产生乳腺定位表达人CD14的转基因小鼠研究

将来自ＰＣＲ法合成的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端８９８ｂｐ上游区和人单核细胞表面分化抗原基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ片段构建的ＢＬＧ－ｈＣＤ１４融合基因纯化后，注入小鼠受精卵原核．实验共注射受精卵１１４９枚，经体外培养发育到２－细胞期的胚胎计９６８枚，发育率为８４．２％．从发育的胚胎中选择６３４枚移植到４６只假孕受体．其中１４只妊娠产仔，妊娠率３０．４％．妊娠受体共移植胚胎２０７枚，产仔４３只，产仔率２０．８％．经ＰＣＲ法检测８只为ＢＬＧ阳性整合，整合率２５．８％．检测泌乳的转基因阳性雌性小鼠，其中一只经过用生物素标记的鼠抗人ｈＣＤ１４单克隆抗体与琼脂糖凝胶转移片段简易杂交检测。

用PCR法构建乳腺特异性表达非乳蛋白基因的研究

将ＰＣＲ法分别从绵羊和人血基因组ＤＮＡ中扩增出的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端调控区８９８ｂｐ的片段和人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ的片段连接．连接片段插入ｐＵＣ１９ＥｃｏＲＩ－ＫｐｎＩ位点，构建成ｐＢＬＧ－ｈＣＤ１４质粒．该质粒经ＫｐｎＩ及ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切、ＰＣＲ法扩增ＢＬＧ和ｈＣＤ１４分析后，进一步用３２Ｐ－ＢＬＧ探针杂交确证．用ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切质粒片段ＢＬＧ－ｈＣＤ１４产生转基因小鼠以检测ＢＬＧ－ｈＣＤ１４在乳腺的表达能力．用免疫杂交法证实在转基因阳性小鼠乳汁中表达了ｈＣＤ１４．