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hESCs/hiPSCs体外诱导产生红细胞的研究进展及其临床应用的展望 被引量:4
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作者 毛斌 马峰 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1067-1079,共13页
人类胚胎干细胞和多功能诱导性干细胞的诞生,标志着干细胞研究已经跨入了全新的应用时代。干细胞研究领域的一个重要方向是特定谱系成熟细胞的定向诱导分化。在诸多的血细胞中,成熟红细胞因为无核而携带着最小量的遗传物质,可能作为最... 人类胚胎干细胞和多功能诱导性干细胞的诞生,标志着干细胞研究已经跨入了全新的应用时代。干细胞研究领域的一个重要方向是特定谱系成熟细胞的定向诱导分化。在诸多的血细胞中,成熟红细胞因为无核而携带着最小量的遗传物质,可能作为最早的干细胞治疗产品而应用于输血替代治疗。最近,干细胞向造血细胞(包括红细胞)的研究正方兴未艾。但由于方法学上的偏差,诱导产生的红细胞的成熟度各有所不同。该文在结合了作者实验室的工作经验的基础上,对目前人类多潜能干细胞向红细胞特定诱导分化的方法做了综合的描述,并提出了该研究领域亟需解决的重大科学问题。 展开更多
关键词 hescs hiPSCs 红细胞 原始造血 成体造血
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L-抗坏血酸促进人胚胎干细胞向心肌细胞分化的研究
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作者 陈景 邱敏 +3 位作者 张海鹏 李慧丽 张梦珍 李晓红 《生物医学工程与临床》 CAS 2023年第5期545-552,共8页
目的用不同浓度的L-抗坏血酸(VitC)作为分化基础培养液中的诱导剂,观察其对人胚胎干细胞(hESC)分化为心肌细胞的影响,探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法复苏hESC,使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后,分别用含不同浓... 目的用不同浓度的L-抗坏血酸(VitC)作为分化基础培养液中的诱导剂,观察其对人胚胎干细胞(hESC)分化为心肌细胞的影响,探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法复苏hESC,使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后,分别用含不同浓度(0、10、20、30、40、50、60、70μmol/L)VitC的分化培养液对其进行诱导分化,在光学显微镜下观察分化过程。用实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分别检测干细胞特异性标志物Nanog和性别决定因子同源盒2(Sox2),心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心脏特异性同源盒转录因子(Nkx2.5)的表达。用免疫荧光检测Nanog、cTnT、Nkx2.5的蛋白表达变化。结果在分化基础培养液中,低浓度VitC(10~30μmol/L)不能诱导h ESC向心肌分化,随着VitC浓度的增高,干细胞逐渐往心肌方向分化,心肌分化效率逐渐提高,Nanog和Sox2的表达量逐渐下降;VitC浓度为40μmol/L或50μmol/L组在第8天开始出现自发跳动细胞,且有cTnT和Nkx2.5阳性表达。realtime PCR结果显示随分化时间延长,cTnT和Nkx2.5的mRNA表达逐渐增加,心肌表面标志物Nkx2.5、cTnT的mRNA表达量在VitC浓度40μmol/L和50μmol/L要比60μmol/L和70μmol/L的诱导效果更高。提示浓度大于60μmol/L就开始出现抑制分化的作用。结论实验研究证实VitC在hESC向心肌分化中是不可或缺的因子,研究还明确了VitC诱导h ESC分化为心肌细胞的适宜浓度范围。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hesc) 心肌分化 心肌细胞 L-抗坏血酸(VitC) 维生素C
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人胚胎干细胞培养系统的研究进展 被引量:2
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作者 刘雪梅 朱桂金 《生命科学》 CSCD 2007年第3期306-310,共5页
人胚胎干细胞(hESC)具有永久的自我更新和多潜能分化能力,可在一定条件下定向分化为三个胚层的各种细胞。这些特性使其在再生医学(细胞治疗)、药物筛选及早期胚胎发育研究中具有重要的应用前景;但人胚胎干细胞培养系统中大量的动物源性... 人胚胎干细胞(hESC)具有永久的自我更新和多潜能分化能力,可在一定条件下定向分化为三个胚层的各种细胞。这些特性使其在再生医学(细胞治疗)、药物筛选及早期胚胎发育研究中具有重要的应用前景;但人胚胎干细胞培养系统中大量的动物源性物质和复杂的未知成份大大阻碍了其医学应用价值,所以建立一个没有动物源物质、成份确定的人胚胎干细胞培养系统是非常重要的。本文简要介绍了为适应hESC临床应用和基础研究的需要,改良其培养系统的研究进展。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hesc) 临床等级 成份确定培养基(DM)
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人类胚胎干细胞标准的建立
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作者 杨玉艾 华进联 +1 位作者 马勇江 窦忠英 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期129-130,共2页
人类胚胎干细胞 (HESCs)在人类发育生物学研究及再生医学中具有重要的应用前景。人们在 HESCs建系及其分化研究上已取得一些进展 ,但各个细胞系的生物学特性有一定差异 ,文章讨论了有关 HESCs的标准及相关问题。
关键词 人类胚胎干细胞 发育生物学 再生医学 hescs建系 生物学特性
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人胚胎干细胞建株与维持培养条件的优化 被引量:4
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作者 蒋伟民 黄元华 马燕琳 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期349-352,366,共5页
