胃癌的微卫星不稳定性与hMLH1基因启动子甲基化的关系

背景与目的:由于细胞错配修复功能缺陷而导致基因组微卫星序列高度不稳定是遗传性非息肉性大肠癌发生的主要原因。以往的研究表明胃癌组织也有错配修复蛋白表达的缺失,但错配修复基因突变频率却很低;而启动子的甲基化是肿瘤抑癌基因失活的主要途径,也可能是错配修复基因功能丧失的主要原因。本研究拟通过对胃癌组织的微卫星不稳定性的分析及对hMLH1基因启动子甲基化和蛋白表达的检测,对胃癌发病的分子机制进行探讨。方法:从52例胃癌患者的癌组织及其周围组织提取DNA,PCR扩增基因组的5个微卫星位点BAT-26、D17S261、D3S1283、D2S123和D3S1611,毛细管电泳后,判定胃癌组织的微卫星不稳定性;免疫组织化学方法检测hMLH1蛋白的表达;酶切法检测hMLH1基因启动子甲基化。结果:52例胃癌标本中微卫星高度不稳定13例,低度不稳定2例,稳定37例。微卫星高度不稳定的13例胃癌组织中,均检测到hMLH1基因启动子甲基化(100.0%);微卫星低度不稳定和微卫星稳定的39例胃癌组织中,hMLH1基因启动子甲基化仅1例(2.6%),前者发生率高于后者,两者之间有显著性差异(P<0.01)。微卫星高度不稳定的13例胃癌的癌旁组织中,hMLH1基因启动子甲基化6例(46.2%),而微卫星低度不稳定和微卫星稳定39例胃癌的癌旁肿瘤组织标本中。

基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌患者的表达

目的:探讨错配修复基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌发生中的作用。方法:用聚合酶链反应和单链DNA多态性分析(PCR-SSCP)对45例散发性大肠癌患者肿瘤组织及正常组织基因hMSH2、hMLH1、p53进行检测。结果:45例散发性大肠癌患者中,发生hMSH2、hMLH1、p53基因突变分别为2、6、22例,分别占4.44%、13.33%和48.89%。hMLH1、hMSH2基因在突变型p53患者中的突变率为27.27%明显高于在p53未发生突变的患者中的突变率8.69%(P<0.05)。结论:一定比例的散发性大肠癌患者中存在MMR基因缺陷,其中hMLH1所起的作用大于hMSH2,散发性大肠癌中MMR基因突变与p53突变密切相关。

hMLH1基因Val384Asp的病因学作用及对大肠癌发病年龄的影响

目的 :探讨hMLH1基因错义突变Val384Asp在大肠癌发病中的作用。方法 :取 10 1例大肠癌患者、10 0例正常对照的血细胞或正常大肠组织样本 ,提取基因组DNA ,PCR -SSCP和DNA测序技术分析hMLH1基因第12外显子 ,检测hMLH1基因错义突变Val384Asp。结果 :<45岁的大肠癌患者中hMLH1基因Val384Asp的检出率明显高于同龄对照组 (P <0 0 5 ) ,其中 35～ 44岁年龄组的大肠癌患者与正常对照比较 ,P <0 0 1。结论 :hMLH1基因Val384Asp将影响大肠癌的发病年龄 ,它的存在可能是中国人大肠癌发病年龄较欧美人群提前的原因之一。

