SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR方法的建立及检测乳腺组织hMAM mRNA的表达水平

目的建立1种简便、有效的SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR（SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR）方法检测乳腺癌组织、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白（hMAM）mRNA表达水平。方法对SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR检测乳腺癌细胞株MDA—MB—231表达hMAM mRNA的反应条件进行优化，初步检验该方法的重复性、灵敏性。应用该方法检测11例健康志愿者外周血hMAM mRNA表达，检验该方法的特异性，并对10例乳腺癌组织、10例对应癌旁乳腺组织hMAM mRNA表达水平进行测定。结果SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR可重复栓出乳腺癌细胞株MDA—MB-231极低表达hMAM mRNA，CT值为34．45～34．67，变异系数（CV）=0．25％。健康志愿者外周血中hMAM mRNA均阴性。乳腺癌组织hMAM mRNA阳性率为80．0％（8／10），其中Ⅰ期1例（100．0％），其量为37800；Ⅱ期6例（100．0％），量为100．4（中位）；Ⅲ期1例（33．3％），量为2．94。结论建立的SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR方法具有简便、特异、重复性、灵敏度好、定量结果可靠、直观等优点，应用于乳腺癌组织和癌旁乳腺组织hMAM mRNA的定量检测是理想的。

hMAM mRNA在检测乳腺癌外周血微小转移中的应用

目的 探讨乳腺组织特异性基因hMAMmRNA作为检测乳腺癌血道微小转移指标的可能性。方法 采用巢式PCR结合荧光定量PCR ,对 6 3例乳腺癌患者、8例乳腺增生患者、5例乳腺纤维腺瘤患者、2 5例其他癌患者以及 31例健康志愿者的外周血进行检测。结果 6 3例乳腺癌患者外周血中hMAMmRNA阳性率 30 .2 % (19/6 3) ,手术后阴转率为 31.6 % (6 /19)。乳腺良性疾病、胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌患者外周血中均阴性 ,而 31例健康献血员中有 1例阳性。hMAMmRNA表达随肿瘤分期进展阳性率增高 ,但与肿瘤分期、ER和PR状态无关 (P >0 .0 5 )。结论 hMAMmRNA特异表达于乳腺癌患者外周血 ,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标。