人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚... 人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚胎干细胞成为治疗各种退行性疾病的理想细胞来源。然而,在目前培养条件下所建立的胚胎干细胞株,仍然存在动物源性物质潜在污染的问题。因此,更优化的建株及培养条件十分重要。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hesc) 内细胞团 饲养层细胞 培养条件 mTESR1
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人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立 被引量:5
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作者 郁金凤 孙文翠 +13 位作者 路旭琳 边国慧 潘旭 毛斌 黄淑 赖默温 周涯 邹庆 李晴 曾宪波 李玉佳 陈利民 周家喜 马峰 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期482-487,共6页
目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱... 目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hescs) 巨噬细胞 诱导分化
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胶原支架促进人类多能干细胞向红细胞的诱导分化 被引量:2
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作者 王敏 潘旭 +5 位作者 毛斌 赖默温 滕嘉雯 陈谊金 周琼秀 马峰 《中国输血杂志》 CAS 2018年第4期326-331,F0001,共7页
目的建立人胚胎干细胞(hESCs)来源的造血干/组细胞向红细胞分化的体外3D培养方法。方法hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM-S3)基质细胞共培养14 d后获得CD34^+CD45^+造血干/祖细胞,对获得的CD34^+CD45^+细胞扩增5 d后,以相同... 目的建立人胚胎干细胞(hESCs)来源的造血干/组细胞向红细胞分化的体外3D培养方法。方法hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM-S3)基质细胞共培养14 d后获得CD34^+CD45^+造血干/祖细胞,对获得的CD34^+CD45^+细胞扩增5 d后,以相同初始接种数量分别接种于胶原水凝胶、透明质酸水凝胶、Ⅰ型胶原蛋白构建的三维(3D)支架材料(简称胶原支架)中,在体外模拟骨髓微环境,做红细胞定向分化,以普通液体悬浮培养(简称液体培养)为对照,通过MGG染色、流式细胞术、免疫染色、qRT-PCR等手段分别对收获的细胞做形态学、红系特异性表面标志表达情况、红系细胞成熟程度以及红系细胞发育过程中相关基因的表达情况分析。结果红系定向分化14 d后,胶原支架中收获的总细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.50、1.19、1.33倍,GPA^+CD71^+细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.55、1.25及1.48倍;GPA^+CD36^+细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.65、1.07、1.36倍。结论利用Ⅰ型胶原蛋白构建的3D支架材料可模拟骨髓微环境,促进红细胞分化。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hescs) 红细胞 胶原支架 三维(3D)培养
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拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究 被引量:1
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作者 路旭琳 郁金凤 +11 位作者 孙文翠 毛斌 邹庆 潘旭 赖默温 周涯 李晴 曾宪波 黄淑 周琼秀 周家喜 马峰 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期488-492,共5页
目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细... 目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hescs) 拟胚体(EB) 造血表面标志 红细胞 悬浮培养 体外诱导
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敲低胎盘特异性蛋白8(PLAC8)抑制人胚胎干细胞增殖并促进其凋亡 被引量:1
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作者 李如梅 李敏 陈蕾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1089-1094,共6页
目的探讨胎盘特异性蛋白8(PLAC8)对人胚胎干细胞(hESC)增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR和Western blot法检测空载体组、PLAC8短发夹RNA(shPLAC8)组、过表达PLAC8(PLAC8-OE)组感染hESC的效率;以及各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和... 目的探讨胎盘特异性蛋白8(PLAC8)对人胚胎干细胞(hESC)增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR和Western blot法检测空载体组、PLAC8短发夹RNA(shPLAC8)组、过表达PLAC8(PLAC8-OE)组感染hESC的效率;以及各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(CCND1)的mRNA和蛋白水平。流式细胞术检测敲低和过表达PLAC8对hESC凋亡的影响。结果PLAC8敲低组的CCND1、PCNA的mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡增加;PLAC8过表达组CCND1和PCNA的mRNA和蛋白表达略上调,细胞凋亡略有下降,但差异均无统计学意义。结论敲低PLAC8的表达会抑制hESC增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hesc) 胎盘特异性蛋白8(PLAC8) 细胞增殖 细胞凋亡
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P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生