散发性结直肠癌、腺瘤组织中hMLH1和突变型p53表达

[目的]探讨hMLH1和p53基因在散发性结直肠癌发生机制中所起的作用。[方法]采用PV-6000二步法免疫组化检测技术对60例散发性结直肠癌,45例大肠腺瘤和26例正常大肠黏膜石蜡切片进行hMLH1和p53表达的检测。[结果](1)60例散发性结直肠癌hMLH1蛋白阴性表达和p53蛋白阳性表达分别为11例(18.3%)和32例(53.3%),hMLH1蛋白阴性表达和p53蛋白阳性表达与患者年龄、肿瘤部位、组织学类型和分化程度密切相关(P<0.05或P<0.01),而与患者性别、肿瘤大体类型、肿块大小、浸润深度、淋巴结及远处转移与否和患者的Duke’s分期均无显著相关性(P>0.05)。(2)大肠腺瘤患者p53蛋白阳性表达与患者腺瘤部位、组织学类型和不典型增生程度密切相关(P<0.05),而与患者性别、年龄无显著相关性(P>0.05)。(3)散发性结直肠癌中hMLH1蛋白阴性表达组p53蛋白阳性表达率(18.2%,2/11)低于阳性表达组(61.2%,30/49)(P<0.05)。[结论](1)大部分散发性结直肠癌是沿染色体不稳定途径发生,其中抑癌基因p53的突变起重要作用。同时,一定比例的散发性结直肠癌中存在错配修复基因的缺陷,并具有相对特殊的临床病理特征。(2)大肠腺瘤组织中有一定比例的hMLH1蛋白阴性表达和p53蛋白阳性表达,提示hMLH1和p53基因的突变可能是散发性结直肠癌发生的早期事件之一。

子宫内膜癌错配修复基因hMLH1的表达和启动子甲基化研究

【目的】探讨子宫内膜癌组织中错配修复基因hMLH1的表达和启动子甲基化状态与子宫内膜癌发生的关系。【方法】应用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶法(S-P法)和甲基化特异性聚合酶连反应(MSP)方法,检测37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织中hMLH1蛋白的表达和启动子甲基化状态。【结果】37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织hMLH1基因蛋白表达分别为51.4%(19/37),85%(17/20);基因启动子甲基化分别为43.2%(16/37),15%(3/20)。发生甲基化的16例子宫内膜癌组织14例蛋白表达阴性,发生甲基化的3例正常增生期子宫内膜组织2例蛋白表达阴性。hMLH1蛋白表达与组织学分级(G1,G2,G3)有关,与肿瘤肌层浸润、淋巴结转移、国际妇产科协会(FIGO)分期和宫颈浸润无相关性,hMLH1的甲基化与上述临床病理因素均无相关性。【结论】hMLH1基因启动子甲基化与其蛋白表达缺失密切相关,hMLH1基因在子宫内膜癌的发生过程中发挥重要作用。

错配修复基因hMLH1单核苷酸多态性T1151A在消化道肿瘤发病中的作用

在多次检出中国人大肠癌患者hMLH1基因T1151A的基础上，探讨这一单核苷酸多态性在不同人群中的存在状况及其在消化道肿瘤发病中的作用。方法：100例健康中国汉族人、80例健康日本人、100例健康德国人和109例德国人大肠癌患者、中国汉族人101例大肠癌患者、79例胃癌患者、76例食管癌患者及其胃癌和食管癌患者的亲属，取每例外周静脉血，提取基因组DNA；PCR-SSCP和DNA测序分析hMLH1基因的第12外显子。结果：hMLH1基因T1151A在中国和日本健康人群中的等位基因频率分别为3%和2.5%；与相应正常人群比较，<45岁的大肠癌患者中hMLH1基因T1151A的检出率较高(P<0.05)；显著性差异还存在于具有癌症家族史的胃癌患者及其亲属与正常对照的比较(P<0.05和P<0.01)；食管癌患者及其亲属与正常对照之间的比较无显著差异(P<0.05)；德国人大肠癌患者和健康人群中均未检出hMLH1基因T1151A。结论：单核苷酸多态性T1151A可能是东亚人 hMLH1基因上的一个多态位点，分布具有种族差异；其存在可能与部分大肠癌、胃癌的发病有关。

