病肾病患者中的表达及与患者肾功能的相关性

目的 探讨血清脂联素(ADPN)、不规则趋化因子(FKN)、Gremlin在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与患者肾功能的相关性。方法 回顾性选取2020年6月~2022年6月河南科技大学第一附属医院收治的DN患者100例为观察组,另选取同期单纯糖尿病(DM)患者100例为对照组。比较2组血清ADPN、FKN、Gremlin水平,比较2组肾功能指标[血胱抑素C(CysC)、血肌酐(SCr)、尿蛋白排泄率(UAER)]水平,分析血清各指标水平与肾功能指标的相关性,ROC分析血清各指标对DN的诊断价值。结果 观察组血清ADPN、FKN、Gremlin、CysC、SCr、UAER水平均高于对照组(P<0.05);血清ADPN、FKN、Gremlin水平与肾功能指标CysC、SCr、UAER水平均呈正相关,且血清各指标水平联合诊断DN的AUC为0.885,最佳诊断敏感度、特异度分别为90.00%、85.00%,约登指数为0.750。结论 ADPN、FKN、Gremlin在DN患者血清中表达上调,各指标水平与肾功能指标水平呈正相关,联合检测对DN具有一定诊断价值,可作为临床诊断DN、评估肾功能的有效指标。

急性加重期特发性间质性肺炎患者血清CD59、Gremlin-1表达及与近期预后的相关性

目的研究急性加重期特发性间质性肺炎(IIP)患者血清CD59、Gremlin-1水平及其与近期预后的相关性。方法选取2020年3月—2022年2月湖南中医药大学第一附属医院呼吸内科诊治的急性加重期IIP患者90例为研究对象(急性加重期组),以同期诊治的稳定期IIP患者60例为稳定期组,以同期体检的健康者60例为健康对照组。根据急性加重期IIP患者随访3个月生存情况,分为生存亚组(n=59)和死亡亚组(n=31)。酶联免疫吸附实验检测血清CD59、Gremlin-1水平。Pearson相关分析急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1与临床指标的相关性。多因素Logistic回归分析影响急性加重期IIP患者死亡预后的因素。受试者工作特征曲线分析血清CD59、Gremlin-1对急性加重期IIP患者死亡预后的预测价值。结果急性加重期组血清CD59、Gremlin-1高于稳定期组和健康对照组(t=30.916、47.431,34.379、54.420,P均<0.001)。死亡亚组患者ESR、HRCT评分,血清CD59、Gremlin-1明显高于生存亚组(t/P=2.580/0.012、4.546/<0.001、26.388/<0.001、20.842/<0.001)。急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1水平与ESR、HRCT评分呈正相关(r=0.621、0.736、0.705、0.689,P均<0.001)。HRCT评分、CD59、Gremlin-1是高影响急性加重期IIP患者死亡预后的危险因素[OR(95%CI)=1.589(1.258~2.006),1.593(1.252~2.028),1.733(1.249~2.404)]。HRCT评分,血清CD59、Gremlin-1及联合检测评估急性加重期IIP患者预后的AUC分别为0.807、0.779、0.752、0.867,以联合检测的AUC最大(Z=5.183、4.349、5.127,P均<0.001)。结论急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1水平升高,是影响急性加重期IIP患者死亡预后的影响因素,HRCT评分、血清CD59、Gremlin-1联合检测对急性加重期IIP患者死亡预后具有较高的评估价值。

补肾活血方对兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/gremlin表达的影响

目的观察家兔膝骨关节炎模型关节软骨BMP-2/gremlin的表达情况及补肾活血方的调节作用。方法 48只实验用家兔随机分为治疗组、阳性对照组和阴性对照组,每组16只。治疗组和阳性对照组行右膝关节前交叉韧带横断手术(ACLT)造模,阴性对照组行右膝模拟造模手术。治疗组造模后给予补肾活血方灌胃治疗,阳性对照组造模后给予制动干预,阴性对照组行模拟手术后给予生理盐水灌胃。在术后第4、8周各组各处死8只家兔,观察膝关节损伤软骨肉眼改变,取组织标本经石蜡包埋切片后行常规苏木精-伊红染色观察软骨组织的病理变化,Real time PCR法及免疫组化法检测BMP-2、gremlin的表达。结果补肾活血方可减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨形态学损害。治疗组和阳性对照组第4、8周软骨中BMP-2及gremlin表达量明显高于阴性对照组(P<0.05),且阳性对照组较治疗组gremlin同期表达增多(P<0.05);第8周阳性对照组标本中BMP-2表达持续稳定,但gremlin表达水平较第4周明显上升(P<0.05)。结论补肾活血方对兔ACLT模型关节软骨中修复保护性细胞因子BMP-2的表达有上调作用,同时抑制BMP-2拮抗因子gremlin过度表达,对骨关节炎修复有良好的调节作用。

