中国广东汉族人群核苷酸修复基因hMTH1遗传多态性研究

为研究中国南方汉族人群核苷酸修复基因hMTH1遗传多态性,应用聚合酶链反应 单链构象多态性技术检测172名健康人外周血白细胞hMTH1基因启动子及全部5个外显子多态性,并进行DNA测序。结果发现hMTH1基因启动子及外显子1序列保守,未见突变;外显子2第73位碱基存在T→C杂合型突变,基因型TT和TC频率分别为93 02%、6 98%,等位基因T和C频率分别为96 51%、3 49%;外显子3第45位遗传密码存在T→C杂合型突变,基因型TT和TC频率分别为95 35%、4 65%,等位基因T和C频率分别为97 67%、2 33%,该多态性为首次发现;外显子4第83位遗传密码存在G→A杂合型突变,基因型GG和GA频率分别为89 53%、10 47%,等位基因G和A频率分别为94 77%、5 23%;外显子5第119位氨基酸遗传密码存在C→T杂合型突变,基因型CC和CT频率分别为95 93%、4 07%,等位基因C和T频率分别为97 97%、2 03%。

hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究

目的 建立hMTH1缺陷细胞株 ,观察该缺陷所引起的生物学效应。方法 用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 T)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,半定量RT PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,用流式细胞术观察细胞周期 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 T载体在转染细胞内可较稳定表达 ,缺陷细胞株hMTH1mRNA表达水平比HLF细胞下降了 47%。hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化 ,细胞倍增时间为 0 89d ,与HLF细胞 0 93d接近 ,细胞周期各时相未受影响 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立 ,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应。

HBx上调HepG2细胞DNA修复酶hMTH1表达的意义

目的:探讨DNA氧化损伤修复酶hMTH1在HBx致肝细胞癌发生机制中的作用.方法:应用HPLC/ECD法检测稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx及其对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞中的8-OHdG的含量;并以β-actin为内对照,应用RT-实时PCR定量检测各组细胞中可水解8-OHdG的DNA修复酶hMTH1的表达.结果:8-OHdG在HepG2/HBx细胞中的含量(fmol8-OHdG/μgDNA)显著高于对照组HepG2和HepG2/pDNA3.1细胞(36.5±6.25vs8.52±1.65,9.12±2.69,均P<0.05).DNA修复酶hMTH1在HepG2/HBx细胞中的表达较两对照组细胞明显增高(1.213±0.100vs0.087±0.026,0.112±0.052hMTH1/β-actin mRNA×100,均P<0.05).结论:HBx可能通过诱导氧化应激增加HepG2细胞内DNA氧化损伤产物8-OHdG的含量,从而反应性上调DNA修复酶hMTH1的表达.

DNA修复酶hMTH1在乙型肝炎病毒x基因致人肝细胞系L02细胞恶性转化中的意义

目的通过转基因细胞模型L02／HBx观察乙型肝炎病毒x基因（HBx）对DNA修复酶hMTH1转录表达的调控及其对人肝细胞系L02细胞生物学特性的影响。方法传代培养稳定表达HBx的转基因细胞模型L02／HBx及空白对照组L02细胞和空载体对照组L02／pcDNA3．1细胞，倒置显微镜下观察各组细胞的形态学特征，以四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞周期和凋亡状况，并进行软琼脂克隆形成实验观察细胞的恶性转化能力。同时应用实时定量PCR测定各组细胞DNA修复酶hMTH1的表达水平。结果镜下观察发现L02／HBx细胞与对照组L02细胞相比形态发生明显改变。MTT法显示L02／HBx细胞生长速度比两对照组显著加快。流式细胞术结果表明，HBx可加速细胞周期进程、抑制细胞凋亡。软琼脂克隆形成实验发现L02／HBx细胞的克隆形成率明显高于L02细胞和L02／pcDNA3．1细胞（P〈0．05）。实时定量PCR检测发现hMTHI在L02／HBx细胞中的表达显著高于L02细胞和L02／pcDNA3．1细胞（P〈0．05）。结论HBx可诱导L02细胞发生恶性转化，在此过程中DNA修复酶hMTH1可出现反应性的上调表达。

DNA修复酶hMTH1基因在原发性肝癌发生中的作用研究进展

探讨DNA修复hMTHl基因多态性对DNA氧化损伤产物8-OH-dG的调控及其在肝癌发生和防御机制中的作用。近年来,该基因在肝肿瘤组织中的作用成为研究热点,本文就其新进展作一简要综述。