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hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究 被引量:2
1
作者 江高峰 庄志雄 +2 位作者 刘起展 何云 杜柳涛 《卫生毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期87-90,共4页
目的 建立hMTH1缺陷细胞株 ,观察该缺陷所引起的生物学效应。方法 用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 T)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,半定量RT PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果。同时观察转染细胞生长形... 目的 建立hMTH1缺陷细胞株 ,观察该缺陷所引起的生物学效应。方法 用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 T)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,半定量RT PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,用流式细胞术观察细胞周期 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 T载体在转染细胞内可较稳定表达 ,缺陷细胞株hMTH1mRNA表达水平比HLF细胞下降了 47%。hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化 ,细胞倍增时间为 0 89d ,与HLF细胞 0 93d接近 ,细胞周期各时相未受影响 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立 ,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应。 展开更多
关键词 hmthl缺陷细胞株 反义RNA 基因转染 流式细胞 生物学特性
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HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株的筛选及其生物学特征 被引量:3
2
作者 陆燕蓉 林苹 +6 位作者 张洁 王修杰 周宏远 黄孝忠 宁其志 江映红 杨可 《中国肺癌杂志》 CAS 2001年第5期324-326,共3页
目的 为细胞融合等实验提供次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)缺陷细胞株。方法 用 8 氮杂鸟嘌呤 ( 8 AG)对Lewis肺癌细胞株L3 8进行长期渐进式给药 ,从中克隆筛选出HGPRT缺陷细胞株 ,并观察其体内成瘤和肺转移特性。结果 经过 ... 目的 为细胞融合等实验提供次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)缺陷细胞株。方法 用 8 氮杂鸟嘌呤 ( 8 AG)对Lewis肺癌细胞株L3 8进行长期渐进式给药 ,从中克隆筛选出HGPRT缺陷细胞株 ,并观察其体内成瘤和肺转移特性。结果 经过 1年的筛选鉴定 ,获得了在 2 0mg/L 8 AG和 16 40培养液中能长期稳定生长 ,在HAT选择性培养基中不能形成克隆的AL990 1细胞株。AL990 1和L3 8的染色体众数分别为5 8和 6 2 ,在C5 7BL/ 6小鼠体内成瘤率均为 10 0 % ( 10 / 10 ) ,肺转移率分别为 30 % ( 3/ 10 )和 70 % ( 7/ 10 )。结论 HGPRT缺陷型AL990 1细胞株基本保持了L3 8细胞的生物学特征 ,可作为制备Lewis肺癌DC融合疫苗的亲本抗原细胞。 展开更多
关键词 HGPRT LEWIS肺癌 生物学特征 肿瘤疫苗 HGPRT缺陷细胞株 细胞融合技术
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中国人群出生缺陷核心家庭永生细胞株的建立
3
作者 裴丽君 李竹 +3 位作者 任爱国 赵文睿 曲梅 朱江辉 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期247-247,共1页
关键词 出生缺陷 永生细胞株 EB病毒 B-淋巴细胞
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细菌内构建复制缺陷型人肝细胞生长因子重组腺病毒及其对肝细胞株L02细胞周期的影响
4
作者 林勇 张新 《胃肠病学》 2001年第C00期185-185,共1页
关键词 细胞株L02 细胞周期 细菌内同源重组机制 缺陷型重组腺病毒 细胞增殖
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微RNA hsa-miR-125a-5p通过激活p53诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的研究 被引量:2
5
作者 江黎黎 《辽东学院学报(自然科学版)》 CAS 2019年第2期89-96,共8页