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子β1、骨形成蛋白7及Gremlin表达的影响

目的:观察雷公藤多苷(TW)对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白7(BMP-7)、Gremlin表达的干预,阐明TW延缓肾间质纤维化的机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为实验组及对照组。实验组行高糖高脂饮食,并以链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为DN组和TW治疗组。治疗组经口灌胃TW(50mg/Kg·d),第2、4、8、16周称鼠重并查24h尿蛋白定量及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),第16周处死大鼠抽取血液,观察血清生化指标,摘除肾脏行组织切片,观察肾间质纤维化程度,免疫组化检测肾组织内TGF-β1、BMP-7、Gremlin的表达,借助RT-PCR和Westernblotting方法检测肾组织内TGF-β1、BMP-7、Gremlin核酸及蛋白的表达。结果:TW能减轻模型鼠蛋白尿,改善血清白蛋白,降低血清肌酐、尿素氮。下调模型鼠肾组织内TGF-β1、Gremlin的核酸及蛋白表达,上调BMP-7的核酸及蛋白表达。结论:TW可延缓肾组织纤维化,其机制可能与TW抑制促纤维化TGF-β1及下游细胞因子Gremlin的表达,上调抗纤维化因子BMP-7的表达相关。

Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者中的表达及意义

目的检测Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝脏组织中的表达。方法收集2012年6-12月在第四军医大学唐都医院就诊的21例原发性肝癌及17例肝硬化患者血样,15名健康志愿者作为对照。采用RT-PCR技术检测PBMC中Gremlin-1的表达;免疫组织化学方法检测10例原发性肝癌肝组织中Gremlin-1的表达。组间比较采用ANOVA方差分析。结果 Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者PBMC中表达显著升高,分别为正常对照的3.5及4.4倍,与正常对照相比差异有统计学意义(P=0.003 4,0.002 6);Gremlin-1在肝癌患者肝组织中高表达,阳性率为72.5%,在正常肝组织中低表达或无表达,阳性率为12.1%,差异有统计学意义(P<0.001),Gremlin-1在高分化及低分化肿瘤表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学显示Gremlin-1主要表达在肝肿瘤细胞膜及细胞质,部分表达在血管内皮细胞、成纤维细胞等间质细胞。结论Gremlin-1的表达与肝硬化及原发性肝癌密切相关。

TGF-β_1、BMP-7及Gremlin在小鼠肝纤维化组织中的表达

目的研究四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠肝纤维化组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)、骨形态发生蛋7(BMP-7)及Gremlin的表达,探讨其在肝纤维化发生机制中的作用。方法雄性C57小鼠40只,分为实验组和对照组,每组20只。实验组给予腹腔注射40%CCl_4橄榄油溶液,10 ml/kg;对照组腹腔注射橄榄油溶液,10ml/kg,2次/周,持续8周。苏木精-伊红染色后观察肝纤维化程度,免疫组织化学法染色后分析TGF-β_1、BMP-7及Gremlin在肝纤维中组织中的表达和分布,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测TGF-β_1、BMP-7及Gremlin在正常和纤维化肝组织中m RNA和蛋白的表达。结果 TGF-β_1和Gremlin在肝纤维化组织中m RNA和蛋白表达增强(P<0.05),而BMP-7在肝纤维化组织中表达降低(P<0.05)。结论 TGF-β_1、Gremlin的表达与肝纤维化呈正相关,BMP-7与肝纤维呈负相关(P<0.05)。Gremlin可能通过下调BMP-7的表达,诱导肝纤维化的发生。

