Influence of edaravone on growth arrest and DNA damage-inducible protein 34 expression following focal cerebral ischemia-reperfusion in rats

Objective:To investigate the influence of edaravone on the expression of growth arrest and DNA damage-inducible protein 34(GADD34).Methods:A total of 108 healthy male Sprague-Dawlcy rats were randomly divided into sham operation group,model group and edaravone.group(36 cases for each group).Transient focal cerebral ischemia was induced by middle cerebral artery occlusion for 2 h followed by reperfusion in Sprague-Dawlev rats.Then.GAOD34 expression was measured with immunohistochemistry at different time-points after reperfusion in the peri-infarct regions of all rats.Results:The GADD34 expression was detected in the peri-infaret regions of rats 1 h after reperfusion,which reached its peak 24 h after reperfusion.And edaravone could significantly down-regulate the GAOD34 expression.Conclusions:Edaravon could down-regulate GADD34 expression,which suggests that edaravone may exert an important function in inhibiting endoplasmic reticulum stress reaction by scavenging free radicals in the upper stream.

SOCS-3、Gadd45β在脓毒症相关性脑病患儿中的表达及预测价值

目的:分析细胞因子信号传导抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)、生长抑制与DNA损伤修复相关基因β(growth arrest and DNA-damage inducible geneβ,Gadd45β)在脓毒症相关性脑病患儿中的表达及预测价值。方法:选取2021年1月—2023年6月贵州省人民医院收治的22例脓毒症相关性脑病患儿作为研究组,同期选取本院42例脓毒症未合并相关性脑病患儿作为对照组。检测并比较两组肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、免疫功能指标及SOCS-3、Gadd45β表达情况,分析SOCS-3、Gadd45β对脓毒症相关性脑病的预测价值。结果:研究组TNF-α、IL-6水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)^(+)均低于对照组,CD8高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组SOCS-3、Gadd45β表达情况均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析,SOCS-3、Gadd45β联合预测价值最高。结论:脓毒症相关性脑病患儿炎症反应加重,免疫水平降低,SOCS-3、Gadd45β呈现高表达,两者对脓毒症相关性脑病均有一定诊断价值,且联合诊断临床意义更明显,为临床治疗提供新的靶点和策略。

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α在肝再生及肝病中的研究进展

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)是一种应激诱导蛋白,它可诱导Gadd45α基因的表达。GADD45α在再生肝及肝硬化、肝癌、肝衰竭等肝病中表达显著上调,与多种肝病发生发展及预后密切相关。GADD45α蛋白通过与其他蛋白相互作用,在调控细胞周期、维持基因组稳定、诱导细胞凋亡等方面发挥重要作用。以下我们综述了GADD45α与肝再生关系的研究进展,为进一步了解肝再生与肝脏疾病的发生机制以及治疗和预防肝病奠定基础。

下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β表达对PC9肺腺癌细胞的影响

目的:探讨下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β(growth arrest and DNA damage inducible protein 45β,GADD45β)表达对PC9肺腺癌细胞及吉非替尼敏感性的影响。方法:设计并合成GADD45β基因小干扰RNA(GADD45β-small interfering RNA,GADD45β-siRNA)序列,通过慢病毒介导将GADD45β-siRNA转入PC9肺腺癌细胞中,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western印迹检测转染前后PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA及蛋白水平,采用膜联蛋白V(annexin V)-别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)双染流式细胞法检测转染后细胞凋亡水平;通过流式细胞术检测转染后细胞内DNA含量,计算转染后细胞各周期时相百分率,分析转染对细胞生长周期的影响;通过计数克隆形成数检测RNA干扰对细胞成瘤能力的影响;采用MTT法检测PC9肺腺癌细胞的吉非替尼半数抑制浓度IC50。结果:筛选出5'-AAATCCACTTCACGCTCAT-3'为GADD45β基因RNA干扰的有效序列。转染GADD45β-siRNA 48 h后,qRT-PCR和Western印迹结果显示PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且成瘤克隆数明显减少(P<0.05);PC9肺腺癌细胞位于S期及G2/M期细胞增多(P<0.05),吉非替尼的IC50明显下降(P<0.05)。结论:PC9肺腺癌细胞转染GADD45β-siRNA后,能成功下调GADD45β基因的mRNA和蛋白表达;下调GADD45β表达可降低PC9肺腺癌细胞的克隆形成能力,促进细胞凋亡;下调GADD45β表达可明显提高PC9肺腺癌细胞对吉非替尼的敏感性。