为了探讨微RNA hsa-miR-125a-5p对肺癌细胞凋亡的影响及其可能的调控机制,通过实时定量RT-PCR (qRT-PCR法)检测hsa-miR-125a-5p在不同细胞系表达的相对含量,流式细胞术检测肺癌细胞的凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测p53蛋白和mRNA表... 为了探讨微RNA hsa-miR-125a-5p对肺癌细胞凋亡的影响及其可能的调控机制,通过实时定量RT-PCR (qRT-PCR法)检测hsa-miR-125a-5p在不同细胞系表达的相对含量,流式细胞术检测肺癌细胞的凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测p53蛋白和mRNA表达情况,进一步的功能性实验选择SPC-A-1细胞进行。结果显示,与人支气管上皮HBE细胞相比较,hsa-miR-125a-5p在不同的肺癌细胞系中表达下降。在功能获得性实验中,hsa-miR-125a-5p促进凋亡,hsa-miR-125a-5p过表达能够增加野生型p53 mRNA和蛋白表达;阻断野生型p53能够减弱hsa-miR-125a-5p在凋亡中的作用。在功能丧失性实验中,阻断hsa-miR-125a-5p能够降低野生型p53的mRNA和蛋白表达,阻断野生型p53同样能够减弱hsa-miR-125a-5p抑制剂在凋亡中的作用。最后,在p53缺陷细胞系H1299中转染正义或反义miR-125a-5p混合物,结果显示凋亡率均没有明显变化。上述研究表明,微RNA hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞SPC-A-1中通过激活p53诱导凋亡。这些结果将为miR-125a家族在肺癌中的作用提供新的视点。 展开更多
关键词 凋亡 hsa-miR-125a-5p 肺癌 SPC-A-1细胞株 缺陷细胞系H1299 miR-125a P53
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T淋巴瘤EL-4细胞双受体表达研究
6
作者 张媛 罗微 马骊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期404-408,共5页
目的:检测T淋巴瘤EL-4细胞T细胞受体(T cell receptor,TCR)的表达情况,为进一步研究T细胞等位基因排斥机制奠定基础。方法:以小鼠脾细胞作为阳性对照,分别提取脾细胞和EL-4细胞mRNA,逆转录为cDNA,RT-PCR扩增24个TCR BV家族CDR3区,结合... 目的:检测T淋巴瘤EL-4细胞T细胞受体(T cell receptor,TCR)的表达情况,为进一步研究T细胞等位基因排斥机制奠定基础。方法:以小鼠脾细胞作为阳性对照,分别提取脾细胞和EL-4细胞mRNA,逆转录为cDNA,RT-PCR扩增24个TCR BV家族CDR3区,结合基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,对有表达的TCR BV家族进行CDR3谱型和序列分析。结果:小鼠脾细胞24 BV家族均有表达,各TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布(Gaussian distribution),表明24 BV家族均为多克隆性。EL-4细胞被同时检测到TCR BV10和BV12家族表达,CDR3谱型均呈单峰,两个家族的RT-PCR产物经测序鉴定证实确属TCR序列,且均为框内编码。结论:EL-4细胞存在两套框内重排的TCRβ链,表明其TCRβ链可能存在等位基因排斥"缺陷"现象。本研究为探索T细胞等位基因排斥机制奠定了基础。 展开更多
关键词 EL-4细胞株 T细胞受体(TCR) 等位基因排斥“缺陷 框内重排
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Down综合征与DNA修复机制缺陷
7
作者 廖康煌 RE Tarone JH Robbins 《上海医学》 CAS 1988年第7期406-408,共3页
作者注意到Down综合征(DS)患者均有Alzheimer病(AD)的神经病理学特征,且白血病的发病率显著增高:通过对DS和AD患者淋巴细胞株经X射线处理后生存能力的研究,发现两者均对X线有异常敏感(P<0.0001和0.004),对其它某些原发性神经元变性... 作者注意到Down综合征(DS)患者均有Alzheimer病(AD)的神经病理学特征,且白血病的发病率显著增高:通过对DS和AD患者淋巴细胞株经X射线处理后生存能力的研究,发现两者均对X线有异常敏感(P<0.0001和0.004),对其它某些原发性神经元变性性疾病如着色性干皮病(XP)、毛细血管扩张性共济失调症和Cockayne综合征等作了比较,这些细胞均显示对DNA损伤因子异常敏感。在XP病人中这些现象可能反映着对诱发性DNA损伤的修复缺陷。因此,本病也可能是对损伤的DNA存在着修复的缺陷而导致白血病的发病率增高以及象AD那样的神经细胞的过早死亡。 展开更多
关键词 综合征 综合病症 DNA 细胞株 神经细胞 细胞存活率 机制缺陷 原发性变性 Down 神经元 神经组织 着色性干皮病 隐性遗传病 培养细胞 白血病 血癌 毛细血管扩张性共济失调 体外实验 体外试验 损伤因子
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中药癌复康对重症联合免疫缺陷鼠人乳腺癌肺转移及免疫重建的影响 被引量:4
8
作者 朱华宇 钟少文 +1 位作者 李玉洁 吴元胜 《现代中西医结合杂志》 CAS 2016年第15期1597-1599,1603,共4页