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作者 常晶 滕嘉雯 +10 位作者 孙文翠 曾加辉 张勇刚 潘旭 周涯 赖默温 边国慧 周琼秀 刘嘉馨 陈波 马峰 《中国输血杂志》 CAS 2019年第3期222-227,共6页
目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol... 目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂[CDKN1A(P21)] 多西环素(DOX) 真核诱导过表达系统 人胚胎干细胞(hesc) 主动脉-性腺-中肾(AGM)基质细胞 造血发生
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bFGF诱导MEF生成的条件培养基对人胚胎干细胞生长的影响 被引量:5
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作者 周轶平 ROCHAT Anne +4 位作者 HATZFELD Antoinette PEIFFER Isabelle BARBET Romain HATZFELD Jacques 李玛琳 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期193-199,共7页
为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)... 为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)为阴性对照,同样浓度的bFGF添加于SR培养基(bFGF-SR)为空白对照。通过形态学特征和碱性磷酸酶染色法对hES2的生长分化状态进行评估。结果发现,培养一周内,未分化hES2克隆的比率,阴性对照为23%;空白对照组为13%-31%。当bFGF浓度为0.1,0.3,1,4ng/ml时,bFGF-MCM组未分化克隆的比率分别为44%,74%,77%和78%,与阴性和空白对照组相比,未分化克隆的比率均有不同程度提高,差异有统计学意义(P<0.01)。该结果揭示了经bFGF诱导的MEF细胞所产生的条件培养基具备了维持hES细胞正常生长而不分化的能力。对bFGF-MCM的深入分析,有望更好地了解hESC的生长与分化机制。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠胚胎成纤维细胞 人胚胎干细胞 条件培养基 分化抑制
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5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究 被引量:1
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作者 王力 方志荣 +3 位作者 高连如 张宁坤 徐小红 朱智明 《转化医学杂志》 2017年第3期137-141,共5页
目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse em... 目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养h ESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、b FGF诱导组、5-aza+b FGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)。结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+b FGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+b FGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光法示5-aza+b FGF联合诱导组c Tn T的表达最为明显(P<0.05)。结论 h ESCs在体外经5-aza+b FGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 心肌细胞 细胞分化 人胚胎干细胞 5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子
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miR-665在宫腔粘连及宫颈癌患者中的表达及意义 被引量:1
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作者 祝晓玲 刘淑梅 +1 位作者 杨爱华 陶安福 《广东医学》 CAS 2020年第18期1851-1857,共7页
目的探讨miR-665在宫腔粘连及宫颈癌患者中的表达水平及作用机制,以期为宫腔粘连及宫颈癌患者的早期预防、精准诊疗提供有价值的分子生物学标志物。方法采用TCGA、StarBase等生物信息学软件分析miR-665在宫颈癌患者中的表达水平;采用RT-... 目的探讨miR-665在宫腔粘连及宫颈癌患者中的表达水平及作用机制,以期为宫腔粘连及宫颈癌患者的早期预防、精准诊疗提供有价值的分子生物学标志物。方法采用TCGA、StarBase等生物信息学软件分析miR-665在宫颈癌患者中的表达水平;采用RT-qPCR实验分析miR-665在宫腔粘连患者组织中的表达水平;采用CCK8实验、集落形成实验、Transwell迁移实验和Western blot实验分析miR-665对hESC细胞增殖能力和迁移能力的影响;采用TargetScan预测和EGFP报告载体实验验证DRAM1为miR-665的靶基因;采用HE染色、免疫组化实验和Western blot实验验证miR-665对体内宫腔粘连的影响。结果miR-665在宫腔粘连患者及宫颈癌患者组织中是低表达的。过表达miR-665能够显著抑制hESC细胞的增殖能力和上皮-间质转化进程。miR-665能够直接靶定DRAM1。过表达miR-665能够发挥缓解体内宫腔粘连的作用。结论miR-665可能通过调控DRAM1在宫腔粘连及宫颈癌中发挥重要作用。 展开更多
关键词 miR-665 DRAM1 hesc 宫腔粘连 增殖 迁移
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高效诱导人胚胎干细胞成为内皮祖细胞
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作者 房芳 张博文 +5 位作者 何丽娟 周军年 王静雪 岳文 谢小燕 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第6期548-555,共8页
