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具有生物学活性的hMSH2蛋白在昆虫sf9细胞中的表达
被引量:
2
1
作者
陈慧
李峥
+2 位作者
何小鹃
崔莲仙
何维
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008年第7期670-675,共6页
目的表达具有生物活性的hMSH2蛋白。方法用搭桥PCR获得hMSH2全长基因,构建pAcGP67B-hMSH2重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫细胞sf9,表达hMSH2蛋白(同时构建pET30a-hMSH2重组质粒,用大肠杆菌表达hMSH2蛋白);Western blot鉴定hMSH2...
目的表达具有生物活性的hMSH2蛋白。方法用搭桥PCR获得hMSH2全长基因,构建pAcGP67B-hMSH2重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫细胞sf9,表达hMSH2蛋白(同时构建pET30a-hMSH2重组质粒,用大肠杆菌表达hMSH2蛋白);Western blot鉴定hMSH2蛋白;ELISA,流式细胞仪检测蛋白与OT3肽及TCRγδ的结合特异性;检测细胞增殖(MTT法)和细胞因子分泌,观察重组蛋白体外活化γδT细胞的生物学功能。结果克隆到正确的hMSH2基因,并将其插入到表达载体pAcGP67B和pET30a中的正确位置。经Western blot鉴定获得了hMSH2蛋白。用昆虫病毒表达载体系统表达的hMSH2蛋白能与其探针肽OT3及TCRγδ特异性结合,并能在体外刺激γδ细胞增殖及分泌IFN-γ,其活性更优于原核表达的蛋白。结论成功利用昆虫病毒载体表达系统得到了比原核大肠杆菌表达系统更具生物活性的hMSH2蛋白。
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关键词
hmsi-12蛋白
昆虫病毒载体表达系统
γδ细胞
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职称材料
题名
具有生物学活性的hMSH2蛋白在昆虫sf9细胞中的表达
被引量:
2
1
作者
陈慧
李峥
何小鹃
崔莲仙
何维
机构
中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008年第7期670-675,共6页
基金
国家重点基础研究发展规划(973)项目(2001CB510009
2004CB518706)
文摘
目的表达具有生物活性的hMSH2蛋白。方法用搭桥PCR获得hMSH2全长基因,构建pAcGP67B-hMSH2重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫细胞sf9,表达hMSH2蛋白(同时构建pET30a-hMSH2重组质粒,用大肠杆菌表达hMSH2蛋白);Western blot鉴定hMSH2蛋白;ELISA,流式细胞仪检测蛋白与OT3肽及TCRγδ的结合特异性;检测细胞增殖(MTT法)和细胞因子分泌,观察重组蛋白体外活化γδT细胞的生物学功能。结果克隆到正确的hMSH2基因,并将其插入到表达载体pAcGP67B和pET30a中的正确位置。经Western blot鉴定获得了hMSH2蛋白。用昆虫病毒表达载体系统表达的hMSH2蛋白能与其探针肽OT3及TCRγδ特异性结合,并能在体外刺激γδ细胞增殖及分泌IFN-γ,其活性更优于原核表达的蛋白。结论成功利用昆虫病毒载体表达系统得到了比原核大肠杆菌表达系统更具生物活性的hMSH2蛋白。
关键词
hmsi-12蛋白
昆虫病毒载体表达系统
γδ细胞
Keywords
hMSH2
baculovirus expression system
Tδ cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
具有生物学活性的hMSH2蛋白在昆虫sf9细胞中的表达
陈慧
李峥
何小鹃
崔莲仙
何维
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008
2
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