肝细胞癌患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR的表达水平及其与病理特征和预后的相关性

目的检测血清蛋白质酪氨酸磷酸酶3(PTPN3)、血管内皮生长因子(VEGF)、易洛魁族同源盒基因5(IRX5)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,并分析其与患者的病理特征和预后的相关性,为临床工作提供血清学参考。方法选取2020年6月至2022年10月南阳市中心医院收治的117例HCC患者作为观察组,另选取同期117例良性肝内结节患者作为对照组,比较两组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,分析HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与病理特征的关系。随访6个月,依据患者预后情况分为预后良好组72例和预后不良组45例,比较不同预后患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的效能,采用相对危险度(RR)分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与HCC预后的关系。结果观察组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(181.42±10.19)ng/mL、(154.66±11.82)μmol/L、(82.42±8.23)ng/mL、1.20±0.28,明显高于对照组的(86.64±13.28)ng/m L、(83.64±9.50)μmol/L、(34.80±6.63)ng/m L、1.07±0.25,差异均有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、分化程度、肿瘤直径、伴肝硬化、区域淋巴结转移、Ki-67指数、脉管内瘤栓、包膜侵犯HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤多发患者的血清VEGF水平为(154.10±10.26)μmol/L,明显高于肿瘤单发患者的(191.62±9.45)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2个月,预后良好患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(153.69±22.24)ng/m L、(113.27±25.64)μmol/L、(70.53±10.24)ng/m L、1.15±0.23,明显低于预后不良患者的(217.58±27.06)ng/m L、(215.33±38.19)μmol/L、(96.35±14.88)ng/m L、1.36±0.28,差异均有统计学意义(P<0.05);绘制血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的ROC,结果显示各血清联合预测的AUC最大,为0.924(95%CI:0.860~0.965);HCC预后不良的危险度分析结果显示,血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR所致RR值分别为4.604(95%CI:2.602~8.145)、7.139(95%CI:3.660~13.924)、4.733(95%CI:2.749~8.149)、4.690(95%CI:2.575~8.544)(P<0.05)。结论血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR在HCC中的表达异常升高,且与病理特征联系密切,对患者预后有一定评估作用。

小陷胸汤对5-氟尿嘧啶介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用研究

目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(30 mg/kg,ip,7 d)诱导肠黏膜损伤小鼠模型。小陷胸汤给药组造模同时按照设定剂量以10 mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,连续处理7 d。采用苏木素-伊红染色法(HE)观察小肠的病理形态学变化并测定肠绒毛高度/隐窝深度(VH:CD)比值;采用阿利新蓝染色法(AB)测定小肠黏膜杯状细胞数量;采用分光光度法检测血清内毒素(ET)、D-乳酸(D-LA)及小肠组织二胺氧化酶(DAO)水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测小肠组织IL-6、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达;采用Western blot法检测小肠组织IL-6、STAT3及EGFR蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠体质量显著降低,腹泻评分、粪便质量、粪便含水量及小肠推进率明显升高(P<0.01),小肠黏膜VH:CD比值和杯状细胞数量降低(P<0.01),血清ET和D-LA水平升高,小肠组织DAO水平降低(P<0.05),脾指数和胸腺指数降低(P<0.01),血清IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠组织IL-6、STAT3 mRNA表达升高,EGFR mRNA表达降低(P<0.01);小肠组织IL-6、STAT3蛋白表达升高,EGFR蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,小陷胸汤能够明显改善上述指标(P<0.05)。结论:小陷胸汤对5-FU介导的肠黏膜损伤具有保护作用,其作用机制可能与小陷胸汤激活EGFR信号转导,下调IL-6/STAT3信号通路,减轻5-FU诱导的肠黏膜炎症反应,改善免疫功能有关。

黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。

生长阻滞特异性转录因子5剪接变异体GAS5_O1增强慢性髓系白血病细胞对伊马替尼的敏感性

在多种肿瘤中,生长阻滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)高表达与患者的良好生存期相关。GAS5存在多种剪接变异体,本研究探讨GAS5部分剪接变异体在髓系白血病细胞系中的表达模式。并基于对凋亡诱导敏感的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562,研究GAS5部分剪接变异体对K562细胞自身增殖、凋亡以及对靶向药物伊马替尼(imatinib,IM)的敏感性的影响。反转录PCR结果显示,GAS5剪接模式在髓系白血病细胞系HL-60、K562、NB4和KASUMI-1之间未见明显差异。相较于指数增长期,GAS5_AE表达水平在细胞密度引起的生长停滞期有一定程度的累积。通过核转染,将GAS5剪接变异体(pcDNA3-GAS5_1B、-GAS5_2B、-GAS5_3A、-GAS5_4A、-GAS5_O1或-GAS5_AE)转入K562细胞的单克隆株中。通过台盼蓝染色、吖啶橙染色后进行细胞计数,克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,瞬时转染GAS5剪接变异体并无抑制细胞的基础增殖或增强细胞对药物的敏感性。建立GAS5_O1的稳定转染株,延长培养时程并计算倍增时间,发现GAS5_O1的表达水平和倍增时间成正比(R^(2)=0.5692)。在稳转株O1-C8中观察到GAS5_O1可促进IM引起的细胞生长抑制(56.94%±2.84%vs.36.07%±2.32%,P<0.05)和凋亡(29.33%±1.30%vs.52.00%±2.52%,P<0.05)。上述结果表明,GAS5_O1的上调可能增加CML细胞的倍增时间,并使CML细胞对IM处理敏感。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因

类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。

lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)和生长特异抑制物5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)在多发性骨髓瘤患者血清中的表达及其与预后的关系。方法选取本院2014年1月至2016年1月收治的87例多发性骨髓瘤患者为研究对象,同时选取54名健康志愿者为对照。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncRNA MEG3、lncRNA GAS5的表达水平,分析其与多发性骨髓瘤患者临床及预后的关系。结果多发性骨髓瘤患者血清中lncRNA MEG3和lncRNA GAS5的表达水平均低于对照组(5.92±0.87 vs 9.13±1.26,t=17.882,P<0.001;4.27±0.51 vs 8.26±1.04,t=30.417,P<0.001)。两者表达水平与患者年龄、D-S分期、恶性浆细胞数量、β2-MG水平和血红蛋白含量有关(P<0.05)。MEG3低表达组和GAS5低表达组的3年总生存率均低于MEG3高表达组和GAS5高表达组(32.56% vs 56.82%,χ2=5.617,P=0.018;32.43% vs 52.00%,χ2=5.389,P=0.020)。lncRNA MEG3、lncRNA GAS5低表达与多发性骨髓瘤患者不良预后有关(HR=3.503,95%CI:1.517~8.091;HR=3.319,95%CI:1.438~7.661)。结论 lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤患者血清中呈低表达,且与患者不良预后有关。

LncRNA GAS5和miR-142-5p在慢性心力衰竭患者血清中表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异基因5(LncRNA GAS5)、微小RNA-142-5p(miR-142-5p)在慢性心力衰竭(心衰)患者血清中的表达及临床意义。方法选取2018年2月至2019年2月于济宁医学院附属医院心内科住院治疗的83例慢性心衰患者为慢性心衰组,同期选取健康体检者86例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平,心脏超声测定左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)及左心室射血分数(LVEF);分析慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平与心功能指标的相关性及二者对慢性心衰的诊断价值;采用Kaplan-Meier法分析血清LncRNA GAS5、miR-142-5p表达与慢性心衰患者预后的关系。结果慢性心衰组血清miR-142-5p水平、LVESD、LVEDD高于健康对照组,血清LncRNA GAS5水平、LVEF低于健康对照组(P<0.05)。慢性心衰患者血清LncRNA GAS5与miR-142-5p水平呈负相关(r=-0.647,P<0.05),且LncRNA GAS5(miR-142-5p)与LVESD、LVEDD呈负(正)相关(P<0.05),与LVEF呈正(负)相关(P<0.05)。血清LncRNA GAS5、miR-142-5p及二者联合诊断慢性心衰的曲线下面积(AUC)分别为0.873、0.896、0.914,特异性分别为82.6%、72.1%、79.1%,敏感度分别为84.3%、91.6%、92.8%。LncRNA GAS5低表达患者2年生存率(57.14%)低于LncRNA GAS5高表达患者2年生存率(85.37%),差异有统计学意义(P<0.05);miR-142-5p高表达患者2年生存率(58.14%)低于miR-142-5p低表达患者2年生存率(85.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清LncRNA GAS5、miR-142-5p表达水平对慢性心衰患者早期诊断及预后评估均有重要作用。