Reprimo 和 hMLH1基因甲基化在胃癌早期诊断价值的研究

目的：探讨 Reprimo 和 hMLH1基因启动子区甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值。方法通过陕西省人民医院2013年9月-2014年4月收治的慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者50例、异型增生患者50例、胃癌患者50例，取内镜下胃活检组织，并取正常胃黏膜活检组织30例作为对照组，分析 Reprimo 基因和 hMLH1基因启动子区甲基化表达情况，比较各组患者间的差异。结果患者组的胃黏膜组织中 Reprimo 基因和 hMLH1基因启动子区甲基化阳性率显著高于正常组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。Reprimo 基因启动子区甲基化阳性率：慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组28％（χ^2＝10.18，P ＜0.05）；异型增生组56％（χ^2＝25.84，P ＜0.05）；胃癌组62％（χ^2＝30.36，P ＜0.05）；hMLH1基因启动子区甲基化阳性率：慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组20％（χ^2＝4.39，P ＜0.05）；异型增生组44％（χ^2＝15.13，P ＜0.05）；胃癌组48％（χ^2＝17.41，P ＜0.05），检测的特异度高。结论Reprimo 和 hMLH1基因甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值很高，特异度高，是一种有效的诊断方式，在患者的临床诊断方面拥有广阔的治疗前景。

幽门螺杆菌感染与hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化异常的关系

目的 探讨幽门螺杆菌 (H .pylori)感染与hMLH1和APC突变及甲基化异常的关系。方法 采用改良的Giemsa染色和PCR方法检测H .pylori;采用二维DNA电泳、DGGE电泳和DNA测序技术检测hMLH1和APC突变 ;采用甲基化特异性PCR检测hMLH1启动子区的甲基化状态 ;采用以PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳 (MSI)。结果 6 8例胃癌中检出hMLH1基因突变 3例 ,突变率为 4 4 %。APC基因突变 15例 ,突变率为 2 2 1%。hMLH1突变与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度和临床病理分期无显著相关。APC突变率在肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌 (P <0 0 5 )。正常胃黏膜未见hMLH1高甲基化。 6 8例胃癌中检出hMLH1高甲基化 11例 ,占 16 2 % ,均为去甲基化和高甲基化并存。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性 (MSS) 5 1例三组 ,结果 3例hMLH1基因突变均发生于MSI H组 ,而MSI L和MSS组未见 ;APC突变均发生于MSI L和MSS组 ,而MSI H组未发现有APC突变者 ;MSI H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI L和MSS组 (P <0 0 1)。hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化在H pylori阳性组和H pylori阴性组及CagA+ 组和CagA-组检出率差异均无统计学意义 (P>0 0 5 )。

错配修复基因hMLH1突变Val384Asp在胃癌、食管癌发病中的作用

目的 :研究hMLH1基因错义突变Val384Asp在胃癌、食管癌发病中的作用。方法 :应用PCR SSCP和DNA测序技术 ,对 79例胃癌患者及其亲属、76例食管癌患者及其亲属、10 0例正常对照 ,进行了错配修复基因hMLH1错义突变Val384Asp筛选 ,确定其检出率。结果 :6 %的正常人携带hMLH1基因Val384Asp(杂合型 ) ;具有癌症家族史的胃癌患者及其亲属中Val384Asp的检出率与正常对照比较具有显著差异 (P <0 0 5 ;P <0 0 1)。以年龄分组比较 ,围绕中位发病年龄组的胃癌患者和低年龄的胃癌患者亲属组Val384Asp检出率较高 (P <0 0 5 )。食管癌患者及其亲属与正常对照之间无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :hMLH1基因Val384Asp等位基因频率在中国人中约为3% 。

