用α-半乳糖苷酶制备可供输注的人通用型O型红细胞

研究的目的是将人群中28％的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、 恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求。用α-1.3半孔糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索 改造一个使用单位B型血红细胞(100 ml)的最佳条件。结果实现了在密闭、无菌条件下使用50 U／ml工具酶,pH 5.6,26℃ 2小时,进行B→O的血型改造。结论:改造后的通用型O型血红细胞符合生物制品检定规程的要求, 并可在4℃存放21天。

O型悬浮红细胞ABO抗体效价研究

目的:测定O型悬浮红细胞ABO抗体效价,探讨未交叉配合O型悬浮红细胞紧急输注的安全性和可行性。方法:采集100份O型全血,分离制备成悬浮红细胞和血浆制品,测定全血、悬浮红细胞储存第1、7、14 d时的IgM、IgG抗A、抗B抗体效价,并进行比较。结果:全血IgM抗体效价主要分布于4～128,IgG抗体效价主要分布于16～256;悬浮红细胞IgM抗体效价主要分布于4～32,IgG抗体效价主要分布于8～128,与全血相比均明显下降(P<0.01)。悬浮红细胞储存第1、7、14 d间抗体效价虽有所下降,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:O型悬浮红细胞的ABO抗体效价较低,推断其未经交叉配合的紧急输注也是安全的。

B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究

目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植患者ABO血型抗体的监测

目的:监测ABO血型不合造血干细胞移植患者IgM型和IgG型ABO血型抗体的变化,研究这些变化在移植患者血型转变中的作用。方法:用凝聚胺法和微柱凝胶法监测32例移植患者ABO血型,IgM型和IgG型ABO血型抗体的变化。结果:32例ABO血型不合患者血型全部转变为供者型,造血重建时间结果分析表明血型不合对于粒系和血小板的恢复无影响;患者血型转为供者血型后,其血清中缺乏相对应的抗体;32例ABO血型不合患者中有6例供受者移植模式为A→O,其中有3例发生PRCA,且均检出IgG型抗A抗体,其余29例未检测到IgG血型抗体;3例PRCA患者红系造血恢复时间明显延长。结论:IgG型ABO血型抗体可能会抑制ABO血型不合骨髓移植患者的红系分化成熟,在PRCA的发生中可能起重要作用。监测ABO血型不合移植患者体内的ABO血型抗体变化可指导输血治疗,避免溶血性输血反应。

O型洗涤红细胞残留ABO血型抗体检测及非O型患儿输注安全性观察

目的 采用多种血型血清学方法检测O型洗涤红细胞中残留ABO血型抗体（IgM抗-A,抗-B;IgG抗-A和抗-B）的含量,观察非O型患儿输注O型洗涤红细胞的安全性.方法 取O型洗涤红细胞上清,首先采用盐水试管法检测其中IgM抗-A、抗-B含量.再用凝聚胺法、微柱凝胶法、手工抗人球蛋白法检测其中IgG抗-A、抗-B含量.选取非O型患儿输注O型洗涤红细胞者（异型组）与年龄体重相当的输等量同型洗涤红细胞的患儿（同型组）,分别比较2组患儿输血前后血红蛋白上升幅度、总胆红素和直接胆红素水平、直接coombs试验结果.结果 共检测O型洗涤红细胞上清液597份,盐水试管法在室温及4℃ 条件下均未观察到凝集现象,显微镜下也未观察到凝集现象.凝聚胺法、微柱凝胶法、手工抗人球蛋白法检测IgG抗-A和抗-B均为阴性.2组患儿输血前后血红蛋白上升幅度、总胆红素和直接胆红素水平差异无统计学显著性意义（t值分别为0.19,0.22和0.13,P＞ 0.05）,直接coombs试验均为阴性.结论 血型血清学方法无法检出O型洗涤红细胞中残留ABO血型抗体.非O型患儿输注O型洗涤红细胞是安全的.