生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α在心血管疾病中的研究进展

哺乳动物细胞受到DNA损伤刺激时,生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)可与多种生物大分子相互作用在细胞周期阻滞、DNA损伤修复、细胞增殖、凋亡等细胞应答反应中发挥重要的调控作用。GADD45α表达调控的信号通路与肿瘤、心血管疾病等多种疾病的发生、发展密切相关。阐明GADD45α的功能及其在疾病中的作用机制,有助于了解许多疾病的发病机制,为诊断及治疗提供新的靶点。

生长抑制和DNA损伤诱导基因45β在足细胞损伤中的作用及机制

目的:研究生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45B)在足细胞损伤中的作用及机制。方法:微分离37例肾活检证实的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者肾小球,qRT-PCR检测肾小球GADD45B基因表达,同时进行免疫组化检测GADD45B蛋白表达。进一步利用模式动物斑马鱼研究GADD45B基因功能,Podocin启动子驱动和UAS/GAL4系统构建足细胞上特异性表达GADD45B转基因斑马鱼,硝基还原酶/甲硝唑(NTR/MTZ)系统特异性诱导足细胞损伤,观察斑马鱼水肿发生率,定量检测蛋白尿及足细胞凋亡。结果:FSGS患者肾小球GADD45B基因和蛋白表达水平显著高于正常对照组,并与FSGS患者白尿、血白蛋白及血肌酐水平密切相关;斑马鱼研究结果显示,足细胞上高表达GADD45B能够显著加重MTZ诱导的足细胞损伤,GADD45Ba/b转基因鱼的水肿发生率和蛋白尿水平均显著高于野生型斑马鱼。活性caspase染色结果显示,GADD45B转基因鱼发生凋亡的足细胞数显著高于非转基因鱼。吗啉环寡聚核苷酸注射斑马鱼抑制GADD45B基因表达,则MTZ诱导的斑马鱼水肿发生率和蛋白尿水平显著降低。结论:高表达GADD45B显著加重足细胞受损,而抑制GADD45表达则能有效改善足细胞损伤,提示其可作为治疗足细胞损伤药物靶点。

电离辐射对人外周血淋巴细胞GADD45基因表达的影响

观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-Polymerase clain reaction,RT-PCR)的方法测定 GADD45基因的相对表达量,分析该基因的剂量、效应关系。照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,照射后4h达峰值,以后开始下降,但在24h仍未恢复到初始水平。

Gadd45α对绒毛外滋养细胞迁移和侵袭能力影响的相关研究

目的:研究人生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SVneo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用。方法:构建Gadd45α短发夹干扰RNA,以阴性对照组作为参照,转染人滋养细胞HTR8/SVneo,即分为实验组(si-Gadd45α)和阴性对照组(si-NC)进行实验;应用流式细胞仪检测转染效率,并应用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组细胞中Gadd45αm RNA和蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)显色法检测转染后各组细胞增殖能力;应用流式细胞仪对转染后各组细胞进行细胞凋亡分析;采用Transwell法检测转染后各组细胞迁移和侵袭能力;采用早孕绒毛外植体培养模型观察敲除Gadd45α基因后对绒毛外滋养细胞外生性迁移能力的影响;收集各组细胞培养上清液,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达,蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of MMPs,TIMPs)的表达。结果:流式细胞仪检测转染效率约为90%;转染后实验组较对照组Gadd45αm RNA的表达量约降低80%,蛋白表达水平约下降70%,差异均有统计学意义(P<0.01),证明干扰Gadd45α表达成功。MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,结果显示实验组和对照组细胞增殖和凋亡均无统计学差异(P>0.05)。Transwell实验表明干扰Gadd45α后HTR8/SVneo侵袭能力明显增加,约为对照组的1.65倍;迁移能力也明显增加,约为对照组的2倍,均有统计学差异(P<0.01)。早孕绒毛外植体培养结果显示:与阴性对照组的绒毛相比,Gadd45α干扰片段处理的绒毛外滋养细胞外生性迁移的距离明显增加,差异有统计学意义(P=0.005)。明胶酶谱实验结果显示干扰Gadd45α后基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和MMP-9的活性增强,而Western blot检测发现其抑制因子TIMP-1和TIMP-2相应地下降(P<0.01)。结论:推测Gadd45α可能是通过调控蛋白酶的活性来抑制滋养细胞的迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。