X线照射对鼻咽癌细胞hMSH2和hMLH1表达的影响

目的研究X线照射对鼻咽癌细胞中错配修复基因hMSH2和hMLH1表达的影响,探讨放射损伤后肿瘤细胞的DNA错配修复机制。方法将鼻咽癌CNE-1细胞分为实验组和对照组,对2组细胞进行X线分次外照射。实验组每次照射剂量为2Gy,总剂量为10Gy。对照组每次照射剂量为0Gy。应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot方法,检测照射终止后不同时间点细胞hMSH2和hMLH1的表达。结果实验组细胞在照射后hMSH2mRNA和蛋白的表达均显著强于对照组(P<0.01);hMLH1mRNA及蛋白表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论放射可以诱导鼻咽癌细胞hMSH2表达;hMSH2对放射造成的DNA损伤可能有修复作用,这可能是临床上鼻咽癌放疗敏感性降低的原因之一。

应用DHPLC技术分析错配修复基因(hMLH1)T1151A多态与胃肠道肿瘤的遗传易感性

目的 了解中国人hMLH1基因T1151A多态与胃肠道肿瘤的遗传易感性。方法 采用病例对照研究设计,提取233例大肠癌(结,直肠癌)患者,273例胃癌患者和268例健康人外周血细胞的基因组DNA。PCR扩增hMLH1基因T1151A多态所在第12外显子的部分DNA片段(217bp),变性高效液相色谱(DHPLC)检测,DNA测序验证,比较分析T1151A基因型在胃肠道肿瘤的分布。结果 正常人群中T1151A多态T/A基因型频率为6.34%,其等位基因A频率为3.28%,在大肠癌患者和胃癌患者中T/A基因型频率与正常人群相比存在显著性差异,分别为11.6% (P=0.039)和12.1% (P=0.021),尤其在<45岁的大肠癌患者和<50岁的胃癌患者中,等位基因A频率与正常人群相比差异更为显著, 分别为10. 66% (P=0.002)和11.27% (P=0.001)。结论 T1151A作为中国人hMLH1基因上的一个多态位点,可能是中国人大肠癌和胃癌遗传易感因素,可作为中国人胃及大肠肿瘤、尤其是低龄胃及大肠肿瘤高危人群筛选的侯选指标。

食管鳞状细胞癌及不典型增生组织中hMLH1基因蛋白表达的研究

目的探讨在食管鳞状细胞癌及不典型增生组织中hMLH1基因的蛋白表达情况及其与食管鳞状细胞癌发生发展的关系。方法40例食管鳞状细胞癌、相应40例正常组织及26例不典型增生组织,采用免疫组织化学方法,检测了hMLH1蛋白的表达情况。结果在正常组织、不典型增生组织、肿瘤组织中的阳性率分别为90%、57.6%和45%,不典型增生组织及肿瘤组织均低于正常组织(P<0.05)。肿瘤组织中hMLH1蛋白表达阳性者年龄较阴性者大(P<0.05)。结论错配修复缺陷早期参与了食管鳞状细胞癌的发生过程;hMLH1蛋白可能抑制和延缓食管鳞状细胞癌的发生和浸润。

hMLH1、P27、P53的表达及其在宫颈癌发病中的意义

目的了解宫颈癌中hMLH1、P27、P53表达情况及其与宫颈癌发生和发展的关系。方法采用免疫组织化学技术SP法检测临床资料较完整的72例子宫颈鳞癌和31例慢性宫颈炎组织hMLH1、P27、P53蛋白表达。结果(1)hMLH1在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为61.3%和58.3%,差异无显著性(P>0.05);hM-LH1在宫颈癌各期中表达率分别为I期60.0%,Ⅱ期52.6%,Ⅲ期33.3%,差异无显著性(P>0.05);hMLH1表达率与宫颈癌分级无关(P>0.05);(2)P27在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为74.2%%和76.4%,差异无显著性(P>0.05);P27的表达率与宫颈癌分级和分期无关(P>0.05);(3)P53在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为32.3%和65.3%,差异有显著性(P<0.05);P53在宫颈癌各级中的表达率分别为I级36.4%,Ⅱ级73.0%,Ⅲ级67.9%,Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级的表达率差异有显著性(P<0.05);P53表达率与宫颈癌分期无关(P<0.05);(4)hMLH1表达阳性与阴性的宫颈癌中P27的表达率为94.6%和60.0%,差异有显著性(P<0.05);P53的表达率为62.8%和62.1%,差异无显著性(P>0.05)。结论P53基因突变与宫颈癌的发生和组织分化程度有关;hMLH1与P27表达缺失和宫颈癌发生的关系尚不确切。hMLH1可能使宫颈癌中P27表达上调,而对p53基因突变累积无明显抑制作用。

