hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测

目的构建hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体,检测hAP-2α转录因子在酵母双杂交中的表达及对报告基因有无激活作用,为进一步研究乳腺癌中hAP-2α转录因子相互作用蛋白的作用机制奠定基础。方法通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆hAP-2α基因,SalI和EcoRI双酶切后连接诱饵载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-hAP2α的自激活作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。结果成功扩增人乳腺癌hAP-2α基因,并准确克隆入pGBKT7中,诱饵载体pGBKT7-hAP2α成功转化到酵母菌株AH109中,经表型筛选检测无自激活作用,蛋白印迹法检测证实pGBKT7-hAP2α在酵母细胞中表达诱饵蛋白hAP2α。结论成功构建酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,诱饵质粒pGBKT7-hAP2α无自激活活性,可用于研究乳腺癌或其他疾病中与hAP-2α蛋白的相互作用分子。

HAP-玻璃-α-Al_2O_3复合梯度生物陶瓷涂层的显微结构及其附着强度

利用涂覆烧结法在 α- Al2 O3陶瓷基体表面制备了 HAP-玻璃 (α- Al2 O3)梯度生物活性涂层 ,并研究了涂层组成对显微结构和附着强度的影响。梯度涂层中玻璃组成采用低膨胀低软化温度的 R2 O- Al2 O3- B2 O3- Si O2 系统 ;涂层中的 HAP含量由里到外逐渐增多 ,并在涂层中添加了适量的超细 α- Al2 O3粉体。实验结果表明 ,使用 R2 O-Al2 O3- B2 O3- Si O2 系统玻璃有利于涂层低温烧结和涂层与基体结合 ,在涂层中添加 α- Al2 O3超细粉有利于提高涂层与基体结合强度 ,所制备的梯度涂层与基体的结合强度为 4 8.2 MPa。