组蛋白乙酰化转移酶hMOF对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:研究组蛋白乙酰化转移酶hMOF对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80以及卵巢癌细胞OVCAR3、SKOV3、ES2、A2780中hMOF mRNA和蛋白的表达,筛选出hMOF低表达细胞OVCAR3和高表达细胞A2780。将OVCAR3细胞分为3组,NC组、hMOF过表达组分别感染携带空载体、hMOF(NM_032188)载体的慢病毒,空白组不感染慢病毒。将A2780细胞分为3组,shNC、shhMOF组分别感染携带空载体、干扰序列的慢病毒,干扰空白组不感染慢病毒。感染72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,检测克隆形成能力,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力,Western blot法检测细胞中E-Cadherin、N-Cadherin、MMP9蛋白表达情况。结果:与空白组和NC组比较,hMOF过表达组OVCAR3细胞增殖率、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数均降低(P<0.05),MMP9、N-Cadherin蛋白表达下降,E-Cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与干扰空白组和shNC组比较,shhMOF组A2780细胞增殖率、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数均增加(P<0.05),MMP9、N-Cadherin蛋白表达升高,E-Cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:hMOF可影响卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可以作为卵巢癌早期诊断、治疗和预后判断的潜在靶点。

组蛋白乙酰化酶hMOF在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：检测组蛋白乙酰化酶hMOF蛋白在肾透明细胞癌（RCC）组织中的表达,探讨其与肾癌患者临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学、qRT-PCR方法检测正常肾组织与肾癌组织中hMOF的表达,分析hMOF表达与肾癌患者临床病理特征的关系。结果：qRT-PCR结果显示,9例肾癌患者中有4例（44.4%）hMOF的mRNA水平显著下降。免疫组织化学结果显示,39例（62.1%,39/66）肾癌组织中hMOF蛋白表达为阴性或弱阳性,而癌旁正常组织仅4例（6.1%,4/66）hMOF蛋白的表达为阴性或弱阳性,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。其中肾癌组织FuhrmanⅢ中hMOF表达明显低于FuhrmanⅠ~Ⅱ,差异有统计学意义（P〈0.05）。中低分化肾癌组织hMOF表达明显低于高分化组,差异有统计学意义（P〈0.05）。hMOF蛋白表达水平降低的肾癌患者其区域淋巴结及远处器官转移的风险增高。结论：hMOF蛋白在肾癌组织、尤其病理分期及Fuhrman分级增高的肾癌组织中的表达显著下降,提示hMOF蛋白可能与肾癌的发生、发展及恶性程度有关。

hMOF蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨hMOF(human male absent on the first)蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学(IHC)的方法检测58例子宫内膜癌组织(子宫内膜癌WTO分级G1级20例,G2级18例,G3级20例)及癌旁正常组织的hMOF蛋白的表达水平,并与临床及病理资料进行分析比较,统计学方法采用单因素多元方差分析及Fisher检验明确hMOF蛋白表达水平与子宫内膜癌患者临床病例特点的关系。结果免疫组织化学显示:hMOF蛋白在23例(39.6%)子宫内膜癌组织中的表达为阴性或弱阳性,癌旁正常组织仅5例(13.1%)表达为阴性或弱阳性,两组有显著差异(P<0.05)。根据IHC评分将患者分为≤4分组和≥5分组,比较两组间患者的临床特点:≤4分组中,子宫内膜癌为低分化(G3级)的病例占52.1%(12/23),FIGO分级为Ⅲ-Ⅳ级的病例占47.8%(11/23);≥5分组中G3病例仅占22.8%(8/35),FIGO分级为Ⅲ-Ⅳ级的病例占14.3%,两组间差异显著(P<0.05)。结论 hMOF蛋白在子宫内膜癌组织,尤其低分化、高分期的子宫内膜癌组织中的表达明显下降。这提示hMOF蛋白可能在子宫内膜癌的发生发展中起到重要作用,hMOF蛋白可以作为一个判断子宫内膜癌疾病严重程度和预后的生物分子指标。

hMOF对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的研究hMOF表达下调对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 hMOF小干扰RNA (siRNAhMOF)转染子宫内膜癌细胞系Ishikawa,筛选和鉴定转染效率,并将细胞分为对照组、空白转染对照组(siRNA-NC组)和实验组(siRNA-h MOF组)。采用MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭。结果 siRNA-hMOF转染子宫内膜癌Ishikawa细胞后,与siRNA-NC组相比,siRNA-hMOF组细胞的增殖速度减慢,凋亡率增加,迁移和侵袭能力下降。结论干扰hMOF表达可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞的凋亡;h MOF在子宫内膜癌的恶性生长转移中发挥重要作用。