血管的发生和发育不仅对胚胎形成中各器官的发育分化十分重要,并且对成体的创伤修复和生殖功能也具有重要意义.血管内皮细胞是形成心血管封闭管道系统的形态基础,体外多种细胞可经诱导分化产生出内皮祖/内皮细胞(endothelialprogenitor/... 血管的发生和发育不仅对胚胎形成中各器官的发育分化十分重要,并且对成体的创伤修复和生殖功能也具有重要意义.血管内皮细胞是形成心血管封闭管道系统的形态基础,体外多种细胞可经诱导分化产生出内皮祖/内皮细胞(endothelialprogenitor/endothelial cells,EPCs/ECs),但是存在一些不足.鉴于人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)诱导分化的全能性和长期增殖能力,为EPCs/ECs提供了新的来源.现有文献报道,hESCs诱导分化为EPCs/ECs的比例较低,为了提高该诱导分化效率,我们使用分阶段的二维诱导方法,首先将细胞接种在超纯层纤连蛋白(Matrigel)上,之后通过在不同阶段添加不同的因子,最终获得CD31+KDR+细胞的比例可以达到16%.进一步内皮诱导分化的结果显示,获得的EPCs/ECs的比例可以达到约32%,这些细胞具有在Matrigel上形成血管样结构的能力,可结合植物凝集素.实时定量PCR的结果显示,诱导分化所得的细胞表达众多内皮相关基因,并且免疫荧光的结果也表明部分细胞表达内皮细胞特异性表面标志CD31. 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 内皮祖 内皮细胞 诱导分化
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hPDGF-BB腺病毒表达载体的构建及其在表皮干细胞中的表达
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作者 李新平 张鸣生 +4 位作者 白利明 邱家琦 白文芳 吴志东 吴博 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2010年第4期434-436,共3页
目的构建hPDGE-BB(human platelet-derived growth factor-BB)腺病毒表达载体并观察其在人表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)中PDGF-BB蛋白的表达情况。方法从质粒pCMV-SPORT6上通过PCR扩增hPDGF-BB基因,将其酶切后连接到... 目的构建hPDGE-BB(human platelet-derived growth factor-BB)腺病毒表达载体并观察其在人表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)中PDGF-BB蛋白的表达情况。方法从质粒pCMV-SPORT6上通过PCR扩增hPDGF-BB基因,将其酶切后连接到穿梭质粒pAd-track-CMV上,线性化后在BJ5183细菌中和骨架质粒pAdeasy-1进行同源重组,筛选阳性克隆并酶切鉴定,线性化后转染入HEK293细胞中进行包装、扩增,得到重组腺病毒rAD-PDGF。原代培养hESCs,流式细胞术分析hESCs的纯度,用收集的腺病毒感染靶细胞hESCs后,Westornblot检测其表达PDGF-BB情况。结果成功使重组腺病毒载体rAD-PDGF携带PDGF-BB基因,流式细胞术检测hESCs的纯度达88%以上,rAD-PDGF成功导入hESCs后,Westorn blot检测hESCs能表达PDGF-BB蛋白。结论成功构建的重组腺病毒rAD-PDGF在hESCs中表达PDGF-BB蛋白。 展开更多
关键词 PDGE-BB 腺病毒 表皮干细胞
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TMSN-AA纳米复合物促进人胚胎干细胞向心肌细胞分化的潜在机制研究
16
作者 任明明 韩振 +5 位作者 陈立波 李敬来 冯钢 许志锋 黄磊 欧阳春 《中国现代医学杂志》 CAS 2018年第24期13-21,共9页
目的研究优化后的TMSN-AA纳米复合物促进人胚胎干细胞(h ESCs)心肌分化的可能性,并探讨其诱导心肌分化的潜在机制。方法采用优化抗坏血酸(AA)负载的荧光TRITC介孔二氧化硅纳米粒子(TMSN-AA)作为诱导剂,诱导h ESCs细胞心肌分化。通过荧... 目的研究优化后的TMSN-AA纳米复合物促进人胚胎干细胞(h ESCs)心肌分化的可能性,并探讨其诱导心肌分化的潜在机制。方法采用优化抗坏血酸(AA)负载的荧光TRITC介孔二氧化硅纳米粒子(TMSN-AA)作为诱导剂,诱导h ESCs细胞心肌分化。通过荧光定位检测该诱导剂进入细胞情况,流式细胞仪检测其进入细胞后对细胞存活与凋亡的影响,Western blot检测TMSN-AA诱导后,心肌标记基因cTn I、FLK-1以及干性基因OCT4和SOX2的表达以及相关信号通路ERK1/2的激活情况。结果荧光定位发现TMSN-AA可以靶向进入h ESCs细胞,流式细胞仪分析结果显示,二氧化硅和荧光染料四甲基罗丹明修饰介孔二氧化硅不会影响h ESCs的存活和凋亡;且TMSN-AA诱导后,干性基因OCT4和SOX2均下调,且上调心肌标记基因c Tn I和FLK-1的表达。Western blot检测结果显示,TMSN-AA的处理可以激活ERK1/2信号通路,同时证实,该过程Akt信号通路并未参与其中。结论优化后的TMSN-AA纳米载体可以成功进入h ESCs细胞,并靶向诱导其心肌分化,而该诱导过程,至少在一定程度上是通过激活ERK1/2,而不是Akt信号通路实现的。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 抗坏血酸 介孔二氧化硅纳米粒子
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Stem cell technologies in human health: Boon or bane?
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作者 Madhavi Tripathi Sangeeta Singh 《Journal of Biosciences and Medicines》 2015年第11期16-24,共9页
The stem cells of an organism only possess extraordinary capacity to change into different cell types during the early life and growth of an organism. When these stem cells divide into different new cells, these eithe... The stem cells of an organism only possess extraordinary capacity to change into different cell types during the early life and growth of an organism. When these stem cells divide into different new cells, these either remain as stem cells or develop to become other cells with specialized function. For this