贲门腺癌中GADD45G基因的异常甲基化及表达

目的探讨生长阻滞和DNA损伤诱导基因G(GADD45G)在贲门腺癌(GCA)中的异常甲基化及表达。方法分别应用亚硫酸氢盐转换-甲基化特异性PCR(BS-MSP)方法及免疫组织化学的方法检测138例贲门癌及相应的癌旁正常组织中GADD45G基因的甲基化及蛋白表达情况。结果贲门腺癌及癌旁组织中均未检测到GADD45G远端启动子区即位点1(region 1)甲基化。GADD45G第2个CpG岛的近端启动子区及第1外显子区即位点2和位点3(region 2/3)在贲门腺癌及癌旁组织中的甲基化率相同,均为49.3%(68/138),高于癌旁正常组织(0),差异有统计学意义,且此2个区域的甲基化率在Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌中明显增高(P<0.05)。贲门腺癌癌组织中GADD45G的蛋白表达阳性率为35.5%(49/138)显著低于癌旁正常组织的蛋白表达率82.6%(114/138),差异有统计学意义(P<0.05),且与其近端启动子区及第1外显子区的甲基化状态之间呈负相关(rs=-0.398)。结论GADD45G基因近端启动子区及第1外显子区的高甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因表达降低的机制之一。

小鼠卵泡发育不同阶段Egr-1、Gadd45α蛋白表达及相互关系

目的:探讨Egr-1、Gadd45α在小鼠卵泡发育不同阶段的表达及其相互关系。方法:选择不同发育阶段的昆明种小鼠卵巢,用免疫组化法检测不同发育阶段卵泡中Egr-1、Gadd45α蛋白的表达。结果:Egr-1、Gadd45α蛋白在卵泡不同发育阶段的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,而且随卵泡发育表达增强。卵泡不同发育阶段中卵母细胞及颗粒细胞中Egr-1、Gadd45α蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。闭锁卵泡Egr-1、Gadd45α蛋白表达强烈,其表达强度明显高于各级生长卵泡。黄体及间质中亦有Egr-1、Gadd45α表达。同时Egr-1、Gadd45α在各级卵母细胞的表达有较强的相关性(rs=0.993,P<0.05)。结论:卵泡发育不同阶段Egr-1、Gadd45α均有表达,在卵泡发育后期和闭锁卵泡中强表达。提示Egr-1、Gadd45α在卵泡生长发育及闭锁过程中可能起重要的调控作用。

GADD45β在肝癌中的异常表达

目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80%、60%和26%,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(χ2=15.128,P<0.01);GADD45β蛋白的阳性表达率在正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中分别为85%、70%和31%,有显著统计学差异(χ2=24.619,P<0.01).GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关.

Gadd45α mRNA和蛋白在子痫前期胎盘组织中表达及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响

目的分析生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)蛋白和mRNA在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达情况及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响。方法回顾性选取咸宁市中心医院收治的40例PE胎盘组织为病例组,30例正常胎盘组织为对照组。通过免疫印迹法对两组Gadd45α蛋白表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对两组Gadd45αmRNA的相对表达量进行检测。对滋养细胞HTR8/Svneo进行培养,以转染阴性对照的siRNA为对照siRNA组,转染Gadd45α的siRNA为Gadd45α-siRNA组。在转染Gadd45α的siRNA后对滋养细胞侵袭数量和侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMPs)的表达水平进行检测。结果相比对照组,病例组Gadd45α蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Gadd45αmRNA的相对表达量明显上调(P<0.01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Gadd45αmRNA的相对表达量亦显著下调(P<0.01)。随着转染siRNA时间的增加,对照siRNA组与Gadd45α-siRNA组细胞侵袭数量明显增多(P<0.05);相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组同时间点滋养细胞HTR8/Svneo侵袭数量明显增多(P<0.01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo侵袭相关分子MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达水平均显著升高(P<0.05)。结论Gadd45α高表达于PE胎盘组织,而通过阻滞滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达水平可诱导细胞侵袭,提高侵袭相关分子MMPs的表达量。

GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌组织中的蛋白表达及意义

目的探讨GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌(HCC)组织中的蛋白表达及意义。方法收集不同分化程度的HCC组织标本68例,正常肝组织标本20例,采用免疫组化S-P法检测GADD45β和survivin基因的蛋白表达。结果 GADD45β基因与survivin基因在HCC组织中的蛋白表达率分别为38.24%(26/68)和75.00%(51/68),两者的表达均与HCC的病理分化程度、临床分期有关(P<0.05),survivin基因的表达还与门脉癌栓有关(P<0.05)。随着survivin基因在HCC组织中蛋白表达率的升高,GADD45β基因蛋白表达强度明显下降,两者的表达呈负相关(r=-0.454,P<0.05)。结论 GADD45β基因在HCC发生发展中起抑制作用,GADD45β基因表达缺失是HCC发生发展的重要因素之一;survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用。联合检测GADD45β基因和survivin基因的蛋白表达有助于判断HCC的恶性程度和HCC患者的预后。

实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变

目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射(0～8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0～72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y^=3.408+1.528x,R2=0.787。2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时达峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平。结论实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量-效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计。

转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位

目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响。同时筛选其可能的ATF3结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长(-1 105^+236 nt)和Gadd45γ基因启动子全长(-913^+72nt)分别插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-Gadd45β/γ-FL),再将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒(p IRES2/ATF3)共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd45β/γ基因的启动作用。另用生物信息学软件预测Gadd45β/γ基因启动子上ATF3潜在的结合位点,并据此构建4个Gadd45β和3个Gadd45γ基因启动子截短片段的荧光素酶报告质粒。将Gadd45β/γ基因启动子全长和各截短片段的荧光素酶报告质粒与p IRES2/ATF3共转染GMCs,再行荧光素酶活性测定,以筛选ATF3的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠Gadd45β/γ基因启动子(全长和截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别和p IRES2/ATF3共转染GMCs发现,Gadd45β/γ基因启动子活性均显著增加。而将Gadd45β启动子全长及4个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45β-4的启动活性显著低于p GL3-Gadd45β-FL、p GL3-Gadd45β-1、p GL3-Gadd45β-2和p GL3-Gadd45β-3。提示ATF3可能结合在Gadd45β基因启动子的(-146^+23 nt)区域。同样,将Gadd45γ启动子全长及3个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45γ-2、p GL3-Gadd45γ-3的启动活性显著低于p GL3-Gadd45γ-FL和p GL3-Gadd45γ-1。提示ATF3可能结合在Gadd45γ基因启动子的(-456^-61 nt)区域,且这段区域可能包含1个以上ATF3结合位点。结论:成功构建了大鼠Gadd45β/γ基因启动子全长及各截短片段荧光素酶报告质粒,并初步确定了ATF3在Gadd45β/γ基因启动子上的结合区域。

GADD45A与肿瘤治疗

生长阻滞和DNA损伤基因45A(growth arrest and DNA damage-inducible 45A,GADD45A)是第1个被发现的由P53激活的应激诱导基因,同时也是P63、P73、BRCA1及MYC的靶标基因。GADD45A作为DNA损伤修复基因,受P53依赖(电离辐射诱导)和独立于P53(紫外线诱导)的途径调节,参与DNA损伤修复、细胞周期阻滞、凋亡、自噬、血管形成等生物学功能,与肿瘤发生发展密切相关。在大多数肿瘤的治疗中,化疗药物直接或者间接(如脱甲基化、乙酰化)上调其表达水平,提高癌细胞药物敏感性;同时,在放射治疗过程,过表达GADD45A可干预放射抵抗。然而,在少数肿瘤的治疗中,GADD45A的表达反而能够提高癌细胞的存活率。本文主要对GADD45A在肿瘤治疗中所发挥的作用及机制进行综述。