生长抑制特异性转录本5和微小RNA-142-3p在重症急性胰腺炎并急性呼吸窘迫综合征病人血清中的表达及临床意义

目的探讨生长抑制特异性转录本5(GAS5)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在重症急性胰腺炎(SAP)合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病人血清中的表达及临床意义。方法选取2017年2月至2018年12月平顶山市第一人民医院SAP病人83例,采用随机数字表法抽样41例并发ARDS者为ARDS组,42例非ARDS组。另选取同时期40例健康体检者作为健康对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病人血清GAS5和miR-142-3p表达水平,Pearson相关性分析SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p表达相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GAS5和miR-142-3p对SAP合并ARDS的诊断价值,logistic回归分析SAP合并ARDS及其预后的影响因素。结果与健康对照组比较,非ARDS组和ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。与非ARDS组比较,ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p呈负相关(P<0.05)。GAS5与miR-142-3p联合检测诊断SAP合并ARDS的灵敏度、特异度及曲线下面积(AUC)均高于GAS5、miR-142-3p单独诊断(P<0.05)。与SAP合并ARDS存活病人比较,死亡病人血清GAS5表达水平升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。GAS5和miR-142-3p是SAP病人合并ARDS的显著影响因素(P<0.05),也是SAP合并ARDS病人预后的显著影响因素(P<0.05)。结论SAP合并ARDS病人血清中GAS5表达升高,miR-142-3p表达降低,可能为SAP合并ARDS的诊断和预后判断提供了新的生物学指标。

lncRNA GAS5靶向调控miR-136对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化因子表达影响及机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长抑制特异性转录本5(GAS5)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)中炎性和纤维化因子表达影响,并探讨其机制是否与调控miR-136表达有关。方法将体外培养的HK-2细胞分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+Si-NC组、HG+Si-GAS5组、HG+miR-NC组、HG+miR-136组、HG+Si-GAS5+anti-miR-NC组、HG+Si-GAS5+anti-miR-136组。采用实时定量PCR分析GAS5和miR-136表达量。蛋白质印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白1(FN1)蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法分析白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与NC组比较,HG组HK-2细胞GAS5以及α-SMA、FN1、TNF-α和IL-6蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-136表达显著降低(P<0.05)。与HG+Si-NC组比较,HG+Si-GAS5组HK-2细胞α-SMA、FN1、TNF-α和IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-136组HK-2细胞α-SMA、FN1、TNF-α和IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05)。与HG+Si-GAS5+anti-miR-NC组比较,HG+Si-GAS5+anti-miR-136组HK-2细胞α-SMA、FN1、TNF-α和IL-6蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论干扰GAS5通过上调miR-136表达可抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎性和纤维化因子表达。

LncRNA-GAS5和miR-103在浸润性乳腺癌中的表达关系及意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)-生长停滞特异性转录物5(GAS5)与微小RNA(miR)-103在浸润性乳腺癌中的表达关系及临床意义。方法收集72例浸润性乳腺癌经手术切除的癌组织及癌旁正常组织标本,实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)测定LncRNA-GAS5、miRNA-103相对表达量,并收集患者病理资料,分析浸润性乳腺癌LncRNA-GAS5、miRNA-103表达与病理参数的关系及两者表达的相互关系。结果浸润性乳腺癌癌组织LncRNAGAS5相对表达量低于癌旁组织,miR-103相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。随临床分期的上升,LncRNA-GAS5表达降低,miR-103表达上升;伴淋巴结转移浸润性乳腺癌患者癌组织LncRNA-GAS5表达低于未伴淋巴结转移者,miR-103高于未伴淋巴结转移患者(P<0.05)。浸润性乳腺患者癌组织LncRNA-GAS5与miR-103表达呈负相关(P<0.05)。结论浸润性乳腺癌患者癌组织LncRNA-GAS5呈低表达,miR103呈高表达,两者表达呈负相关,且均与乳腺癌临床分期、淋巴结转移有关。