reason, stem cells offer direct relevance to human health, as theoretically, using stem cell technology, different organs are expected to be regenerated. To this, the Human Embryonic Stem Cells (HESCs) are natural pluripotent cell, but ethical issues covering many countries have put research work on a bit back-foot. However, the Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) technology has completely revitalized the world to use this technology universally and it therefore seems that more research on this technology will surely be of enormous help in public health. In addition, application of the stem cell technology in personalized-medicine has been started recently. In this concern, the stem cell banking facilities have provided new avenues for preserving the cord blood of the new-borne child and treat them in future by using her/his own preserved stem cells. However, like all new technologies, the output from stem cell research requires to be evaluated more closely. Furthermore, with proper guidelines on ethical issues and extended research following these strategies, the stem cell technology is expected to not only be of huge benefit to human health, but also the benefit can be extended to the survival of endangered animals as well. 展开更多
关键词 HUMAN Embryonic STEM CELLS (hescs) Induced PLURIPOTENT STEM CELLS (iPSCs) HUMAN Health Personalized Medicine
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Use of Human Embryonic Stem Cells in the Treatment of Diabetes Mellitus: A Case Series
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作者 Geeta Shroff 《Journal of Diabetes Mellitus》 2015年第4期313-318,共6页
Introduction: Diabetes mellitus (DM), a metabolic disorder, is known to be highly prevalent in people aged 40 - 60 years in developing countries whereas in developed countries, it mostly affects people above the age o... Introduction: Diabetes mellitus (DM), a metabolic disorder, is known to be highly prevalent in people aged 40 - 60 years in developing countries whereas in developed countries, it mostly affects people above the age of 60 years. It is of two types: DM type I, an autoimmune disorder that mostly onsets after an infection and DM type II that is commonly associated with obesity. Several treatments are available for the treatment of DM, but none has successfully cured diabetes. Nowadays, stem cell therapy is being investigated for use in the treatment of DM and has shown positive results. Case Report: Our study presented results of three diabetic patients who were treated with human embryonic stem cell (hESC) therapy. Following the therapy, blood glucose levels were reduced. An improvement was observed in eye sight, stamina, gait pattern endurance, mental focus ability and muscle strength. There was a reduction in secondary side effects of high blood sugar such as affectation of cardiac, kidneys, polyneuropathy, vision etc. No adverse events and teratoma formation were observed after the treatment. Conclusion: It was concluded that hESCs showed good therapeutic potential in the treatment of patients with diabetes. 展开更多
关键词 DIABETES hesc THERAPY IPSCS
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采用高通量方法筛选用于人类胚胎干细胞体外长期培养的温敏型水凝胶