基于TCGA数据库分析GADD45B基因在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及其临床价值

目的:利用TCGA数据库探讨生长停滞和DNA损伤诱导基因β(growth arrest and DNA damage-inducible geneβ,GADD45B)的基因表达与卵巢浆液性囊腺癌临床特征的相关性及其在卵巢浆液性囊腺癌预后分析中的价值。方法:下载TCGA数据库中604例卵巢浆液性囊腺癌患者的临床信息及307例卵巢浆液性囊腺癌患者的RNA测序数据,利用卡方检验和t检验分析GADD45B表达与卵巢浆液性囊腺癌临床病理特征的相关性,利用Kaplan-Meier法分析GADD45B表达与卵巢浆液性囊腺癌总生存时间的相关性,利用单因素和多因素COX回归分析GADD45B是否可以作为卵巢浆液性囊腺癌预后分析的独立分子标志物,利用qRT-PCR检测GADD45B在多药耐药卵巢癌细胞及对照卵巢癌细胞中的表达。结果:GADD45B表达与卵巢浆液性囊腺癌的国际妇产科联合会(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、肿瘤大小、肿瘤在卵巢的浸润情况、初次化学药物治疗效果及生存情况均显著相关,且与卵巢浆液性囊腺癌的总生存时间显著负相关;多因素COX回归分析示:只有年龄和初次化疗效果可以作为卵巢浆液性囊腺癌的独立分子标记,同时qRT-PCR发现GADD45B在多药耐药卵巢癌细胞中显著升高。结论:GADD45B在耐药卵巢癌细胞中显著升高,其高表达与卵巢浆液性囊腺癌预后不良及化疗耐药明显相关,可作为分析卵巢浆液性囊腺癌预后的有效分子标志物。

Gadd45α基因敲减对缺氧/复氧下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力的影响

目的·探讨沉默生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)基因对缺氧/复氧下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力的影响。方法·用靶向Gadd45α基因的sh RNA慢病毒感染人绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo,敲减Gadd45α的基因表达;采用氧化应激模型体外模拟子痫前期,观察细胞生物学功能的改变。实验分成4组:对照组、缺氧/复氧组、Gadd45α敲减+缺氧/复氧组和慢病毒阴性对照+缺氧/复氧组。采用早孕绒毛外植体实验观察Gadd45α基因敲减对氧化应激下人绒毛外滋养细胞生物学功能的影响,Western blotting法检测各组细胞Gadd45α蛋白水平变化,Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2/9的活性。结果·缺氧/复氧可使HTR8/SVneo细胞中Gadd45α表达增加,进而细胞的迁移和侵袭能力下降;而Gadd45α干扰可提高基质金属蛋白酶2/9的活性进而提高氧化应激下绒毛外滋养细胞的迁移和侵袭能力。结论·Gadd45α基因敲减对氧化应激下人绒毛外滋养细胞迁移侵袭能力具有促进作用。

GADD45β基因在脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其的调节作用

目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β（GADD45β）基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF—α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上，应用重组TNF—α干预分化成熟的脂肪细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中GADD45β基因表达水平。结果随脂肪细胞逐渐分化成熟，GADD45β基因mRNA表达水平渐降低。GADD45β基因表达水平除在细胞分化d1～7、d8～10各时段内差异无显著意义（P〉0．05）外，余各时段之间表达水平差异均具有最著意义（P〈0.05）。不同质量浓度重组TNF-α（0．1～10．0μg/L）均能显著促进成熟脂肪细胞中GADD45β基因mRNA的表达。TNF-α质量浓度为0.1μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升51．39％，24h内上升100．15％；TNF—α质量浓度为1．0μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升44．15％，24h内上升100．63％；TNF—α质量浓度达10．0μg/L，GADD45β基因表达水平6h内即上升104．26％，24h内上升122．17％。结论GADD45β基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程；TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达具有促进作用，其促进效应总体趋势呈现时间依赖性特征。

子痫前期胎盘中Gadd45α的表达及敲低Gadd45α对滋养细胞HTR8/Svneo的调节作用

目的:研究子痫前期胎盘中Gadd45α的表达量及敲低Gadd45α对滋养细胞HTR8/Svneo的调节作用。方法:收集子痫前期胎盘组织和正常胎盘组织,分别采用荧光定量PCR法和免疫印迹法检测Gadd45α的mRNA含量和蛋白含量;培养滋养细胞HTR8/Svneo,转染Gadd45α的siRNA后检测细胞的侵袭能力及侵袭相关分子的表达量。结果:子痫前期胎盘组织中Gadd45α的mRNA含量和蛋白含量高于对照组;转染Gadd45α的siRNA后,HTR8/Svneo细胞中Gadd45α的mRNA含量和蛋白含量均明显降低,侵袭细胞的数目以及MMP1、MMP2、MMP3、MMP9的表达量均明显增加。结论:子痫前期胎盘中Gadd45α的表达量异常升高;抑制滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达量能够促进的侵袭、增加MMPs分子的表达。