目的探讨中药癌复康对重症联合免疫缺陷(SCID)鼠原位移植人乳腺癌自发性肺转移及免疫重建的影响。方法将40只SCID小鼠随机分为4组,以高转移人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435s)接种于鼠腹部左侧第二乳头下的乳房脂肪垫上建立小鼠人乳腺癌自发... 目的探讨中药癌复康对重症联合免疫缺陷(SCID)鼠原位移植人乳腺癌自发性肺转移及免疫重建的影响。方法将40只SCID小鼠随机分为4组,以高转移人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435s)接种于鼠腹部左侧第二乳头下的乳房脂肪垫上建立小鼠人乳腺癌自发性肺转移模型,接种量为0.2 m L/只。接种后,模型对照组给予生理盐水10 m L/(kg·d)灌胃,1次/d;癌复康组给予癌复康3.6g/(kg·d)以生理盐水10 m L稀释灌胃,1次/d;免疫重建组腹腔注射人体外周血淋巴细胞4×107个/只(0.5 m L),并给予生理盐水10 m L/(kg·d)灌胃,1次/d;癌复康+免疫重建组腹腔注射人体外周血淋巴细胞4×107个/只,并予以癌复康3.6 g/(kg·d)以生理盐水10 m L稀释灌胃,1次/d。观察各组肿瘤体积、生长速度、肿瘤转移情况。结果癌复康+免疫重建组成瘤潜伏期明显长于其余3组(P均<0.05),癌复康组和免疫重建组成瘤潜伏期明显长于模型对照组(P<0.05);模型对照组肿瘤生长速度较其余3组快,肿瘤体积大于其余3组(P均<0.05),癌复康组和免疫重建组肿瘤生长速度相近(P>0.05),癌复康+免疫重建组肿瘤生长速度最慢(P均<0.05);癌复康组、免疫重建组、癌复康+免疫重建组乳腺癌肺转移抑制率分别为64.7%,38.4%和84.8%,3组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论中药癌复康能延长人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s接种SCID鼠成瘤潜伏时间,促进SCID鼠的免疫重建,具有一定的抑制肿瘤生长和抗肿瘤转移的作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 癌复康 人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s 重症联合免疫缺陷 小鼠 免疫重建
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白细胞介素-2基因修饰肿瘤细胞引发凋亡的研究
9
作者 孙欲晓 张腾飞 陈诗书 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期287-287,共1页
用重组有人白细胞介素-2(IL-2)含信号肽cDNA的缺陷型逆转录病毒将人IL-2基因整合于鼠肝癌细胞株H22染色体后,PCR、RT-PCR及生物学等方法测定确证有人IL-2基因存在、表达及活性IL-2的分泌α透射电镜观察了IL.2基因修饰前后H22细胞韵超... 用重组有人白细胞介素-2(IL-2)含信号肽cDNA的缺陷型逆转录病毒将人IL-2基因整合于鼠肝癌细胞株H22染色体后,PCR、RT-PCR及生物学等方法测定确证有人IL-2基因存在、表达及活性IL-2的分泌α透射电镜观察了IL.2基因修饰前后H22细胞韵超微结构,发现IL-2基因修饰H22细胞中有26%的细胞其DNA含量低于肿瘤细胞的近4倍体呈亚2倍体, 展开更多
关键词 细胞介素-2 基因修饰 IL-2基因 肿瘤细胞 凋亡 肝癌细胞株 缺陷 信号肽 DNA 分泌
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一株HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞株的建立及其生物学性质 被引量:2
10
作者 林苹 陆燕蓉 +2 位作者 周宏远 张洁 黄孝忠 《肺癌杂志》 CAS 1999年第1期5-7,共3页
目的 为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法 用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果 ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液... 目的 为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法 用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果 ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液中生长了一年,在HAT培养液中不能形成集落,并保持了来源细胞LA795的生物学性质及成瘤性。结论 ALA9702细胞株稳定表现为HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞。 展开更多
关键词 HGPRT缺陷 肺癌细胞株 生物学性质 小鼠 肺癌疫苗
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研究发现:可针对细胞毒素T淋巴细胞开发艾滋病毒新疫苗
11
作者 凌建春 《健康向导》 2012年第4期47-47,共1页
人类免疫缺陷病毒(HIV)是导致艾滋病的病毒,但也有极少数感染者天生具有抵抗这种病毒的能力。此前研究发现,在300个感染人类免疫缺陷病毒的人中,约有1人能不用药物而通过一种叫做细胞毒素T淋巴细胞(CTL)的“杀伤”细胞株自然地... 人类免疫缺陷病毒(HIV)是导致艾滋病的病毒,但也有极少数感染者天生具有抵抗这种病毒的能力。此前研究发现,在300个感染人类免疫缺陷病毒的人中,约有1人能不用药物而通过一种叫做细胞毒素T淋巴细胞(CTL)的“杀伤”细胞株自然地控制住这种病毒。 展开更多
