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表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建 被引量:1
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作者 吴红兵 田聆 +5 位作者 文艳君 刘玉梅 阚兵 杜小波 徐健蓉 魏于全 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期534-536,共3页
目的构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础。方法用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF_hCD40L,回收1 900 bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中XhoⅠ、EcoRⅤ双酶切位点,得到重组质粒pShu... 目的构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础。方法用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF_hCD40L,回收1 900 bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中XhoⅠ、EcoRⅤ双酶切位点,得到重组质粒pShuttle_hCD40L。经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy_1共转化BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞。酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒。结果酶切分析、PCR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy_1载体中。结论成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础。 展开更多
关键词 hcd40l基因 腺病毒载体 DNA同源重组 基因治疗
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