ABO血型反定型梯形微板法的建立

目的建立梯形微板ABO血型反定型检测方法。方法随机选用常规A、B、O、AB型血样各8份。运用正交设计原理选择血浆稀释度、红细胞浓度、反应温度、静止时间4个参数的最佳条件;采用混合血样倍比稀释,确定凝集与非凝集灰区值。根据已确定的最佳条件和灰区值,进行重复性试验、灵敏度试验、准确性试验、脂血干扰试验、溶血干扰试验,并检测6份ABO亚型血样AM、AX、A2B、A3B、AXB、BM和5份含不规则抗体血样抗-M、抗-N、抗-P1、抗-Leb、抗-HI,以评价对特殊血样的检出能力。结果重复性符合率100%。灵敏度可达到与试管法相同效价的检出能力。准确性达99.99%。47份不同脂血程度血样抗干扰试验一次判读正确率100%。溶血干扰试验在Hb≤20g/L时,对梯形微板法试验结果无明显影响,在严重溶血情况下(Hb>20g/L),对凝集端无影响,对非凝集端有影响。对11份特殊血样均有较好的检出能力。结论梯形微板法不仅能够很好地完成普通血样ABO反定型的检测,还具有提高对弱凝集血样检测灵敏度的优势,进而提高试验的准确性。

通用O型全血的初步研究

目的探讨冰冻干燥红细胞膜的制备技术及通用O型去除血型抗体全血的可行性。方法将A型及B型红细胞膜经过冰冻干燥处理后,加入O型全血中,经反应后测定血浆中血型抗体效价,并检测红细胞结构及功能,检测血浆中凝血因子活性变化。结果经过冰冻干燥处理后,红细胞膜仍具有抗原性,可有效降低血浆中的血型抗体效价,而全血中红细胞的变形指数、ATP含量与反应前差异无显著性,反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较,差异无显著性。结论尽管红细胞膜在体内是否产生大量抗体及其清除过程等尚需进行动物实验确定,但使用冰冻干燥红细胞膜制备通用型血液过程简便易行,具有进一步的研究价值。

A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立

目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用α-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的α-N-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1 ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。

化学材料修饰红细胞非ABO系统血型抗原的研究

目的 考察甲氧基聚乙二醇 (mPEG)衍生物与红细胞膜蛋白共价结合 ,遮蔽红细胞上的非ABO系统的血型抗原的效果。方法 选择 3种端基的mPEG衍生物 (mPEG BTC、 NHS、 ALD)修饰红细胞 ,分别观察它们对红细胞抗原性、形态结构及功能的影响。结果 携带BTC端基的mPEG遮蔽抗原效果较好 ,并对红细胞结构、功能、变形性无影响 ;而且修饰后的红细胞无叠连现象 ,红细胞沉降率 (ESR)有所降低。结论 mPEG修饰后的红细胞在解决临床输血中经常遇到的偏型、血型。

ABO血型抗体吸附剂:冻干红细胞膜的初步研究

目的制备冰冻干燥红细胞膜,探索其作为ABO血型抗体吸附剂去除血型抗体、制备通用型红细胞的可行性。方法收集A、B型红细胞膜,作冰冻干燥处理,与O型血浆中血型抗体反应后,检测血浆中抗体效价,评价其对血浆抗体的吸附效果;检测红细胞结构、功能及血浆中凝血因子活性变化,评价冻干红细胞膜与红细胞及凝血因子的兼容性;采用离心的方法去除残留的冻干红细胞膜。结果冰冻干燥红细胞膜上的抗原可有效吸附血型抗体、降低血浆中的血型抗体效价,全血中红细胞的变形指数、ATP含量,与反应前比较差异无统计学意义(P>0.05),反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。采用离心法可去除冻干红细胞膜,清除率约为77%。结论冰冻干燥的红细胞膜保持了很好的抗原性,作为ABO血型抗体的吸附剂能够有效去除ABO血型抗体;冰冻干燥红细胞膜不影响其中红细胞和凝血因子的理化性状和生物活性,并可通过离心的方法去除。