腹膜透析患者透出液Gremlin水平对腹膜功能改变的影响

目的 观察腹膜透析患者透出液Gremlin的水平变化,探讨其对腹膜功能改变的影响.方法 收集2010年1月～2015年1月新乡医学院第一附属医院肾内科规律随访的持续不卧床腹膜透析（continous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD）患者78例,采用ELISA方法检测不同时间点透出液中Gremlin和TGF-β1的水平,同时定期评价腹膜转运功能,分析Gremlin对腹膜功能改变的影响.结果 ①随着透析龄延长,腹膜平衡试验结果显示低转运及低平均转运比例逐渐减少,部分患者腹膜功能逐渐转化为高转运或高平均转运;和初始相比,腹膜平衡试验各比率在随访3年、4年、5年时x2值分别为12.219、9.154和10.707,P值分别为0.007、0.027和0.013,均有明显统计学差异,说明腹膜溶质转运功能逐渐增强.②腹膜透析1个月,透出液中Gremlin和转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）水平均较低,分别为（3.54±2.51）pg/mL和（4.04±2.58） pg/mL,随着透析龄的延长,二者水平均逐渐升高,5年时可达到（232.71±55.01）pg/mL和（367.25±182.34） pg/mL,随访6月、1年、2年、3年、4年、5年的数据分别和腹膜透析1个月比较,t值分别为-5.956,-11.303,-22.187,-21.502,-34.255,-38.759,P值均为0.000,有明显统计学差异.③透出液中Gremlin和TGF-β水平与透析龄长短呈明显正相关,相关系数分别为0.744和0.873,P值分别为0.029和0.017.结论 Gremlin可能参与了腹膜透析患者腹膜纤维化的发生,从而导致腹膜溶质转运功能发生改变.干预Gremlin表达有望为抑制或逆转腹膜纤维化提供理论依据.

雷公藤多苷对糖尿病肾病患者血清TGF-β1 BMP-7 Gremlin的影响

目的观察糖尿病肾病血清转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白7(BMP-7)、Gremlin变化及雷公藤多苷(TW)对它们的影响。方法符合2型糖尿病肾病(DN)患者53例,随机分为TW治疗组(n=28)和苯那普利治疗组(n=25),TW组予以TW 60 mg/d治疗,苯那普利组予以苯那普利20 mg/d治疗,分别于4周、12周、24周观察24 h尿蛋白,尿NAG及血清TGF-β1、BMP-7、Gremlin的变化。结果 DN患者血清TGF-β1、Gremlin浓度较正常对照组升高,BMP-7浓度下降(P<0.01)。血清TGF-β1与肾小球率过滤(eGRF)呈负相关(r=-0.216,P<0.05)、糖化血红蛋白(HbAlc)(r=0.528,P<0.01)、24 h尿蛋白呈正相关(r=0.851,P<0.01)。血清Gremlin与TGF-β1(r=0.938,P<0.01)、HbAlc(r=0.629,P<0.01)呈正相关;血清BMP-7与Gremlin(r=-0.918,P<0.01)、24 h尿蛋白(r=-0.887,P<0.01)呈负相关。到达随访终点TW组尿蛋白、尿NAG、血清TGF-β1、Gremlin较基线水平明显下降,BMP-7水平升高(P<0.01);苯那普利组尿NAG和血清TGF-β1较基线水平明显下降(P<0.01),BMP-7水平升高(P<0.01);尿NAG在随访期间TW组下降幅度大于苯那普利组(P<0.01),其余指标在2组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TW能够减少DN尿蛋白的排泄,降低血清TGF-β1、Gremlin浓度,提高血清BMP-7水平,有助于保护肾功能。

Gremlin1在胆囊癌中的表达及临床意义

目的 探讨Gremlin1在胆囊癌中的表达及临床意义。方法 收集胆囊手术后确诊为胆囊癌的75例患者的手术标本和临床资料,采用免疫组织化学法检测Gremlin1和Ki-67的表达情况,采用Kaplan-Meier法对随访患者进行生存分析,并分析Gremlin1表达与生存预后的关系。结果 免疫组化结果显示Gremlin1在部分胆囊癌及正常胆囊组织中均有表达。Gremlin1在胆囊癌中的阳性率为50.67%(38/75)在胆囊正常组织中的阳性率为15.00%(3/20)。胆囊癌及正常胆囊组织Gremlin1表达差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、性别之间Gremlin1表达差异均无统计学意义(均P> 0.05),而在淋巴结是否转移、肿瘤分期、有无合并上皮内瘤变中Gremlin1表达差异均有统计学意义(均P <0.05)。Gremlin1表达阳性的胆囊癌患者存活时间明显短于Gremlin1表达阴性的患者。结论 Gremlin1蛋白在胆囊癌组织中高表达,Gremlin1阳性提示可能为胆囊癌预后不良的一个因素。

Gremlin研究进展

Gremlin是骨形态形成蛋白(BMP)拮抗剂家族的新成员,在脊椎动物肢体的胚胎发育和肾脏、肺的形态形成过程中起重要的作用。Gremlin分为Gremlin1、Gremlin2、Gremlin3三种,结构中均具有半胱氨酸结,Gremlin通过与BMP2和BMP4的直接结合阻断BMP作用的信号通路。Gremlin还可能参与调节中脑、卵泡、视神经细胞的发育和成骨细胞、前脂肪细胞的分化,并且可能与糖尿病、肿瘤、骨关节炎等疾病的发生相关。

