hB7-1重组腺病毒感染的肿瘤细胞的生物学特性

目的 在完成hB7 1cDNA克隆并成功构建包含hB7 1基因的重组腺病毒rAdexl B7 1的基础上 ,对经rA dexl B7 1感染的B16细胞的体外生物学特性进行了研究。方法 以FACS、电镜等方法观察病毒感染前后B16细胞的变化。结果 ①重组腺病毒经HEK2 93细胞扩增、CsCl纯化后滴度可达 10 1 0 PFU ml,且 2 0MOI的病毒可使 95 %以上的B16细胞被感染。②细胞动力学研究显示 ,rAdexl B7 1对B16的生长及集落形成能力无影响。③FACS结果表明 ,rAdexl B7 1对B16细胞的增殖周期无影响。④扫描电镜及透射电镜结果表明 ,经rAdexl B7 1感染的B16细胞在表面形态及超微结构上出现变化。结论 重组腺病毒rAdexl B7 1对B16细胞的生长动力学无影响 ,对形态学有轻微影响。

hB7-1基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生物学特性及MHC Ib与HLA-DR抗原表达的影响

目的研究hB7-1基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生物学特性及MHCIb和HLA-DR抗原表达的影响。方法以腺病毒为载体将hB7-1基因转染SKOV3细胞,噻唑蓝还原法检测SKOV3细胞生长曲线;流式细胞技术观察转染前后细胞周期改变以及hB7-1、MHCIb、HLA-DR分子表达;电镜观察细胞形态学变化。结果hB7-1基因转染人卵巢癌SKOV3细胞前后细胞生长曲线无明显差异(P>0.05);SKOV3细胞感染病毒48h后在相同条件下形态上较感染前无明显改变;hB7-1基因转染48h后,SKOV3细胞表面MHCIb、HLA-DR抗原表达较转染前分别增高1.10±0.22和1.03±0.17,80%细胞表面有较高水平hB7-1基因表达,差异显著(P<0.05)。结论hB7-1基因转染人卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长能力、细胞周期、细胞超微结构变化等生物学特性无明显影响,可显著增强人卵巢癌SKOV3细胞表面的MHCIb和HLA-DR抗原表达,为实现卵巢癌基因治疗提供理论基础。

重组腺病毒载体介导共刺激分子B7.1基因对儿童肝母细胞瘤体外淋巴细胞增值的影响

目的研究含hB7-1基因的重组腺病毒载体对儿童肝母细胞瘤体外淋巴细胞增值的影响。方法以腺病毒为载体,将hB7-1基因转入HepG2细胞,以FCM检测HepG2和HepG2/hB7-1细胞表面B7-1分子的表达情况。观察HepG2和HepG2/hB7-1细胞的生长曲线。用混合淋巴细胞培养法检测瘤苗对T淋巴细胞增殖的影响。结果HepG2细胞表面B7-1分子表达水平低,其阳性率为1.1%。而HepG2/hB7-1的B7-1分子表达阳性率达到18.5%,B7-1基因的表达水平提高16.8倍。HepG2和HepG2/BB-102的生长曲线相比,后者生长曲线上升减缓,生长速度减慢。B7-1分子的表达促进了淋巴细胞的增殖,较对照组有显著性差异(P<0.05)。结论1.HepG2表面B7-1分子低水平表达是其弱免疫原性的主要原因。2.含hB7-1基因的重组腺病毒载体转染HepG2可以获得B7-1分子高表达的细胞株。3.重组腺病毒载体的转染可以降低肝母细胞瘤细胞的恶性表征。4.转染含hB7-1基因的瘤苗可以促进T淋巴细胞的增殖。

B7-1基因转染儿童肝母细胞瘤苗抗肿瘤免疫作用的研究

目的研究hB7-1基因以重组腺病毒载体转化儿童肝母细胞瘤后,转化细胞的抗肿瘤免疫作用。方法hB7-1基因重组腺病毒载体转入HepG2细胞后,获得高表达B7-1分子的HepG2/hB7-1细胞,MTT法检测HepG2/hB7-1细胞的生长情况,绘制生长曲线;ELISA法检测瘤苗体外对T淋巴细胞IFN-γ表达水平的影响。结果HepG2/hB7-1细胞表面的B7-1分于表达为18.5%,比HepG2细胞表达水平提高16.8倍。从HepG2/hB7-1细胞生长曲线可看到,转化hB7-1后细胞生长速度减慢,生长受到抑制。HepG2/hB7-1瘤苗刺激同种异体T淋巴细胞分泌IFN-γ的量明显超过HepG2细胞(P<0.01)。结论含hB7-1基因的重组腺病毒载体转染HepG2可以获得B7-1分子高表达的细胞株,降低肝母细胞瘤细胞的恶性表征,促进T淋巴细胞分泌IFN-γ,增强抗肿瘤免疫作用。