利用昆虫杆状病毒表达系统表达人KCTD9蛋白

目的应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(sf9细胞)中表达人KCTD9蛋白,以进行其功能学研究。方法从pMD18-T-hKCTD9质粒中扩增hKCTD9全长基因片段,连接至pENTR/D-TOPO载体,将pENTR/D-TOPO-hKCTD9质粒与线形杆状病毒DNA在体外重组后,转染易感细胞系昆虫sf9细胞。采用免疫共聚焦和WesternBlot法分析融合蛋白的表达;在电子显微镜下观察病毒颗粒的形成。结果凝胶电泳分析hKCTD9基因存在于各载体中;激光免疫共聚焦显微镜证实感染重组杆状病毒的sf9细胞核内可见绿色荧光,提示目的基因表达正确;WesternBlot进一步显示hKCTD9蛋白大小约为55KD;透射电子显微镜观察发现被感染的sf9细胞核涨大、透亮,核内清晰可见大量的杆状病毒颗粒。结论 hKCTD9在昆虫杆状病毒表达系统中被成功表达,为进一步功能学研究奠定了基础。