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作者 张嵘 Heidi KMjoseng +2 位作者 Rut Besseling Paulde Sousa Mark Bradley 《常州大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第1期9-14,共6页
人类胚胎干细胞(hESC)的体外培养通常需要附着在蛋白质培养基质或饲养细胞层上,并主要依靠细胞的酶解离方法传代。采用动物来源的蛋白酶处理如此敏感的细胞会损伤膜蛋白、增加污染风险,这显然是不可取的,应尽量避免使用。在此,我们汇报... 人类胚胎干细胞(hESC)的体外培养通常需要附着在蛋白质培养基质或饲养细胞层上,并主要依靠细胞的酶解离方法传代。采用动物来源的蛋白酶处理如此敏感的细胞会损伤膜蛋白、增加污染风险,这显然是不可取的,应尽量避免使用。在此,我们汇报了采用高通量方法筛选出一类以2-(二乙基氨基)乙基丙烯酸酯为主要单体的温敏型水凝胶。该类材料不仅具有在小幅度降温时改变性能以使其表面生长的干细胞脱粘附的功能,从而取代细胞传代中使用的生物酶,而且能取代蛋白质基质使hESC可以在体外进行长期培养(>20代),并保持完整的干细胞特征。这些具有可控化学结构的、可取代具动物来源生物基质的合成材料代表了一种新型的体系。它将是一种能使干细胞的培养达到可控、高效和安全的材料,会大大促进干细胞的深入研究和在临床医学中的应用。 展开更多
关键词 人类胚胎干细胞 聚合物微点阵列芯片 温敏型水凝胶
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Activin-Directed Differentiation of Human Embryonic Stem Cells Differentially Modulates Alveolar Epithelial Wound Repair via Paracrine Mechanism
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作者 Khondoker M. Akram Monica A. Spiteri Nicholas R. Forsyth 《Stem Cell Discovery》 2014年第3期67-82,共16页
Differentiated embryonic stem cells (ESC) can ameliorate lung inflammation and fibrosis in animal lung injury models;therefore, ESC, or their products, could be candidates for regenerative therapy for incurable lung d... Differentiated embryonic stem cells (ESC) can ameliorate lung inflammation and fibrosis in animal lung injury models;therefore, ESC, or their products, could be candidates for regenerative therapy for incurable lung diseases, such as idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). In this study, we have investigated the paracrine effect of differentiated and undifferentiated human ESC on alveolar epithelial cell (AEC) wound repair. hESC line, SHEF-2 cells were differentiated with Activin treatment for 22 days in an embryoid body (EB) suspension culture. Conditioned media (CM) which contain cell secretory factors were collected at different time points of differentiation. CM were then tested onin vitro?wound repair model with human type II AEC line, A549 cells (AEC). Our study demonstrated that CM originated from undifferentiated hESC significantly inhibited AEC wound repair when compared to the control. Whereas, CM originated from Activin-directed hESC differentiated cell population demonstrated a differential reparative effect on AEC wound repair model. CM obtained from Day-11 of differentiation significantly enhanced AEC wound repair in comparison to CM collected from pre- and post-Day-11 of differentiation. Day-11 CM enhanced AEC wound repair through significant stimulation of cell migration and cell proliferation. RT-PCR and immunocytochemistry confirmed that Day-11 CM was originated form a mixed population of endodermal/mesodermal differentiated hESC. This report suggests a putative paracrine-mediated epithelial injury healing mechanism by hESC secreted products, which is valuable in the development of novel stem cell-based therapeutic strategies. 展开更多
关键词 EMBRYONIC STEM Cells ALVEOLAR EPITHELIAL Wound Repair Idiopathic Pulmonary Fibrosis (IPF) EMBRYONIC STEM Cell-Mediated PARACRINE Mechanism Activin-Directed hesc Differentiation
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