关键词 细胞毒素T淋巴细胞 艾滋病毒 人类免疫缺陷病毒 新疫苗 感染者 细胞株 用药物
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慢病毒介导的RNA干扰技术建立hPARP-1缺陷细胞株 被引量:1
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作者 杨淋清 纪卫东 +5 位作者 马儒林 张文娟 龚春梅 陶恭华 陈雯 庄志雄 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期461-463,共3页
聚ADP核糖聚合酶(poly—ADP ribose polymerase,PARP)是真核细胞生物体内一类重要的DNA损伤修复酶家族。其在各种生物效应引起的DNA断裂的活化下,产生聚(ADP-核糖)合成活性与聚(ADP-核糖)转移活性,将ADP核糖单位转移至某些氨... 聚ADP核糖聚合酶(poly—ADP ribose polymerase,PARP)是真核细胞生物体内一类重要的DNA损伤修复酶家族。其在各种生物效应引起的DNA断裂的活化下,产生聚(ADP-核糖)合成活性与聚(ADP-核糖)转移活性,将ADP核糖单位转移至某些氨基酸残基上,对蛋白质进行修饰,继而产生各种不同的生物学效应。 展开更多
关键词 RNA干扰技术 慢病毒介导 细胞株 DNA损伤修复酶 缺陷 DNA断裂 氨基酸残基 生物学效应
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HPRT缺陷细胞株的诱变和分离
13
作者 郭建辉 章扬培 夏寿萱 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1989年第2期88-91,共4页
用单功能烷化剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝胍(MNNG)作为化学诱变剂处理中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),使其基因发生点突变,通过含有6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基选择,获得次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,E、C、2、4、2、8)缺陷细胞的克隆.诱发突变... 用单功能烷化剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝胍(MNNG)作为化学诱变剂处理中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),使其基因发生点突变,通过含有6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基选择,获得次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,E、C、2、4、2、8)缺陷细胞的克隆.诱发突变频率为1.3×10^(-5).经含次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)的选择培养基鉴定及大剂量6-TG选择培养基验证,确认选出的克隆为HPRT缺陷型.经6周连续传代,缺陷株表型仍稳定. 展开更多
关键词 HPRT 缺陷细胞株 诱变 分离
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表达狂犬病病毒糖蛋白稳转细胞株的构建与应用
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作者 李海伦 龚志远 +7 位作者 焦翠翠 王福江 黄静波 白玉洁 黄培 张海丽 李媛媛 王化磊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期971-978,共8页
旨在利用Piggy Bac转座子系统构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)糖蛋白(glycoprotein,G)的稳转细胞株,为复制缺陷型RABV的拯救与培养奠定基础。根据NCBI公布的RABV SRV9株G基因序列设计引物,利用PCR技术扩增RABV-G基因并将其克隆... 旨在利用Piggy Bac转座子系统构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)糖蛋白(glycoprotein,G)的稳转细胞株,为复制缺陷型RABV的拯救与培养奠定基础。根据NCBI公布的RABV SRV9株G基因序列设计引物,利用PCR技术扩增RABV-G基因并将其克隆至真核表达载体YHM-spCas9,构建重组质粒YHM-SRV9-G。将重组质粒与Piggy Bac转座子酶辅助质粒共转染BSR细胞,利用20 mg/L灭瘟素S盐酸盐(blasticidin)连续筛选2周后获得有抗性的细胞簇。利用有限稀释法连续2次单克隆纯化后获得稳定表达RABV-G蛋白的单克隆细胞株BSR-G。PCR、间接免疫荧光及Western blot鉴定结果显示,BSR-G细胞携带RABV-G基因并可表达G蛋白,激光共聚焦结果显示RABV-G蛋白定位在细胞膜。将缺失G基因的重组狂犬病病毒(rSRV9-△G-eGFP)分别感染BSR和BSR-G细胞,发现rSRV9-△G-eGFP可在BSR-G细胞中增殖。本研究成功构建了稳定表达RABV-G蛋白的稳转细胞株BSR-G,为狂犬病复制缺陷型基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 稳转细胞株 复制缺陷病毒