胃黏膜上皮错配修复基因hMLH1表达在胃癌诊断中的临床意义

[目的]探讨hMLH1蛋白表达在胃癌诊断中的意义及用于胃癌预警的可能性。[方法]免疫组织化学(SP)法检测106例胃癌患者的癌(癌组)与癌旁黏膜上皮(癌旁组)的hMLH1蛋白表达情况并与34例非肿瘤患者(正常组)胃黏膜上皮进行比较,分析该蛋白在细胞中的表达部位与病变的关系。[结果]癌组和癌旁组及正常组hMLH1蛋白的胞核阳性表达率分别为71%(75/106)、50%(53/106)和26%(9/34),各组间差异有显著性意义(P<0.05);胃癌组hMLH1蛋白在核、浆中同时表达阳性率为38%(40/106)显著高于癌旁组和正常组的17%(18/106)和15%(5/34)(P<0.05),但后两组间差异无显著性意义。[结论]hMLH1蛋白在细胞核中出现高表达可能是胃黏膜上皮细胞癌变的组织学预警标志,而其在细胞核和细胞浆同时高表达对胃癌诊断具有一定意义。

毛细管电泳联合激光诱导荧光技术检测结直肠癌hMLH1基因突变

目的 建立毛细管电泳 (CE)联合激光诱导荧光检测 (LIF)技术 ,分析单链构象多态性 (SSCP) ,检测人结直肠癌hMLH1基因点突变的方法。方法 PCR扩增 4 2例散发性结直肠癌患者与 2 0例健康志愿者外周血基因组DNAhMLH1基因 12外显子 ,采用CE LIF进行SSCP分析 ,对异常片段进行测序鉴定 ;研究不同筛分介质 (线性聚丙烯酰胺LPA)浓度、分离温度与分离电压对CE行为的影响。结果 4 2例患者中有 4例 (9.5 2 % )突变 ,CE测序证实为T115 1A的杂合子点突变 ;2 0例健康志愿者未发现突变。较高浓度的LPA(4 %～ 6 % ) ,2 0℃分离温度与 9kV分离电压有助于单链DNA峰分离。结论 调整适宜的LPA浓度、分离温度与分离电压可提高CE分析SSCP的效率 ,应用CE LIF技术SSCP分析检测hMLH1基因点突变快速、高效、重复性好 。

大肠癌发生中突变型P53与hMLH1表达的关系

[目的]探讨在大肠癌发生过程中错配修复基因hMLH1对p53基因突变的影响。[方法]采用免疫组化SP法检测37例正常大肠黏膜、32例大肠腺瘤与165例大肠癌中P53及hMLH1蛋白的表达。[结果]①正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组与大肠癌组P53蛋白的阳性表达率分别为0%、21.9%与48.5%,三组间差异有显著性意义(P<0.05);hMLH1蛋白的阳性表达率分别为100%、87.5%与87.3%,其中正常大肠黏膜组与大肠癌组的差异有显著性意义(P<0.05)。②高中分化、低分化与黏液腺癌组中P53蛋白的阳性表达率分别为53.5%、17.6%与16.7%,其中前者与后两者的差异有显著性意义(P<0.05);hMLH1蛋白的阳性表达率分别为90.8%、70.6%与50.0%,前者明显高于后两者(P<0.05)。③在大肠腺瘤轻中度不典型增生和重度不典型增生组中P53蛋白的阳性表达率分别为18.5%与40.0%(P>0.05);hMLH1蛋白的阳性表达率分别为92.6%与60.0%(P<0.05)。④大肠腺瘤中随hMLH1蛋白的表达减少P53蛋白表达增多,但无明显相关性(P>0.05);大肠癌中两者的表达呈明显负相关(P<0.05)。[结论]大肠癌发生过程中hMLH1基因的功能异常可能是p53基因突变的原因之一。