Gremlin在纤维化疾病中的作用

Gremlin是骨形态发生蛋白内源性拮抗剂,对胚胎发育、生长和细胞分化具有重要的调节作用。本文就Gremlin的结构功能及在纤维化疾病中的作用作一综述,提示Gremlin可能是重要促纤维多肽,通过促进上皮--间充质细胞转分化,拮抗BMP信号通路参与纤维化疾病发病。

Gremlin与上皮细胞转分化研究进展

器官纤维化发生和发展过程中，上皮细胞转分化是重要的发病机制之一。Gremlin基因首先从爪蟾中枢神经脊中克隆出来，是半胱氨酸结（cysteinenot）超家族成员之一，是骨形态形成蛋白（BMP）内源性拈抗剂，在胚胎发育、生长和分化过程中具有重要调节作用。Gremlin可能与上皮细胞转分化相关，本文就Gremlin在上皮细胞转分化中作用的最新研究综述如下。

不同低氧时间对小鼠肺组织Gremlin mRNA表达的影响

目的:观察低氧对小鼠肺组织中骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein,BMP4)内源性拮抗蛋白基因Gremlin mRNA表达的影响。方法:实验选用5周雄性同种系BMP4+/+C57BL/6J纯合子小鼠将其完全随机分为5组:即正常对照组(n=3)、低氧1天组(n=3)、低氧3天组(n=3)、低氧7天组(n=4)和低氧21天组(n=3)。采用实时定量PCR检测Gremlin mRNA表达水平;BMP4+/-C57BL/6J杂合子小鼠分为常氧1天组和低氧1天组。结果:①BMP4+/C57BL纯合子小鼠低氧1天组Gremlin mRNA相对表达量(2.8±0.3)较正常对照组升高(P<0.05)。②低氧3天组,低氧7天组,低氧21天组GremlinmRNA相对表达量差异有统计学意义[(1.9±0.19),(2.2±0.49),(0.26±0.23),P<0.05]。③BMP4+/-C57BL/6J杂合子小鼠常氧1天组Gremlin mRNA相对表达量为(0.92±0.06);低氧1天组Gremlin mRNA相对表达量为(1.04±0.34)(P<0.05)。低氧第一天表达明显增加,低氧21天FSN Gremlin mRNA的表达明显下降,而且低于正常表达;常氧及低氧状态下,BMP4+/+C57BL/6J纯合子小鼠和BMP4+/-C57BL/6J杂合子小鼠肺组织内Gremlin mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Gremlin mRNA的表达随小鼠缺氧的时间呈先上升后下降的趋势,Gremlin这种BMP内源性拮抗蛋白在低氧状态下mRNA的表达上调依赖BMP4 mRNA的表达上调,随着低氧时间的延长Gremlin可能在低氧性肺动脉高压发病机制中起着不同的调节作用。

Gremlin 1在糖脂代谢及其相关疾病中的研究进展

Gremlin 1是转化生长因子β超家族成员,早期研究发现其参与了胚胎的形成、发育及分化,具有抑制骨和软骨形成的作用。在糖代谢中,Gremlin 1可以拮抗胰岛素;在脂代谢中,Gremlin 1可以调节人脂肪细胞的形成和分化,并抑制白色脂肪棕色化。本文就近年来Gremlin 1在糖脂代谢及相关疾病的研究进展进行综述,为治疗糖脂代谢相关疾病提供理论依据。

