绵羊HLF基因多态性及其与肌肉脂肪酸、氨基酸含量的关联分析

为了研究人乳铁蛋白(human lactoferrin,HLF)基因多态性对绵羊肉质性状的影响,试验以双乾肉羊为研究对象,采用Sanger测序方法寻找HLF基因第2外显子序列的SNP位点,检测HLF基因多态性,分析不同基因型与脂肪酸和氨基酸含量的关联性。结果表明:在绵羊HLF基因第2外显子序列179 bp处存在A>C突变,且为同义突变,存在AA、AC和CC 3种基因型,相应频率分别为30.6%、57.1%和12.2%,其中AC为优势等位基因型;有A和C 2个等位基因,相应频率分别为40.8%和59.2%,其中C为优势等位基因。A>C SNP位点均处Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);杂合度(He)为0.4831,有效等位基因数(Ne)为1.9345,纯合度(Ho)为0.5169,该位点属于中度多态(0.250.05)。说明HLF基因多态性对脂肪酸及氨基酸含量有一定影响。

同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响

【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因(hLF)打靶山羊β-乳球蛋白基因(BLG)座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG-/hLF+基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位点定向精准分子修饰的遗传育种提供借鉴。【方法】针对山羊BLG基因第一外显子区域设计构建sgBLG/Cas9载体,电转染山羊胎儿成纤维细胞,PCR验证BLG基因座位点致突变活性;以BLC14乳腺特异性表达载体为基础构建3种同源臂长度(6.0、3.5和1.2 kb)的hLF基因打靶载体,分别与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经500μg/mLG418筛选后,采用PCR检测基因打靶情况。【结果】sgBLG/Cas9载体在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座附近切割DNA双链的致突变活性效率在30%~35%。构建获得3种同源臂长度的hLF基因打靶载体(BLC14-1、BLC14-2和BLC14-3),对应的同源臂长度分别为6.0、3.5和1.2 kb;将3种hLF基因打靶载体与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经5次电转染和G418筛选,分别获得83、77和86株药物抗性细胞,经PCR同源重组检测最终获得42、38和44株BLG-/hLF+基因打靶细胞株,即hLF基因在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座的平均打靶效率分别为50.6%(42/83)、49.4%(38/77)和51.2%(44/86)。3种不同长度同源臂构建的hLF基因打靶载体在山羊BLG基因座位点的打靶效率在统计学上无显著差异(P>0.05),表明同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊BLG基因座位点无显著影响。【结论】利用CRISPR/Cas9系统介导hLF基因打靶山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座位点能成功获得多株hLF+/BLG-基因打靶细胞株(BLG基因座定点打靶hLF基因),但打靶载体同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导BLG位点定向整合hLF基因的打靶效率无明显影响。

转人乳铁蛋白基因奶牛多重PCR检测方法的研究

本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,hLF)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。本方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。

伴E2A-HLF融合基因的急性淋巴细胞白血病合并高钙血症——二例报告附文献复习

目的提高对伴E2A—HLF融合基因的急性淋巴细胞白血病（ALL）合并高钙血症的认识，探讨其发病机制、特殊融合基因与高钙血症的关系及其预后。方法报道2例伴E2A—HLF融合基因的ALL合并高钙血症患者的症状和体征、实验室检查指标、X线检查结果以及治疗和转归。结果2例患者均存在t（17；19）（q22，p13）形成的E2A—HLF融合基因，在化疗后3个月左右白血病复发，并出现高血钙，其中1例还出现病理性骨折。化疗后高钙血症可纠正或减轻。结论高钙血症在儿童急性白血病中属于较少见的并发症。在B系来源的淋巴细胞白血病中，存在E2A—HLF融合基因时需严密监测有无此并发症的可能，同时高血钙也是其肿瘤治疗过程中出现复发的重要提示。