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裸鼠动物模型在卵巢癌研究中的应用与进展
15
作者 阮和云 黎丹戎 李力(综述) 《中国医学文摘(肿瘤学)》 2007年第1期71-72,共2页
裸小鼠(nude mice)是1962年英国格拉斯医院Grist在非近交的小鼠中偶然发现的先天性免疫缺陷的动物,用“nu”表示裸基因符号。1969年丹麦Rygaard首先将人类结肠腺癌移植裸小鼠成功,从而为免疫缺陷动物研究和应用开创了新局面。卵巢... 裸小鼠(nude mice)是1962年英国格拉斯医院Grist在非近交的小鼠中偶然发现的先天性免疫缺陷的动物,用“nu”表示裸基因符号。1969年丹麦Rygaard首先将人类结肠腺癌移植裸小鼠成功,从而为免疫缺陷动物研究和应用开创了新局面。卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中发病率居第3位,而死亡率却位居榜首,这主要是由于目前卵巢癌发病病因尚不明确及其早期诊断的困难。随着人类肿瘤组织及肿瘤细胞株移植的成功,动物模型成为各项肿瘤实验研究领域的重要工具。特别是裸小鼠动物模型在卵巢癌中的应用更为广泛。现就近年裸鼠动物模型在卵巢癌中的应用予以概述。 展开更多
关键词 裸鼠动物模型 卵巢癌 生殖系统恶性肿瘤 先天性免疫缺陷 小鼠动物模型 肿瘤细胞株 裸小鼠 动物研究
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A Quantitative Assay for Measuring of Bovine Immunodeficiency Virus Using a Luciferase-based Indicator Cell Line
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作者 Xue YAO Hong-yan GUO +5 位作者 Chang LIU Xuan XU Jian-sen DU Hao-yue LIANG Yun-qi GENG Wen-tao QIAO 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期137-144,共8页
In order to quantitate the bovine immunodeficiency virus (BIV) infection in vitro, a BIV indicator cell line (BIVL) was established by transfecting baby hamster kidney cells with reporter plasmids containing the firef... In order to quantitate the bovine immunodeficiency virus (BIV) infection in vitro, a BIV indicator cell line (BIVL) was established by transfecting baby hamster kidney cells with reporter plasmids containing the firefly luciferase gene driven by a BIV long terminal repeat promoter. The BIV activates promoter activity of the LTR to express luciferase upon infection. BIV infection could therefore by quantified by detection of luciferase activity. Compared to standard assays used to detect BIV infection, the BIVL-based assay is 10 times more sensitive than the the CPE-based assay, and has similar sensitivity with the viral capsid protein Western blot assay. BIV indicator cell line could detect BIV infection specifically. Luciferase activity of BIV infected BIVL cells showed a time dependent manner, and 60 h post infection is the optimal time to detect BIV infection. Luciferase activity of BIVL cells correlates with the BIV capsid protein expression. Moreover, a linear relationship was found between MOI and the activated intensity of luciferase expression. In brief, the BIV indicator cell line is an easy, robust and quantitive method for monitoring BIV infection. 展开更多
关键词 萤火虫荧光素酶基因 牛免疫缺陷病毒 定量检测 细胞株 感染细胞 蛋白免疫印迹法 启动子活性 基础
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