瘢痕疙瘩及正常皮肤中骨形态发生蛋白7、Gremlin、血管内皮生长因子、高迁移率族蛋白B1的表达

背景:瘢痕疙瘩的发生是创伤修复的纤维化过程,多种纤维化相关细胞因子参与其发生发展。骨形态发生蛋白7、Gremlin与高迁移率族蛋白B1在其他器官纤维化中发挥重要作用,而在瘢痕疙瘩组织中的研究少见报道。目的:分析骨形态发生蛋白7、Gremlin(骨形成蛋白拮抗剂家族成员)、血管内皮生长因子与高迁移率族蛋白B1在瘢痕疙瘩发病机制中的作用和意义。方法:采用免疫组织化学方法及Wsetern Blot法检测骨形态发生蛋白7、Gremlin、血管内皮生长因子与高迁移率族蛋白B1在20例瘢痕疙瘩组织和20例正常皮肤组织中的分布及蛋白水平的表达,并对瘢痕疙瘩组织中骨形态发生蛋白7与Gremlin、血管内皮生长因子与高迁移率族蛋白B1的表达情况进行相关性分析。结果与结论:与正常皮肤组织相比,Gremlin、血管内皮生长因子与高迁移率族蛋白B1在瘢痕疙瘩组织中表达呈显著性上调(P<0.01),而骨形态发生蛋白7的表达呈显著性下调(P<0.01),Gremlin与骨形态发生蛋白7在瘢痕疙瘩中的表达呈显著性负相关(r=-0.539,P<0.05)。血管内皮生长因子与高迁移率族蛋白B1在瘢痕疙瘩中的表达呈显著性正相关(r=0.560,P<0.05)。说明Gremlin的过度表达和骨形态发生蛋白7的表达下调,以及高迁移率族蛋白B1与血管内皮生长因子的高表达可能共同参与了瘢痕疙瘩的纤维化病理过程。

Gremlin基因与纤维化疾病关系的研究进展

Gremlin基因属于转化生长因子β(TGF-β)超家族,其编码的蛋白质具有高度保守性,是骨形态形成蛋白(BMP)拮抗剂家族成员。Gremlin基因最早从蟾蜍中枢神经脊中克隆出来,其编码的蛋白有三种,分别命名为Gremlin-1、Gremlin-2和Gremlin-3。Gremlin基因在肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化、心纤维化、胰腺纤维化、晶状体及视网膜纤维化等疾病的发生、发展中均起重要作用,其机制多与BMP/Smads信号传导通路、TGF-β/Smads信号传导通路有关,主要通过影响Smads蛋白胞内信号通道影响纤维化的发生,与Gremlin-VEGFR2轴、NF-κB信号通路等关系密切。在促纤维化发生过程中,Gremlin可能依赖于应激活化蛋白激酶途径的激活,受miR-27b/30-UTR的正向调节、抗纤维化趋化因子10的负向调节、多糖硫酸乙酰肝素的适当调节;在眼视网膜病变的发生过程中,Gremlin可能受甲状旁腺激素相关蛋白水平的正向调节。

gremlin1基因的诱变及其真核表达载体的构建

目的：分别构建全长、无信号肽、无核定位系统和既无信号肽也无核定位系统的大鼠gremlin1基因的真核表达载体.方法：采用PCR技术获得全长大鼠gremlin1基因（gremlin1）和无信号肽的gremlin1基因（gremlin1-DS）,以全长gremlin1为模板运用重叠延伸PCR获得无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DN）,继而在gremlin1-DN的基础上去掉信号肽获得既无信号肽也无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DS-DN）.分别将4组重组质粒转染到非洲绿猴肾细胞株cos7中,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测gremlin1基因的表达.结果：构建的真核表达载体pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN和pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN经PCR与酶切鉴定显示目的片段大小与预期结果一致；经DNA测序显示pEF1/Myc-His C-gremlin1中的gremlin1片段与Gene Bank中的gremlin1序列（NM-019282）完全吻合；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS中的gremlin1基因缺失信号肽序列；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN中的gremlin1片段实现了4个定点突变：433-435位的AAG（赖氨酸）、487-489位的CCA（脯氨酸）、490-492位的CCC（脯氨酸）、496-498位的AAG（赖氨酸）均突变为TTC（苯丙氨酸）；pEF1/Myc-His Cgremlin1-DS-DN中的gremlin1基因既缺失信号肽序列又实现了4个定点突变.将它们分别转染到cos7细胞后,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测显示,4者均能在细胞内成功表达.结论：成功构建了pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-HisC-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN的真核表达载体.

Effect of Danshao Huaxian capsule on Gremlin and bone morphogenetic protein-7 expression in hepatic fibrosis in rats

AIM: To observe the effect of Danshao Huaxian capsule (DHC) on the expression of Gremlin and bone morphogenetic protein-7 (BMP-7) in the liver of hepatic fibrosis rats.

大鼠gremlin1真核表达载体的构建及表达

构建大鼠gremlin1的真核表达载体pcDNA-gremlin,并观察其在真核细胞中的表达。从大鼠脑组织中提取mR-NA通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(nest-PCR)获得编码gremlin1的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染HSC-T6细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内grem-lin1的表达。结果显示,构建了大鼠gremlin1的真核表达载体,转染HSC-T6细胞培养48 h后,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染HSC-T6细胞内gremlin1的表达显著增高。成功构建了真核表达载体pcDNA-gremlin,为研究gremlin在大鼠肝纤维化发生发展过程中的作用及作用机制奠定了基础。