表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立

目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达。结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5mRNA凝胶电泳可见193bp和75bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P<0.01);Western blot检测可见55.0×10~3(hCD4)和40.6×10~3(hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性。转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1RNA均显著升高(P<0.05)。结论成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究。