hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导^(125)I摄取的实验研究

目的 探讨克隆的人钠 碘同向转运体 (hNIS)基因cDNA的生物学性能及其用于黑色素瘤放射治疗的可能性。方法 用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列 ,将其克隆至pUCm T载体并亚克隆至真核载体pcDNA3中 ,电击法将重组质粒导入黑色素瘤细胞 (B16 )建立新细胞系 (B16 A) ,在体外培养条件下研究其对放射性碘的摄取及外流情况。结果 成功克隆了hNIS基因 ,建立了能稳定表达hNIS基因的新型细胞系B16 A和单转空质粒pcDNA3的细胞系B16 B。B16 A细胞的摄碘能力较B16细胞高 17倍 ,较单转空质粒pcDNA3细胞系B16 B高 19倍。碘的外流过程十分迅速 ,有效半衰期 (T1 2 )仅 10min。结论 体外培养条件下 ,hNIS基因转导黑色素瘤细胞其本身足以介导碘的摄取 ,但有效半衰期较短 ,有待进一步研究如何增加放射性碘的摄取量及延长其细胞内滞留时间 ,从而提高放射生物学效应。

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究

目的 获取人钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因cDNA ,研究其转导黑色素瘤细胞在体外和体内能否介导放射性碘摄取 ,从而探索该策略用于黑色素瘤放射性碘治疗的可能性。方法 运用逆转录聚合酶链反应从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA ,将其克隆至真核载体pc DNA3 中 ,电转化法分别将重组质粒pc DNA3 hNIS及空质粒pc DNA3 转导黑色素瘤细胞 (B16 ) ,分别建立了细胞系B16 A和B16 B。在体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取及外流情况 ,继而将三种细胞系接种C5 7小鼠行13 1I显像和肿瘤摄取12 5I动态定量测定。结果 成功克隆到hNIS基因 ,并建立了能稳定表达hNIS的新型细胞系B16 A。B16 A细胞的摄碘能力较B16细胞高 17倍 ,较B16 B细胞高 19倍。碘的外流过程迅速 ,T1/ 2eff仅 10min。体内实验发现B16 A细胞所形成肿瘤能摄取放射性碘 ,腹腔注射12 5I后 1、2、4、12、2 4h肿瘤组织的 %ID/ g平均为 12 .2 2、10 .91、8.73、1.2 4、0 .19,12 5I在肿瘤组织内的生物半衰期约为 6h。B16 A细胞系所成肿瘤摄碘量与对照组相比较 ,P <0 .0 1,差别具有高度统计意义。结论 hNIS基因转导黑色素瘤细胞足以介导放射性碘摄取 ,但有效半衰期较短 ,难以产生足够的治疗剂量 ,有必要进一步研究如何增加放射性碘的摄取?

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘(^(125)I,^(131)I)摄取的体内实验

采用电转化法分别将含hNIS基因的重组质粒pc-DNA3-hNIS及空质粒pc-DNA3转导黑色素瘤细胞(B16),分别建立了细胞系B16-A和B16-B。将三种细胞系(B16-A、B16-B和B16)分别接种于C57小鼠右侧腹部皮下,当肿瘤生长至直径约10mm时进行131I全身显像;于注射125I后不同时相解剖肿瘤并测量其对125I的摄取量。结果显示:B16-A细胞系所成肿瘤见明显的放射性碘摄取,腹腔注射125I后1、2、4、12、24h每克肿瘤组织摄取125I放射性摄取百分数分别为12.22±0.71、10.91±0.72、8.73±0.99、1.24±0.29和0.19±0.03%ID/g。125I在B16-A肿瘤组织内的生物半衰期约为6h。对照组B16和B16-B细胞系所成肿瘤未见放射性碘摄取,两者相比,无统计学差异(P>0.05),将二组合并成一组作为对照,B16-A细胞系所成肿瘤摄碘量与之相比有显著差异,P<0.01。说明hNIS基因转导黑色素瘤细胞在体内足以介导放射性碘的摄取,但由于碘在肿瘤内的滞留时间较短,难以产生足够的治疗剂量。

人钠/碘转运体基因G395R与先天性甲状腺功能减退症相关

先天性甲状腺功能减退症 5 2例和 10 6例健康婴幼儿 ,采用PCR RFLP技术对钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因 3 95位点进行基因突变筛查。研究表明hNIS基因G3 95R突变可能不是青岛地区先天性甲状腺功能减退症发病的主要原因。

hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究

目的利用条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS感染脑胶质瘤细胞，探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子，荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS，进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad—Tp—E1a—Gp—NIS后，进行Westernblot分析蛋白质表达，131I内流及外流和131I克隆形成实验。结果荧光素分析实验证明，hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达，表达效率为37．31％～49．00％（F=5．87，P〈0．05）和59．75％～62．10％（F=11．89，P〈0．01）。Ad—Tp—E1a—Gp—NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制，且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Westernblot分析表明，hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×103和49×103的条带。感染Ad-Tp—E1a—Gp—NIS后，U87细胞摄碘能力提高78．80倍（F=2914．58，P〈0．01），U251细胞摄碘能力提高92．48倍（F=2275．91，P〈0．01）。体外细胞克隆分析证明，感染病毒并在131I中孵育12h后，超过90％的肿瘤细胞被杀死，而对照组细胞仅有65％（t=11．73～78．33，P〈0．01）。结论Ad·Tp·E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中，能引导放射性131I杀死胶质瘤细胞。