孕妇外周血中胎儿红细胞比例对新生儿ABO溶血病的产前诊断价值

目的评价流式细胞仪检测孕妇外周血中胎儿红细胞比例对新生儿ABO溶血病的产前诊断价值。方法对27例丈夫为A型、B型或AB型的O型血孕妇,初次产前检查时抽取外周血,应用流式细胞仪检测胎儿红细胞比例,同时应用新鲜正常脐血作校正。新生儿出生后采集脐血,血清学试验明确新生儿血型及有无溶血(HDN),以最大(灵敏度+特异度)确定孕妇外周血胎儿红细胞比例诊断HDN的最佳临界点。结果(1)新生儿脐血证实为A/B型血,发生HDN者为溶血组,共10例;新生儿未发生HDN者为无溶血组,包括7例脐血证实新生儿为A/B型血(无溶血组1)及10例脐血证实新生儿为O型血(无溶血组2)。(2)胎-母红细胞比例经校正后,溶血组为2.312±0.303,明显低于无溶血组7.168±1.050(P<0.01),而校正前两者差异无显著性(P>0.05)。无溶血组1和无溶血组2的胎-母红细胞比例,无论校正与否,两者差异均无显著性(P>0.05)。(3)校正胎-母红细胞比例诊断HDN的最佳临界点为每10000个孕妇血细胞中3.035个胎儿红细胞。结论溶血组的校正胎-母红细胞比例明显低于无溶血组。每10000个孕妇血细胞中3.035个胎儿红细胞可作为产前诊断新生儿ABO溶血病的最佳临界点。

Cromer血型系统抗-IFC的鉴定及特征分析——附1例报告

目的探讨Cromer血型系统抗体抗-IFC的鉴定方法并分析其特性。方法使用试管法鉴定患者ABO血型,使用Rh分型卡鉴定患者Rh血型;使用抗球微柱凝集法对患者血清进行不规则抗体筛选及抗体鉴定;患者血清分别与用抗胰蛋白酶、胰酶和菠萝酶处理的谱细胞进行反应,初步判定其抗体的特异性;用CD55重组蛋白对患者血清进行中和试验,确定其特异性;对Cromer血型系统调控基因DAF进行测序;用流式细胞术对患者红细胞表面CD55抗原表达量进行检测。结果患者血型为B型,CcDEe;患者血清与未经酶处理谱细胞反应凝集强度均为4+;与胰酶和菠萝酶处理后的谱细胞均为4+;与二硫苏糖醇处理谱细胞反应强度减弱至2+^(s);与抗胰蛋白酶处理后谱细胞反应为阴性,其血清中的抗体可被CD55重组蛋白中和,DAF测序无发现突变位点;流式显示该患者CD55抗原存在缺失。结论该抗体为Cromer血型系统高频抗体抗-IFC,考虑为患者在患病期间因消化道疾病因素导致Cromer血型抗原减弱。

重庆地区献血人群Kidd、Duffy、MNS、Kell、Diego血型系统的低频抗原分布频率

目的了解重庆地区献血者中的红细胞稀有血型表型分布频率特点,为建立本地区稀有血型供者资料库提供基础数据。方法采用尿素溶血试验对重庆市血液中心2020年12月~2021年5月的14805(人)份无偿献血者标本做Kidd血型系统的Jk(a-b-)表型筛选,并用盐水凝集试验对筛选样本做确认试验;采用间接抗球蛋白试验对1466(人)份O型献血者标本做Duffy血型系统Fy(a-)、MNS血型系统s-及Kell血型系统k-表型筛选;采用凝聚胺试验对856(人)份献血者标本做Diego血型系统Di(b-)表型筛选,并用抗球蛋白试验确认。结果重庆地区无偿献血者中Jk(a-b-)表型比例0.0203%(3/14805);O型献血者中的Fy(a-b+)及S+s-表型比例均为0.1364%(2/1466);未见k-表型;Di(a+b-)表型的比例为0.2336%(2/856)。结论重庆地区献血人群上述5个血型系统的稀有血型抗原分布频率有自身地域特点。

