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枯草芽孢杆菌GMP还原酶基因(guaC)突变株的构建 被引量:4
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作者 张西锋 李万芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第5期2556-2558,共3页
以受体菌的guaC基因为同源重组的指导序列,构建了整合表达载体pGT9GH,通过双交叉同源重组的方法将线性化的pGT9GH整合到受体菌的染色体上,构建了guaC基因的缺失突变株B.subtilis GJ07,并在guaC基因的5′端和3′端之间引入了一个拷贝核... 以受体菌的guaC基因为同源重组的指导序列,构建了整合表达载体pGT9GH,通过双交叉同源重组的方法将线性化的pGT9GH整合到受体菌的染色体上,构建了guaC基因的缺失突变株B.subtilis GJ07,并在guaC基因的5′端和3′端之间引入了一个拷贝核黄素操纵子,通过PCR方法验证了同源重组的正确性,最后测定了同源重组突变后的菌株GJ07的核黄素产量。结果表明:同源重组突变后的菌株GJ07的核黄素产量明显高于初始菌株GJ06,发酵60 h提高了24.5%。 展开更多
关键词 同源重组 枯草芽孢杆菌 guac基因
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Construction of Bacillus subtilis GMP Reductase Gene(guaC)Mutant
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作者 张西锋 李万芬 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第9期76-78,182,共4页
An integrated expression vector pGT9GH was constructed by using guaC gene of receptor strain as guide sequence for homologous recombination.And then,by using the method of double crossover recombination between plasmi... An integrated expression vector pGT9GH was constructed by using guaC gene of receptor strain as guide sequence for homologous recombination.And then,by using the method of double crossover recombination between plasmid and chromosome,the linearized plasmid pGT9GH were integrated into B.subtilis GJ06 to get B.subtilis GJ07 with guaC gene mutant,in which,one copy of riboflavin operon was inserted between 5' and 3' end of guaC gene.The homologous recombination events were confirmed by PCR methods,and then,the riboflavin yield of mutant strain GJ07 was measured.The results of shake flask culture showed that the production of riboflavin of GJ07 was 24.5% higher than that of GJ06 in 60 h. 展开更多
关键词 INTEGRATION Bacillus subtilis guac gene
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大肠杆菌guaC基因的克隆及高效表达
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作者 糜蓉娟 吴海珍 +2 位作者 叶江 张惠展 叶勤 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期252-254,共3页
以 E.coli MC41 0 0染色体 DNA为模板使用 PCR扩增技术克隆了鸟苷酸还原酶基因gua C,该基因全长 1 0 44bp,编码相对分子质量为 3 7ku的蛋白质。将该基因直接克隆于 p ET-1 6b质粒的 T7启动子下游 ,得到质粒 p EXP1。转化 E.coli BL2 1 (... 以 E.coli MC41 0 0染色体 DNA为模板使用 PCR扩增技术克隆了鸟苷酸还原酶基因gua C,该基因全长 1 0 44bp,编码相对分子质量为 3 7ku的蛋白质。将该基因直接克隆于 p ET-1 6b质粒的 T7启动子下游 ,得到质粒 p EXP1。转化 E.coli BL2 1 (DE3 ) ,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导 ,获得了高效的表达。含表达质粒的菌体胞内粗提液经酶活分析表明 ,鸟苷酸还原酶的活性为不含质粒的宿主菌的 80~ 展开更多
关键词 guac E.COLI MC4100 鸟苷酸还原酶 基因表达
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