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逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达
被引量:
1
1
作者
宋之明
张绍昆
+1 位作者
孙洋
任琦
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1775-1778,共4页
目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔...
目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔关节软骨细胞,经G418筛选阳性克隆,采用RT-PCR及免疫化学染色检测转染软骨细胞中hIGF-I的表达情况,并在荧光显微镜下观察标记基因GFP的表达情况。采用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学染色、二甲基亚甲蓝法及ELISA法对转染hIGF-I后的软骨细胞的增殖能力及表型进行检测。结果 G418筛选后获得的软骨细胞阳性克隆,经RT-PCR和免疫细胞化学检测表明hIGF-1基因在mRNA和蛋白质水平得到稳定表达,荧光显微镜下观察转染的软骨细胞可激发出绿色荧光,证明转染成功。转染软骨细胞株的增殖能力、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌水平,在转染后6 w内均高于同时间点未转染的软骨细胞,差异具有显著性(P<0.05)。结论逆转录病毒载体能有效地将hIGF-I基因转染至兔软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃,能够在较长时间维持软骨细胞表型,为进一步研究软骨缺损的组织工程修复和基因治疗打下基础。
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关键词
人胰岛素样生长因子-I
逆转录病毒载体
软骨细胞
基因转移
下载PDF
职称材料
人胰岛素生长因子1的原核表达及其单克隆抗体的制备
2
作者
黎安玲
陈薇
+2 位作者
杨桂
胡汉宁
汪付兵
《公共卫生与预防医学》
2014年第5期8-10,共3页
目的原核表达、纯化人胰岛素样生长因子1(hIGF-I),并制备其单克隆抗体(mAb)。方法通过RT-PCR方法从人体肝脏组织中扩增得到hIGF-I基因片段,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)/hIGF-I,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将表达蛋白纯化后免疫...
目的原核表达、纯化人胰岛素样生长因子1(hIGF-I),并制备其单克隆抗体(mAb)。方法通过RT-PCR方法从人体肝脏组织中扩增得到hIGF-I基因片段,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)/hIGF-I,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将表达蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对hIGF-I的特异性单克隆抗体。结果成功表达出了hIGF-I蛋白。SDS-PAGE电泳显示所表达蛋白质的相对分子量(Mr)大小约为18 KD。获得了1株能够稳定表达抗hIGF-I抗体的杂交瘤细胞株(8F2),其分泌的mAb的IgG亚类(型)为IgG2b,ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1∶7.5×105。Western-blot结果显示抗hIGF-I mAb具有良好的特异性。结论成功制备了抗hIGF-I mAb,为进一步研究IGF-I在肿瘤治疗中的作用提供了有力的工具。
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关键词
higf-i
原核表达
单克隆抗体
原文传递
题名
逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达
被引量:
1
1
作者
宋之明
张绍昆
孙洋
任琦
机构
吉林大学第一医院骨科
吉林大学白求恩医学院免疫学系
长春生物制品研究所疫苗六室
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1775-1778,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30400447)
文摘
目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔关节软骨细胞,经G418筛选阳性克隆,采用RT-PCR及免疫化学染色检测转染软骨细胞中hIGF-I的表达情况,并在荧光显微镜下观察标记基因GFP的表达情况。采用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学染色、二甲基亚甲蓝法及ELISA法对转染hIGF-I后的软骨细胞的增殖能力及表型进行检测。结果 G418筛选后获得的软骨细胞阳性克隆,经RT-PCR和免疫细胞化学检测表明hIGF-1基因在mRNA和蛋白质水平得到稳定表达,荧光显微镜下观察转染的软骨细胞可激发出绿色荧光,证明转染成功。转染软骨细胞株的增殖能力、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌水平,在转染后6 w内均高于同时间点未转染的软骨细胞,差异具有显著性(P<0.05)。结论逆转录病毒载体能有效地将hIGF-I基因转染至兔软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃,能够在较长时间维持软骨细胞表型,为进一步研究软骨缺损的组织工程修复和基因治疗打下基础。
关键词
人胰岛素样生长因子-I
逆转录病毒载体
软骨细胞
基因转移
Keywords
higf-i
Retroviral vector
Chondrocytes
Gene transfer
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
下载PDF
职称材料
题名
人胰岛素生长因子1的原核表达及其单克隆抗体的制备
2
作者
黎安玲
陈薇
杨桂
胡汉宁
汪付兵
机构
武汉大学中南医院检验科
出处
《公共卫生与预防医学》
2014年第5期8-10,共3页
基金
国家自然科学基金资助(81371897)
文摘
目的原核表达、纯化人胰岛素样生长因子1(hIGF-I),并制备其单克隆抗体(mAb)。方法通过RT-PCR方法从人体肝脏组织中扩增得到hIGF-I基因片段,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)/hIGF-I,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将表达蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对hIGF-I的特异性单克隆抗体。结果成功表达出了hIGF-I蛋白。SDS-PAGE电泳显示所表达蛋白质的相对分子量(Mr)大小约为18 KD。获得了1株能够稳定表达抗hIGF-I抗体的杂交瘤细胞株(8F2),其分泌的mAb的IgG亚类(型)为IgG2b,ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1∶7.5×105。Western-blot结果显示抗hIGF-I mAb具有良好的特异性。结论成功制备了抗hIGF-I mAb,为进一步研究IGF-I在肿瘤治疗中的作用提供了有力的工具。
关键词
higf-i
原核表达
单克隆抗体
Keywords
higf-i
Prokaryotic expression
Monoclonal antibody
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达
宋之明
张绍昆
孙洋
任琦
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
下载PDF
职称材料
2
人胰岛素生长因子1的原核表达及其单克隆抗体的制备
黎安玲
陈薇
杨桂
胡汉宁
汪付兵
《公共卫生与预防医学》
2014
0
原文传递
已选择
0
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引证文献
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