转染hEndostatin基因对CNE2细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:肿瘤的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡,有效地抑制肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨转染人内皮抑素基因hEndostatin对人鼻咽癌细胞株CNE2裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导法,分别将pBlast-hIL-hEndostatin、pBlast-hEndostatin和pBlast-MCS质粒导入人鼻咽癌细胞株CNE2,MTT法在体外检测转导细胞表达的hEndostatin的活性,并在体内实验中观察转导的CNE2细胞在裸鼠上的致瘤性的差异。结果:转染pBlast-hIL-hEndostatin的CNE2细胞的上清能显著抑制血管内皮细胞ECV304的生长,其在裸鼠体内形成的瘤组织重量和体积均显著低于对照组(P<0.01),生长速度明显慢于对照组细胞。结论:转染hEndostatin基因能有效抑制CNE2细胞在裸鼠体内的生长。

人Endostatin cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

Endostatin是一种新发现的血管生成抑制因子 ,具有很强的抗肿瘤活性 .为了研究人 Endostatin的生物学功能和作用机制 ,作者从人胎肝组织中克隆到人 Endostatin c DNA ,然后将其插入到 p SQE表达质粒中 ,转化Escherichia.coli BL 2 1(DE3) ,获得了 p SQE- END/ BL 2 1(DE3)表达工程菌 ,对其诱导表达产物 h Endostatin进行了分离、纯化和复性的研究 .结果表明 ,h Endostatin的表达量可达菌体总蛋白的 30 % ,表达产物主要以包涵体 (Inclusionbodies,IBs)形式存在于菌体中 .菌体经超声破碎、离心、洗涤 ,然后用 Ni2 + - Sepharose 6 B柱一步法亲和层析 ,得到电泳纯度为 95 %的 h Endostatin.通过研究 GSSG浓度、p H值、复性时间等参数 ,获得了 h Endostatin包涵体的最适复性条件 .经细胞毒性试验测定 ,复性产物对 1H11内皮细胞的 ED5 0约为 70 0 ng/ m