人工诱导耐恩氟沙星金黄色葡萄球菌grlA和gyrA基因突变研究

通过恩氟沙星人工多步诱导标准金黄色葡萄球菌 2 80 0 1产生MIC值为 4～≥ 1 2 8μg/ml的耐药变异株 ,选其 3株提取染色体DNA ,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增 ,产物与pMD1 8 T载体连接 ,转化至JM1 0 9大肠埃希氏菌感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,低水平 (MIC≤ 1 6μg/ml)的耐药突变株只发生grlASer80 (TCC)→Phe (TGC)或grlA ,Ser80 (TCC)→Tyr (TAC)点突变 ,高水平 (MIC≥1 2 8μg/ml)的耐药突变株需要grlASer80 (TCC)→Phe (TGC)和gyrASer84(TCA)→Leu (TTA)等两个位点的突变。三株耐药株均发生grlASer80→Tyr (Phe)点突变 。