中国彝族、藏族和满族中Kidd、Duffy、Kell、Xg、Rh、Diego和P血型系统的分布

本文报道了中国彝族、藏族和满族的Kidd、Duffy、Kell、Xg、Rh、Diego和P红细胞血型系统的分布和血型基因频率。彝族210人全部是Rh(+)个体,藏族人数中有0.5％为Rh(-)个体。满族人数中Rh(-)者占0.95％;Xg(a+)频率明显低于白种人。Jk^a基因频率分别是:彝族0.4144,藏族0.4447,满族0.4262;Xg^a基因频率,藏族0.4030,满族0.3887;Fy^a基因频率在三个民族中都比较高,彝族0.9628,藏族0.9498,满族0.9405;Di^a基因频率则非常低,藏族0.0255,满族0.0168;在藏族中,P_1和K基因频率分别是0.2138和0.0051;满族中P_1基因频率为0.1577。

双重滤过血浆成分分离法用于ABO血型主要不合非亲缘骨髓移植

目的观察双重滤过血浆成分分离法在ABO血型主要不合非亲缘骨髓移植中的疗效。方法采用双重滤过血浆成分分离法去除体内血型抗体,预防5例ABO血型主要不合非亲缘骨髓移植并发溶血反应和纯红再障。结果受者一次性双重滤过后,全部患者血型抗体均≦1:16,输注血型主要不合骨髓过程中仅1例发生轻度短暂急性溶血反应,无一例发生迟发性溶血反应和纯红再障,全部植入成功。结论双重滤过血浆成分分离法可有效预防ABO血型主要不合骨髓移植并发溶血反应和纯红再障。

儿童紧急抢救时输注O型红细胞的可行性

目的探讨儿童紧急抢救时输注O型红细胞的可行性.方法将60例紧急抢救输血患儿,采用O型悬浮红细胞行微柱凝胶法及凝聚胺法交叉配血,根据患儿年龄进行分组,≥3岁为A组(16例)、≥1岁为B组(14例)、≥6个月为C组(13例)、<6个月为D组(17例),对4组患儿微柱凝胶法、凝聚胺法下主侧配血、次侧配血凝集情况进行统计分析.结果本组60例患儿中O型共16例,交叉配血次侧无凝集无溶血,主侧无凝集无同溶血.其余44例非O型血患儿交叉配血次侧存在不同程度凝集,主侧均无凝集.4组患儿使用的交叉配血方法不同,次侧凝集强度也不同,其中A组、B组、C组、D组凝聚胺法配血次侧弱、强凝集率分别为0、75.00%,0、71.43%,15.38%、53.85%,35.29%、41.17%;微柱凝胶法配血次侧弱、强凝集率分别为0、75.00%,0、71.43%,0、69.23%,17.65%、58.82%.C组、D组凝聚胺法次侧弱、强凝聚率与微柱凝胶法比较差异有统计学意义(P<0.05).结论儿童患者紧急抢救时对其血型无法确定或交叉配血标本无法及时送达的情况下,可给予O型洗涤红细胞输注;若无法获得O型洗涤红细胞,则根据患儿年龄给予O型悬浮红细胞输注,并使用白细胞滤器,且微柱凝胶法在幼儿患者中应用安全性更高.