无hMLH1/hMSH2生殖系突变的遗传性非息肉病性结直肠癌3家系报道

目的 :考察遗传性非息肉病性结直肠癌 (HNPCC)家系 h ML H1 /h MSH2生殖系突变的情况。 方法 :选择 1 3个符合Amsterdam标准的 HNPCC家系中的先证者 ,利用 DNA测序检测 h ML H1 /h MSH2基因突变情况。对其中不携带 h ML H1 /h MSH2生殖系突变的 HNPCC家系 ,利用免疫组化检测 h ML H1 /h MSH2基因表达、PCR- SSCP检测先证者肿瘤组织的微卫星不稳定性 (MSI)。 结果 :1 3个 HNPCC家系的先证者中有 3例检测不到 h ML H1 /h MSH2的生殖系突变。 3例无 h ML H1 /h MSH2突变的先证者中 ,肿瘤组织的微卫星不稳定检测均为 MSI- H,免疫组化检测 h ML H1 /h MSH2基因表达正常。结论 :3个严格符合 Amsterdam标准的 HNPCC家系中未发现 h ML H1 /h MSH2基因系突变 ,提示可能存在其他基因突变导致该 3个家系

小肠腺癌中错配修复基因hMLH1的表达及意义

目的探讨DNA错配修复基因hMLH1在小肠腺癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测36例小肠腺癌及癌旁正常组织中hMLH1基因蛋白表达情况。结果hMLH1蛋白表达率在小肠腺癌组(66.7%)低于癌旁正常组(91.7%),两组间差异有统计学意义(P<0.05)。hMLH1失表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、浸润深度、有无淋巴结转移无关(P>0.05),但是与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05),分化程度越低,hMLH1失表达越明显。结论小肠腺癌中存在MMR基因的缺陷,hMLH1基因可作为判断肿瘤分化程度的一个生物学指标。

错配修复基因hMLH1、hMSH2及PCNA在肺癌组织中的表达及意义

目的 探讨人类错配修复基因hMLH1、hMSH2及增殖细胞核抗原PCNA在肺癌组织中的表达及意义。方法 运用免疫组织化学S P法对 5 6例肺癌组织中hMLH1、hMSH2及PCNA的表达进行检测。结果 5 6例肺癌组织中hMLH1的阳性表达率为 35 % ,hMSH2阳性表达率为 2 8.6 % ,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者 (P <0 .0 1) ,有淋巴结转移者hMLH1及hMSH2阳性率低于无淋巴结转移者 (P <0 .0 5 ) ,不同病理组织学类型之间hMLH1及hMSH2表达无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;5 6例肺癌组织中分化程度低者PCNA标记指数高于分化程度高者 (P <0 .0 1) ,有淋巴结转移者PCNA标记指数高于无淋巴结转移者 (P <0 .0 5 ) ,hMLH1及hMSH2阴性表达者的PCNA标记指数明显高于hMLH1及hMSH2阳性表达者 (P <0 .0 1) ,不同病理组织学类型之间PCNA标记指数无显著差别 (P >0 .0 5 )。

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

背景:基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活,从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的:检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化水平,探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法:以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34.1%,显著高于癌前病变组的5.0%和对照组的0%(P<0.05)。hMLH1基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关(阳性率分别为46.4%对7.7%和55.0%对14.3%,P<0.05),与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关(阳性率分别为34.8%对33.3%、28.0%对43.8%和38.1%对30.0%)。结论:胃癌组织中存在hMLH1基因启动子区CpG岛高甲基化,可能与胃癌的发生、发展有关,且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。