组蛋白乙酰转移酶hMOF和p53蛋白在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨组蛋白乙酰转移酶hMOF、p53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达情况及临床意义。方法选取89例NSCLC患者的NSCLC组织和47例肺良性病变患者的肺良性病变组织,采用免疫组织化学法检测不同组织中hMOF、p53蛋白的表达水平,分析hMOF、p53蛋白表达与NSCLC患者临床特征的关系,并对NSCLC组织中hMOF、p53蛋白表达的相关性进行分析。结果NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的阳性表达率均高于肺良性病变组织(P﹤0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为中低分化NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的阳性表达率均分别高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为高分化的患者(P﹤0.05);有淋巴结转移NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白的阳性表达率高于无淋巴结转移的患者(P﹤0.05)。NSCLC组织中hMOF和p53蛋白的表达呈正相关(P﹤0.05)。结论NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的表达水平均明显升高,且与NSCLC患者的临床特征有关,可能影响NSCLC患者的预后。

肾透明细胞癌组织中组蛋白乙酰化酶hMOF的表达及其乙酰化位点的初步研究

目的探讨肾透明细胞癌组织中组蛋白乙酰化酶hMOF的表达水平及其乙酰化位点。方法采用荧光实时定量PCR和免疫组化方法研究hMOF基因及蛋白在肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织中的表达水平,采用免疫组化方法初步探讨hMOF的乙酰化位点(即H4K5,H4K8,H4K16的乙酰化水平)。采用单因素多元方差分析明确hMOF蛋白表达水平与肾癌患者临床特点的关系。结果荧光实时定量PCR结果显示:44.4%(4/9)的肾癌病例中hMOF的mRNA水平下降超过2倍。免疫组化结果显示:39.4%(26/66)的肾癌病例中hMOF蛋白表达为阴性或弱阳性,其中69.2%(18/26)为FuhrmanⅢ级的肾癌,在此26例肾癌病例中,有76.9%(20/26)的肾癌病例H4K5、K8乙酰化水平显著降低,其中FuhrmanⅢ级的肾癌病例占80%(16/20);88.5%(23/26)的肾癌病例H4K16乙酰化水平显著降低,其中FuhrmanⅢ级的肾癌病例占78.3%(18/23)。hMOF蛋白表达水平为阴性或弱阳性的患者,其肿瘤直径、Fuhrman分级、pT分期、区域淋巴结及远处器官转移风险均显著高于对照组。结论肾透明细胞癌,尤其FuhrmanⅢ级的肾透明细胞癌组织中hMOF基因及蛋白表达水平显著下降。hMOF的乙酰化位点不仅是H4K16,还包括H4K5、K8,并且这3者的乙酰化水平与hMOF的表达水平呈正比。hMOF蛋白表达水平与肾癌的恶性程度、临床分期、远处转移的风险有关。

非小细胞肺癌hMOF蛋白表达与放疗预后的关系

目的研究hMOF蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达情况及其与NSCLC放疗预后的相关关系。方法采用SP免疫组化方法分别检测59例接受放疗的NSCLC患者中hMOF蛋白表达情况,分析其与临床病理特征及NSCLC放疗预后的相关关系。结果 59例NSCLC患者中hMOF蛋白高表达30例,高表达率50.85%。临床分期、hMOF蛋白表达水平是NSCLC放疗的独立预后因素。结论 hMOF蛋白表达水平与NSCLC放疗预后相关,是影响NSCLC放疗预后的指标。

宫颈病变组织中hMOF、P53蛋白的表达及临床意义

目的研究hMOF、P53在宫颈病变组织中的表达情况及其临床意义。方法采用Western blot和免疫组化SP法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变、宫颈非特异性炎中hMOF和P53的表达。结果免疫组化和Western blot都提示随着宫颈病变程度的增加,hMOF蛋白有逐渐减少的趋势,而P53蛋白却成逐渐增加的趋势。结论随着宫颈病变的进展hMOF的表达呈下降趋势,P53蛋白的表达呈上升的趋势,表明随着hMOF表达的下降从而导致P53蛋白不能正常的乙酰化,失去修复损伤DNA的功能,这可能与宫颈病变的进展相关。

