肌苷高产菌株的选育

以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌ＭＢＳ－１２为出发菌株，经紫外线诱变处理获得一株具有腺嘌呤、组氨酸、苯丙氨酸、硫胺素四重营养缺陷型并对８－氮杂鸟嘌呤、６－巯基嘌呤有双重抗性的突变株ＬＳＢＳ－１２５５（ａｄｅ￣－，ｈｉｓ￣－，ｐｈｅ￣－，ｔｈｉ￣－，８－ＡＧｒ，６－ＭＰｒ），在摇瓶试验中该变异株的产量显著高于亲株，摇瓶试验产肌苷达２７．４３ｍｇ／ｍｌ，最高可达２９．１０ｍｇ／ｍｌ，发酵周期为７２ｈ菌株性状稳定。

原生质体紫外诱变选育鸟苷高产菌株

以一株鸟苷产生菌Bacillus subtilis JSIM-G518为出发菌株,采用原生质体紫外诱变的方法,选育具有核苷水解酶缺失,磺胺胍,德夸菌素、狭霉素C等抗性的突变株,摇瓶的鸟苷产量达到24.0 g/L,比出发菌株提高了30%。该突变株遗传性状稳定,连续传代10次,仍维持较高的鸟苷产量。

低温生防菌枯草芽胞杆菌BS303的选育及其效果验证

以枯草芽胞杆菌高效生防野生菌株BS5为出发菌株,经紫外线诱变,选育出低温生防菌BS303,并验证了它的拮抗效果。20℃时BS303对西瓜枯萎病原菌、玉米小斑病原菌、黄瓜枯萎病原菌、番茄叶霉病原菌4种病原菌有显著的抑菌效果,防治指数达到0.767,野生型菌株BS5只有0.557,两者差异显著;常温条件下菌株BS5对西瓜枯萎病原菌的防治指数为0.667,BS303为0.701,差异不显著。通过稀释涂平板和荧光定量PCR监测生防菌和病原菌在土壤中的定殖动态,结果表明:诱变菌株BS303比野生型BS5能更好地在土壤中生存,常温和低温下对西瓜枯萎病都有很强的拮抗能力,能显著降低土壤中的病原菌数量。

枯草芽胞杆菌基因组混组方法

基因组混组作为一种育种方法,通过循环原生质体融合等手段,使得不同菌株来源的基因组能够得到充分重组,增加将正向突变整合到同一重组子中的机会。使用4株带有4种不同标记的枯草芽胞杆菌亲本为初始菌株,通过循环转化、循环转导或循环原生质体融合的手段进行基因组混组,统计后代中非亲本类型占整个群体的比例,以衡量基因组混组的效果。分别经过5轮循环原生质体融合、循环转化或者循环转导,结果显示,重组程度较高者在后代群体中的比例较低,带有4种标记的后代未出现,带有3种标记的后代最高分别为4.53×10?4、1.64×10?4、4.47×10?3,明显低于文献报道的天蓝色链霉菌中同样实验的结果:带4种和3种标记的后代分别占2.5%、17%。对比上述实验的结果和文献报道的天蓝色链霉菌、乳杆菌基因组混组的结果,并结合计算机模拟循环融合过程,分析后认为:要达到较充分的基因组混组,需要有能够实现微生物细胞间高频重组的操作技术作为基础,重组频率应该不低于10?3～10?2数量级。