人Elp3(human elongator protein 3,hElp3)具有组蛋白乙酰转移酶活性,是与延伸中的RNA聚合酶Ⅱ结合的elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白的乙酰化修饰与基因的转录延伸.Elp3及其复合物功能异常与人类多种疾病相关.为运用染色质免...人Elp3(human elongator protein 3,hElp3)具有组蛋白乙酰转移酶活性,是与延伸中的RNA聚合酶Ⅱ结合的elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白的乙酰化修饰与基因的转录延伸.Elp3及其复合物功能异常与人类多种疾病相关.为运用染色质免疫沉淀等手段深入研究Elp3功能,PCR法克隆pYES2-hElp3质粒中编码hElp3的N端亲水区段(1～69氨基酸残基),构建原核表达载体pMXB10-hElp3-210,经IPTG诱导和几丁质柱纯化后,免疫兔制备多克隆抗体.ELISA检测显示,该抗体有较高的效价(不低于1∶2 500).免疫印迹实验结果表明,该抗体可与纯化的及HeLa细胞中的hElp3蛋白特异性结合.运用该抗体对转入elp3Δ菌株的人Elp3的染色质免疫沉淀实验结果表明,人Elp3可参与酵母SSA3基因的转录调控,这可能是人Elp3能够部分补偿酵母SSA3基因延迟表达缺陷的原因.展开更多
人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功...人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5%的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.展开更多
文摘人Elp3(human elongator protein 3,hElp3)具有组蛋白乙酰转移酶活性,是与延伸中的RNA聚合酶Ⅱ结合的elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白的乙酰化修饰与基因的转录延伸.Elp3及其复合物功能异常与人类多种疾病相关.为运用染色质免疫沉淀等手段深入研究Elp3功能,PCR法克隆pYES2-hElp3质粒中编码hElp3的N端亲水区段(1～69氨基酸残基),构建原核表达载体pMXB10-hElp3-210,经IPTG诱导和几丁质柱纯化后,免疫兔制备多克隆抗体.ELISA检测显示,该抗体有较高的效价(不低于1∶2 500).免疫印迹实验结果表明,该抗体可与纯化的及HeLa细胞中的hElp3蛋白特异性结合.运用该抗体对转入elp3Δ菌株的人Elp3的染色质免疫沉淀实验结果表明,人Elp3可参与酵母SSA3基因的转录调控,这可能是人Elp3能够部分补偿酵母SSA3基因延迟表达缺陷的原因.
文摘人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5%的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.