食管癌患者放疗前NLR、hMOF蛋白及CD4^(+)/CD8^(+)水平与预后相关性研究

目的分析食管癌患者放疗前NLR、hMOF蛋白及CD4^(+)/CD8^(+)水平与预后关系。方法选取2016年1月~2020年1月入院治疗的78例食管癌患者资料进行回顾性分析,分析NLR、hMOF蛋白及CD4^(+)/CD8^(+)水平与预后相关性。结果两组在分化程度、淋巴结转移、hMOF蛋白、NLR、病变直径、CD4^(+)/CD8^(+)比较中存在显著差异(P<0.05)。低分化、有淋巴结转移、hMOF蛋白高表达、NLR高表达、病变直径≥5 cm、CD4^(+)/CD8^(+)均是影响预后不良的独立危险因素(P<0.05)。hMOF蛋白与分化程度呈正相关;NLR、CD4^(+)/CD8^(+)与分化程度、淋巴结转移呈正相关。hMOF蛋白、NLR、CD4^(+)/CD8^(+)的AUC值为0.788,0.762,0.888。结论NLR、hMOF蛋白及CD4^(+)/CD8^(+)可作为诊断食管癌及评估预后的重要指标。

抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的细胞株4C1C8,亚类鉴定单抗为IgG1。ELISA法测定饱和硫酸铵盐析抗体效价为1∶409600,抗体相对亲和力为7.65×106L/mol;Western blot显示抗体能特异识别免疫原;细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别正常细胞株HL7702表达的hMOF。结论成功制备抗hMOF单克隆抗体,为进一步研究hMOF功能及机制奠定了基础。

hMOF与肿瘤关系的研究进展

MOF(males absent on the first)是果蝇体内特异催化组蛋白H4第16位赖氨酸(H4K16)乙酰化的一个关键催化亚基。hMOF与果蝇具有相同的催化功能,作为乙酰化H4K16的关键酶,hMOF参与了许多重要的细胞活动,而这些都与肿瘤的发生发展密切相关,去除hMOF基因之后不仅会引起大范围的H4K16乙酰化减少,也会造成一些基因转录的异常。hMOF在不同肿瘤中表达不同,有的表现为抑癌基因的作用,有的则表现为致癌基因的作用。

基于H4K16ac介导的细胞自噬探讨电针血清对脑缺血后神经元的保护机制

目的从组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)对细胞自噬调控的角度,研究电针血清对脑缺血后神经元的保护机制。方法电针血清的制备:建立改良的大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,在造模成功后5 min和16 h进行电针干预,针刺人中、百会穴,并接电针治疗仪治疗30 min。第2次电针治疗后7 h取大鼠血清备用。细胞实验:将大鼠大脑皮质神经元细胞分为对照组、模型组、电针组、组蛋白乙酰转移酶MOF(hMOF)抑制剂组与细胞沉默调节蛋白1(Sirt1)抑制剂组,除对照组外,其余各组剥夺氧、糖3 h后再复氧、复糖24 h,并于复氧、复糖的同时给予2%电针血清、15 g/L的hMOF siRNA及8 g/L的Sirt1 siRNA处理。CCK-8检测细胞处理48 h后细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞处理48 h后细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中hMOF、Sirt1、组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin1表达;qPCR检测hMOF、Sirt1、Beclin1 mRNA表达;染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测各组神经元细胞的H4K16ac在自噬靶基因Beclin1启动子区的结合程度。结果与模型组相比,电针干预可使细胞增殖活性提高(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.05)。与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可降低hMOF和H4K16ac蛋白的表达(P<0.05),升高Sirt1、LC3-II和Beclin1的表达(P<0.05);而与Sirt1抑制剂组差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示,与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可抑制hMOF mRNA表达(P<0.05),而Sirt1和Beclin1 mRNA表达上调(P<0.05)。且与模型组相比,电针组在自噬靶基因Beclin1启动子区域中H4K16ac的富集量增加(P<0.05)。结论电针血清对糖-氧剥夺再灌注损伤神经元细胞具有保护作用,其抗脑缺血再灌注损伤的作用可能是电针通过调节组蛋白H4K16ac的表达进而调控细胞自噬,从而减轻脑缺血再灌注损伤,发挥对神经细胞的保护作用。