红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析

为研究红鳍东方纯Takifugu rubripes的性别决定因子（gonadal soma derivedfactor，GSDF），利用cD-NA末端快速扩增技术（RACE）首次克隆了红鳍东方纯舻妒基因（Trgsdf）的cDNA全长序列（GenBank登陆号：KR914667）。结果表明：TrgsdfcDNA序列全长为1734bp，其中5’端非编码区144bp，开放阅读框648bp，3’端非编码区942bp，共编码215个氨基酸；预测的氨基酸序列中存在1个长度为19个氨基酸的信号肽和相同长度的跨膜区，1个N-糖基化位点NST，1个TGF-β家族成员特有的保守结构域；BLAST同源性分析结果显示，红鳍东方纯GSDF氨基酸序列与其他鱼类的相似性为26％～58％；系统发育分析结果显示，鱼类GSDF单独聚为一支，与TGF-β超家族内的其他成员分开，红鳍东方纯与青鳐Oryzias latipes GSDF的亲缘关系最近，先聚为一支，后与三斑海猪鱼Halichoeres trimaculatus聚在一起，与矛尾鱼Latimeria menadoensi5的GSDF亲缘关系最远：应用RT-PCR技术检测TrgsdfmRNA在雌性和雄性红鳍东方纯成鱼不同组织中的表达，结果显示，TrgsdfmRNA在卵巢和精巢中高表达，在皮肤和肌肉组织中微量表达，在其他组织中无表达：采用相对实时荧光定量PCR方法比较了成鱼卵巢和精巢中TrgsdfmRNA的表达量，结果显示，TrgsdfmRNA在精巢中的表达量显著高于卵巢（P〈0．05），约为卵巢表达量的6倍。研究表明，鲈妒基因可能在红鳍东方纯的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。

大黄鱼gsdf和amh基因的克隆及表达分析

该研究克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)gsdf(gonadal soma derived factor)和amh(anti-Müllerian hormone)基因的开放阅读框序列并对它们的表达进行分析。大黄鱼gsdf基因c DNA序列开放阅读框长为618 bp,可编码205个氨基酸,含有信号肽和TGF-β结构域。系统进化分析显示,大黄鱼Gsdf与其他鱼类Gsdf聚为一枝,而与TGF-β超家族其他成员分开。Amh基因c DNA序列开放阅读框为1 563 bp,可编码520个氨基酸,含有信号肽、AMH-N区域和TGF-β保守结构域。系统进化分析显示,大黄鱼Amh与舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)Amh进化关系最近。荧光定量PCR表达分析显示,gsdf和amh基因主要在大黄鱼性腺表达,在精巢中的表达量显著高于卵巢(P<0.05),2个基因都在性腺分化前开始表达,在雄鱼精巢中表达量呈现先升高后下降的趋势,在卵巢的表达量很低。此外,相比于正常雌鱼,gsdf和amh基因在伪雄鱼(遗传性雌鱼)性腺中的表达量显著上调。这些结果表明,gsdf和amh基因在大黄鱼性腺分化过程中起到重要的作用。

黄鳝性逆转过程中Gsdf基因cDNA片段的克隆和表达分析

通过RT-PCR法从黄鳝性腺中首次克隆获得黄鳝Gsdf(gonadal soma-derived factor)基因的片段序列,该片段序列长218 bp,编码72个氨基酸。氨基酸序列分析表明黄鳝Gsdf基因片段与其他物种的相似性在61%~76%之间,其中与舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)GsdfⅠ型、舌齿鲈GsdfⅡ型同源性最高,均为76%;系统进化树显示,黄鳝Gsdf与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Gsdf基因聚成一支,与鲈形目鱼类亲缘关系较近。此外,不同性腺组织的基因检测结果显示,黄鳝Gsdf在卵巢和间期性腺的表达量很低,两者没有显著性差异(P>0.05);在精巢组织中的表达量显著高于卵巢、间期性腺组织的表达量(P<0.05)。上述结果表明Gsdf基因可能在黄鳝的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。

黄姑鱼(Nibea albiflora)gsdf基因的克隆及表达分析

为探索gsdf(gonadal soma derived factor)基因对黄姑鱼性别分化和性腺发育的作用,克隆了黄姑鱼gsdf基因ORF序列全长,并运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了该基因在黄姑鱼不同组织和不同发育时期性腺中的表达情况。结果显示:黄姑鱼gsdf基因开放阅读框长648 bp,可编码215个氨基酸,含有TGF-β超家族的保守功能结构域;组织表达分析结果显示,黄姑鱼gsdf基因主要集中在精巢中表达;在23℃左右水温下,孵化后40 d的遗传雄性鱼苗性腺中开始检测到gsdf基因有明显表达(此时组织学上尚看不出精巢形态),49 d后表达量迅速升高,孵化120 d后(精巢分化完成)表达量达到高峰,随后表达量开始下降,直到黄姑鱼精巢成熟之后呈现稳定表达。上述结果提示,黄姑鱼gsdf基因与黄姑鱼性别决定和分化发育过程密切相关。