非O型患者应急输注O型洗涤红细胞调查分析

目的探讨在非O型血液库存不足的情况下,非O型患者输注O型洗涤细胞的应用可行性。方法回顾性分析2019年10月28日至2020年3月23日某院102例患者输注O型红细胞的资料。根据患者是否为O型血,分为同型输注组(O型血组,n=51)和异型输注组(非O型血组,n=51),同型输注组为O型患者输注O型去白悬浮红细胞,异型输注组为A型、B型或AB型患者输注O型洗涤红细胞。统计分析两组患者红细胞输注疗效、输血不良反应发生率、血型分布、输注适应症和输注量等。结果同型输注组有效率为90.20%,异型输注组为94.12%,输注有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。同型输注组输血不良反应为3例(5.88%),异型输注组为0例,输血不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。同型输注组:O型51例,人均用量(2.65±1.07)U;异型输注组:人均用量(2.53±0.83)U,其中A型26例,人均用量(2.82±0.91)U,B型21例,人均用量(2.43±0.88)U,AB型4例,人均用量(1.88±0.25)U。结论血源紧张时,非O型患者输注O型洗涤红细胞是可行的。

血液成分二次制备后相关参数变化

目的 对成分血二次制备后的相关参数变化进行研究,旨在进一步提升血液成分产品质量。方法 选择不同的离心条件用于初次成分血去白细胞悬浮红细胞的制备,并对其进行质量检测,然后以去白细胞悬浮红细胞为二次制备的起始血液,通过ACP215红细胞处理系统去制备机制洗涤红细胞成分血,并对其进行质量检测,通过对成分血制备参数的变化进行观察研究比较,并从中进行优化调整。结果 不同的离心条件所带来的离心效果相当时,所分离制备的去白细胞悬浮红细胞和冰冻血浆初级血液成分,其容量、血红蛋白、血细胞比积、白细胞残留量等质量控制项目,均符合国家相关标准要求;同时以初次制备的去白细胞悬浮红细胞为起始血液制备的机制,洗涤红细胞二级血液成分,其容量、血红蛋白、上清蛋白含量等质量控制项目,除容量超出标准7~14 mL外,其余均符合国家相关标准要求,但导致容量超标的原因及采取的解决方法可控制容量达到标准范围,且在红细胞回收率和血浆蛋白清除率上,二者可分别达到75%和99%的水平。结论 本实验初次制备与二次制备的血液成分之间有着一定的关联,但血液成分二次制备可视实际情况进行相关参数的灵活调整,以确保制备的成分血产品质量符合国家相关标准要求,以及临床治疗效果和安全。

生理盐水洗涤DIC患者凝集红细胞用于血型鉴定的效果评价

目的探讨弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)患者凝集红细胞生理盐水洗涤后血型鉴定的效果。方法选择浙江省杭州市第三人民医院2019年7月—2022年7月由于自身红细胞凝集导致血型鉴定困难的24例DIC患者为研究对象,ABO血型以基因分型结果为标准,生理盐水洗涤凝集红细胞前后手工方法(试管法和微胶柱法)ABO血型鉴定结果与标准组比较。结果凝集红细胞洗涤前ABO血型2例正反定型符合,与标准结果比较,其差异具有统计学意义(P<0.05)。生理盐水洗涤后的红细胞均匀散开,24例ABO血型检测结果正反定型符合,其中A型8例,B型5例,O型9例,AB型2例。洗涤后血型结果与标准结果比较,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用生理盐水洗涤凝集红细胞的方法,血型鉴定效果良好,具有明显检测优势,为临床紧急用血提供了安全保障。

洗涤红细胞和去白悬浮红细胞输注治疗自身免疫性溶血性贫血的效果

目的:探讨洗涤红细胞和去白悬浮红细胞输注治疗自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的效果。方法:回顾性选取2020年3月—2023年3月蚌埠医学院第一附属医院收治的64例AIHA患者作为研究对象。根据治疗方法的不同将其分为试验组和对照组,各32例。对照组输注去白悬浮红细胞,试验组输注洗涤红细胞。比较两组输血后24 h临床疗效,输血前、输血后24 h相关指标,输血反应。结果:试验组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。输血后24 h,两组血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)升高,网织红细胞百分比(Ret)、总胆红素(TBIL)水平降低,试验组Hb、RBC高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组输血反应发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.016,P>0.05)。结论:对AIHA患者而言,在输血治疗中输注洗涤红细胞的总体有效率高于输注去白悬浮红细胞,并且Hb和RBC的提升效果更加明显。