发夹式siRNA对hDNMT1基因表达的抑制作用

目的 研究发夹式siRNA对hDNMT1基因表达的抑制作用。方法 根据hDNMT1全长cDNA序列设计和合成与其互补的发夹式siRNA序列 ,并以发夹式siRNA序列为模板经体外合成siRNA表达盒 (SECs)。SECs通过脂质体载体转染结直肠癌细胞株HCT1 1 6后 ,经半定量RT PCR法检测hDNMT1mRNA的表达水平。结果 发夹式siRNA可以特异性地抑制hDN MT1基因。结论 通过SECs产生的发夹式siRNAs可以特异性抑制hDNMT1基因的表达 ;本研究为通过构建表达发夹式siR

si-DNMT1对肝门部胆管癌细胞抑癌基因甲基化的作用

目的研究RNA干扰对肝门部胆管癌细胞株QBC939抑癌基因甲基化的影响,初步探讨其在胆管癌治疗中的价值。方法构建靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体;运用脂质体介导法将其转染人胆管癌细胞QBC939;RT-PCR法检测不同时间点hD-NMT1、CDH1、p15的表达水平;MSP方法检测转染前后抑癌基因CDH1、p15的甲基化状态;MTT检测各组细胞的增殖能力。结果 1)hDNMT1的基因沉默恢复了抑癌基因CDH1、p15的表达水平;2)CDH1、p15的表达沉默是由启动子高甲基化导致的;3)转染靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效地抑制QBC939的增殖能力。结论靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效、持续、稳定发挥对hDNMT1的基因沉默作用,恢复抑癌基因CDH1、p15的表达水平,从而抑制QBC939肿瘤细胞增殖。