Summary： To study the expression of DNA repair enzyme hMTH1 mRNA and protein in hepatocellular carcinoma （HCC） tissues, tissues adjacent to the cancers, normal liver cells and hepatoma cell lines, and to investigat...Summary： To study the expression of DNA repair enzyme hMTH1 mRNA and protein in hepatocellular carcinoma （HCC） tissues, tissues adjacent to the cancers, normal liver cells and hepatoma cell lines, and to investigate their function in the progress of HCC, semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） was employed to examine the expression of hMTH1 mRNA in matched HCC tissues （HT）/surrounding tissues （HST） of HCC, normal liver cell L02 and hepatoma cell lines SMMC7721, HepG2. hMTH1 protein was detected in corresponding HT as well as their HST by immunohistochemistry. Our results showed that the expression level of hMTH1 mRNA in HT was higher than that in HST （t=2. 424, P 〈0.05）. The expression level of hMTH1 mRNA in two hepatoma cell lines was higher than that in normal liver cell line （F=6. 810, P〈0.01）. The expression of hMTH1 mRNA inSMMC7721 was similar to that in HepG2. hMTH1 protein was 88.2%（15 of 17） positive in HT and 82.4%（14 of 17） in HST. The protein level of hMTH1 in HT was correspondingly higher than in their HST （t=2. 618,P〈0.05）. It is concluded that hMTH1 mRNA and protein were over-expressed in HCC and hepatoma cell lines. It may be one of the key events during the carcinogenesis, progression of HCC and may promote the malignant growth. These results suggest that hMTH1 plays a role in HCC and may be a candidate marker for the diagnosis of HCC.展开更多
谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为应用日益广泛的蛋白表达宿主菌,其全基因组虽然已经被测序,但是一些影响蛋白表达的关键基因仍未被研究。基因NCgl2632被预测可能是影响谷氨酸棒杆菌能量代谢的关键基因之一。因此该文首先...谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为应用日益广泛的蛋白表达宿主菌,其全基因组虽然已经被测序,但是一些影响蛋白表达的关键基因仍未被研究。基因NCgl2632被预测可能是影响谷氨酸棒杆菌能量代谢的关键基因之一。因此该文首先分别构建了NCgl2632敲除菌株、NCgl2632过表达菌株,测定了生长曲线和胞内ATP水平的变化,并用增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和重链抗体可变区蛋白(variable domain of heavy chain antibody,VHH)验证该基因表达水平的变化对外源蛋白表达的影响,发现敲除该基因对外源蛋白表达量提高有利。同时,由于前期工作中发现NCgl0909的敲除表型比较有利于外源蛋白表达水平的提高,因此在其基础上构建了C.g 15647ΔNCgl2632ΔNCgl0909双敲除菌株,并表达VHH蛋白进行了验证。此外,该文还选取了一种有潜力的蛋白human MutT homolog 1(hMTH1)进行了表达验证和活性检测,由于其分子质量较小且较稳定易于表达,未来可以作为新的模式蛋白验证菌株产外源蛋白的能力。最终对双敲除菌株表达该蛋白的发酵培养基配比进行了优化,得到了较优的培养基配比。展开更多
Zur Aufklarung der Rolle dreier DNA Reparaturenzyme in der Hepatokarzino genese haben wir die hMTH 1,hOGG 1 und hMYHα mRNA Expression mittels RT/semi quantitativer Echtzeit PCR und der 8 OHdG Gehalt mittels H...Zur Aufklarung der Rolle dreier DNA Reparaturenzyme in der Hepatokarzino genese haben wir die hMTH 1,hOGG 1 und hMYHα mRNA Expression mittels RT/semi quantitativer Echtzeit PCR und der 8 OHdG Gehalt mittels HPLC/ECD in Tumor und Peritumorgewebe von 21 Patienten mit hepatozellularem Karzinom (HCC ) bestimmt. Es wurde gezeigt, da der 8 OHdG Gehalt im Peritumorgewebe signif ikant hoher als im Tumorgeweb e war ( P =0.006) und mit dem Entzundungsgrad korrelierte. Die hMTH 1 E xpression war im Tumorgewebe gegenuber dem Peritumorgewebe erhoht ( P =0.014). Umgekehrt war die hMYHα Expression im Peritumorgewebe signifikant hoher als im Tumorgewebe ( P =0.039). Fur die hOGG 1 Expression wurde kein deutlicher Unterschied zwischen Tumor und Peritumorgewebe beobachte t. Eine deutliche lineare Korrelation zwischen der hMTH 1 und der hOGG 1 Exp ression wurde sowohl in Tumor ( r =0.809, P < 0.001) als auch in Peritum orgewebe ( r =0.883, P <0.001) gefunden. Diese Daten sprechen fur ein e reaktive und gegen eine pathogenetische Rolle der untersuchten DNA Reparature nzyme in der Hepatokarzinogenese.展开更多