Ⅰ型子宫内膜癌组织中lncRNA-GAS5的表达及意义

目的 研究Ⅰ型子宫内膜癌组织中长链非编码核糖核酸GAS5 (lncRNA-GAS5)的表达及意义.方法 分别采集40例Ⅰ型子宫内膜癌患者及40例因子宫肌瘤等良性病变就诊患者的子宫内膜的组织标本,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法分别检测两种不同的子宫内膜组织中lncRNA-GAS5的表达,并结合Ⅰ型子宫内膜癌患者的病理和临床资料将检测的数据进行统计分析.结果 与正常子宫内膜组织相比较lncRNA-GAS5在Ⅰ型子宫内膜癌组织中表达下调,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05).lncRNA-GAS5在期别较晚(Ⅲ~Ⅳ期)的Ⅰ型子宫内膜癌患者中低表达,低于期别较早(Ⅰ~Ⅱ期)的患者;在Ⅰ型子宫内膜癌有淋巴结转移的患者中lncRNA-GAS5呈现低表达,低于无转移者,且差异均具有统计学意义(P<0.05).在不同病理分级、肌层浸润深度,不同年龄的Ⅰ型子宫内膜癌患者中lncRNA-GAS5表达差异不显著(P>0.05).结论 子宫内膜癌组织中lncRNA-GAS5表达下调,在期别较晚(Ⅲ~Ⅳ期)及有淋巴结转移的Ⅰ型子宫内膜癌患者中也呈现低表达,lncRNA-GAS5可能在Ⅰ型子宫内膜癌发病和转移过程中起到了抑制作用.

过表达lncRNA GAS5对甲状腺乳头状癌侵袭和迁移能力的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA生长阻滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5,LncRNA GAS5)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法qRT-PCR检测LncRNA GAS5在PTC细胞系和正常甲状腺细胞系中的表达;选择低表达GAS5的PTC细胞进行过表达lncRNA GAS5慢病毒载体的转染,分为LV-NC组和LV-GAS5组。转染48 h后,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,划痕实验检测各组细胞的迁移能力,Western-blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达;EMT诱导剂TGF-β处理细胞进行回复实验,分为LV-NC组、LV-GAS5组和LV-GAS5+TGF-β组,Boyden和划痕实验检测各组细胞侵袭和迁移能力变化。结果qRT-PCR结果显示LncRNA GAS5在PTC细胞系中的表达均低于在正常甲状腺细胞中的表达,B-CPAP细胞中GAS5的表达相对较低(P<0.05);转染过表达lncRNA GAS5慢病毒载体后,B-CPAP细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.05),细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin表达降低和E-cadherin表达增加(P<0.05)。EMT诱导剂TGF-β处理后,与LV-NC组相比,LV-GAS5组和LV-GAS5+TGF-β组细胞侵袭和迁移能力降低,与LV-GAS5组相比,LV-GAS5+TGF-β组细胞侵袭和迁移能力增加(P<0.05)。结论GAS5在PTC细胞系中高表达,GAS5可能通过调控EMT抑制PTC的侵袭和转移能力。

