五种破壁方法提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense总RNA效果的比较

为了探索提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense菌株总RNA简便而有效的方法，我们分别采用石英沙研磨、超声波破碎、液氮研磨、液氮加石英沙研磨和溶菌酶消化5种方法破碎真菌细胞壁，再用市售RNAsimpletotal RNAkit试剂盒提取总RNA，最后通过对提取物进行琼脂糖凝胶电泳定性、紫外比色定量及PCR检测来评价各种破壁方法的优弊。结果显示液氮加石英沙研磨破壁法提取的真菌总RNA在5种方法中效率最高，OD260／OD280=2．093±0．264，RNA浓度为（0．134±0．021）μg／μL，RNA制备效率为（26．76±4．10）μg／g菌丝体，并且该方法操作简便，重复性最好，是制备P．guiyangense菌株总RNA的首选破壁方法。

绿色荧光蛋白在贵阳腐霉的组成性表达

以潮霉素抗性基因hph为筛选标记,以双元载体pPK2为基本骨架,将增强型绿色荧光蛋白基因egfp置于组成型启动子PgpdA和色氨酸C终止子TtrpC之间,构建了组成性表达egfp的载体pPK2-EGFP,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法,转入贵阳腐霉(Pythium guiyangense)表达。对转化子进行RT-PCR和荧光显微镜检测,结果表明,egfp基因在贵阳腐霉转化子中能稳定表达。