文摘Summary： To study the expression of DNA repair enzyme hMTH1 mRNA and protein in hepatocellular carcinoma （HCC） tissues, tissues adjacent to the cancers, normal liver cells and hepatoma cell lines, and to investigate their function in the progress of HCC, semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） was employed to examine the expression of hMTH1 mRNA in matched HCC tissues （HT）/surrounding tissues （HST） of HCC, normal liver cell L02 and hepatoma cell lines SMMC7721, HepG2. hMTH1 protein was detected in corresponding HT as well as their HST by immunohistochemistry. Our results showed that the expression level of hMTH1 mRNA in HT was higher than that in HST （t=2. 424, P 〈0.05）. The expression level of hMTH1 mRNA in two hepatoma cell lines was higher than that in normal liver cell line （F=6. 810, P〈0.01）. The expression of hMTH1 mRNA inSMMC7721 was similar to that in HepG2. hMTH1 protein was 88.2%（15 of 17） positive in HT and 82.4%（14 of 17） in HST. The protein level of hMTH1 in HT was correspondingly higher than in their HST （t=2. 618,P〈0.05）. It is concluded that hMTH1 mRNA and protein were over-expressed in HCC and hepatoma cell lines. It may be one of the key events during the carcinogenesis, progression of HCC and may promote the malignant growth. These results suggest that hMTH1 plays a role in HCC and may be a candidate marker for the diagnosis of HCC.
文摘谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为应用日益广泛的蛋白表达宿主菌,其全基因组虽然已经被测序,但是一些影响蛋白表达的关键基因仍未被研究。基因NCgl2632被预测可能是影响谷氨酸棒杆菌能量代谢的关键基因之一。因此该文首先分别构建了NCgl2632敲除菌株、NCgl2632过表达菌株,测定了生长曲线和胞内ATP水平的变化,并用增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和重链抗体可变区蛋白(variable domain of heavy chain antibody,VHH)验证该基因表达水平的变化对外源蛋白表达的影响,发现敲除该基因对外源蛋白表达量提高有利。同时,由于前期工作中发现NCgl0909的敲除表型比较有利于外源蛋白表达水平的提高,因此在其基础上构建了C.g 15647ΔNCgl2632ΔNCgl0909双敲除菌株,并表达VHH蛋白进行了验证。此外,该文还选取了一种有潜力的蛋白human MutT homolog 1(hMTH1)进行了表达验证和活性检测,由于其分子质量较小且较稳定易于表达,未来可以作为新的模式蛋白验证菌株产外源蛋白的能力。最终对双敲除菌株表达该蛋白的发酵培养基配比进行了优化,得到了较优的培养基配比。
文摘Zur Aufklarung der Rolle dreier DNA Reparaturenzyme in der Hepatokarzino genese haben wir die hMTH 1,hOGG 1 und hMYHα mRNA Expression mittels RT/semi quantitativer Echtzeit PCR und der 8 OHdG Gehalt mittels HPLC/ECD in Tumor und Peritumorgewebe von 21 Patienten mit hepatozellularem Karzinom (HCC ) bestimmt. Es wurde gezeigt, da der 8 OHdG Gehalt im Peritumorgewebe signif ikant hoher als im Tumorgeweb e war ( P =0.006) und mit dem Entzundungsgrad korrelierte. Die hMTH 1 E xpression war im Tumorgewebe gegenuber dem Peritumorgewebe erhoht ( P =0.014). Umgekehrt war die hMYHα Expression im Peritumorgewebe signifikant hoher als im Tumorgewebe ( P =0.039). Fur die hOGG 1 Expression wurde kein deutlicher Unterschied zwischen Tumor und Peritumorgewebe beobachte t. Eine deutliche lineare Korrelation zwischen der hMTH 1 und der hOGG 1 Exp ression wurde sowohl in Tumor ( r =0.809, P < 0.001) als auch in Peritum orgewebe ( r =0.883, P <0.001) gefunden. Diese Daten sprechen fur ein e reaktive und gegen eine pathogenetische Rolle der untersuchten DNA Reparature nzyme in der Hepatokarzinogenese.