LncRNA-GAS5、LDH表达与胶质瘤放射治疗预后的关系研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录物5(LncRNA-GAS5)、乳酸脱氢酶(LDH)表达与胶质瘤放射治疗预后的关系。方法选取广西壮族自治区南溪山医院2017年6月~2019年6月收治的行放射治疗的脑胶质瘤患者112例,通过检测机体LncRNA-GAS5、LDH表达水平情况,分析其表达水平与患者预后的关系。结果截止随访时间点112例患者死亡43例,生存69例,两者间lncRNA-GAS5、LDH水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析发现lncRNA-GAS5表达水平与患者不良预后呈负相关(P<0.05),LDH水平与患者不良预后则呈正相关性(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)显示:lncRNA-GAS5、LDH联合预测脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良的曲线下面积为0.859,明显高于LDH曲线下面积(P<0.05);单因素分析发现肿瘤直径、病理分级及lncRNA-GAS5、LDH水平与脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良有关(P<0.05);logistic多因素分析发现肿瘤直径≥3 cm、病理分级(Ⅳ级)及lncRNA-GAS5<0.41、LDH≥123.60 U/L是脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良的危险因素(P<0.05)。结论lncRNA-GAS5、LDH表达水平与胶质瘤放射治疗后患者的预后情况密切相关,是影响患者预后的危险因素,对分析患者的预后情况具有较高的评估价值。

LncRNA GAS5吸附miR-221-3p抑制肝细胞肝癌增殖及其启动子甲基化状态

目的:研究长链非编码RNA-生长抑制特异性基因5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,同时研究其启动子区域的甲基化状态。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测GAS5在肝癌细胞株和肝癌组织中的表达,在肝癌细胞中过表达GAS5,CCK-8法检测细胞增殖,直线划痕法检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭。通过双荧光素酶法检测GAS5与miR-221-3p的靶向结合。通过不同剂量甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)的加入了解GAS5启动子区域的甲基化状态。结果:GAS5在肝癌细胞株和肝癌组织中表达显著下调。过表达GAS5明显抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及克隆形成。GAS5存在与miR-221-3p的互补结合位点。随着5-Aza-dC浓度的增加,GAS5相对表达量呈现显著上调。结论:GAS5在肝癌组织和细胞系中的表达显著下调,可能与其CpG岛甲基化有关。GAS5可作为分子海绵吸附miR-221-3p抑制肝癌细胞增殖。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。

循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

lncRNAGAS5调控 Notch通路对炎症环境下牙髓干细胞成骨分化的影响

目的:探究长链非编码RNA生长阻滞特异性转录本5(lncRNA GAS5)对炎症环境下牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化的影响及潜在机制。方法:体外培养人牙髓干细胞(hDPSCs),分为正常对照组(NC)、成骨诱导组(OI)、脂多糖组(LPS)、NC+LPS组、GAS5过表达组、Jagged-1组、GAS5过表达+Jagged-1组。Western blot检测hDPSCs中Notch通路和成骨相关蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,在诱导分化后,成骨诱导组细胞的增殖活性、lncRNA GAS5水平、ALP活性、钙化结节的数量和面积、细胞中RUNX2、OCN蛋白表达升高,NICD、Hes1、Hey1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:lncRNA GAS5在hDPSCs成骨分化中上调,过表达lncRNA GAS5可增强炎症环境下hDPSCs成骨分化能力,其作用机制可能与抑制Notch信号通路的激活有关。

生长激素慢性刺激对肝脏JAK2-STAT5信号通路的影响

目的:研究生长激素(growth hormone,GH)慢性刺激对肝脏Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)-信号转导及转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号通路的影响.方法:动物实验使用健康BALB/c♂小鼠,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共2 wk;检测肝脏P-STAT5、信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)-3 mRNA及生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)水平.细胞实验使用大鼠肝癌细胞H4-II-E,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共4 d;检测细胞P-STAT5水平及P-STAT5与DNA的结合水平.结果:动物试验中,小鼠接受GH慢性刺激后,肝脏P-STAT5水平降低,SOCS-3 mRNA水平升高(P<0.05),而GHR水平无变化.细胞实验中,GH慢性刺激同样导致P-STAT5水平下降(P<0.05),同时P-STAT5与DNA的结合水平亦降低(P<0.05).结论:GH慢性刺激可抑制肝脏JAK2-STAT5信号通路,其机制可能是SOCS-3基因的表达增加,从而抑制了STAT5的磷酸化.