hOGG1基因低表达对DNA氧化损伤及修复的影响初探

背景与目的:初步探讨采用核酶技术获得的hOGG1基因低表达的细胞对氧化剂诱导的DNA氧化损伤与修复作用的影响。材料与方法:以A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549_R细胞为研究对象,分别以重铬酸钾和过氧化氢为受试物,比较两种细胞DNA损伤与修复的差异。彗星试验检测不同浓度受试物作用下两种细胞的彗星细胞率和DNA迁移长度;改良彗星试验比较两种细胞在去除受试物后孵育0、30、60、120和180min时的修复情况。结果:重铬酸钾和过氧化氢对A549_R细胞的DNA损伤效应敏感,在一些浓度下其彗星细胞率和DNA迁移长度明显高于A549细胞(P<0.05);A549_R细胞的DNA修复能力显著低于A549细胞(P<0.05)。结论:hOGG1基因的低表达可以增加细胞对氧化剂诱导的DNA损伤的敏感性,降低细胞DNA的修复能力。

DNA氧化损伤修复基因HOGG1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因HOGG1的可能作用,利用携带有HOGG1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立HOGG1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对HOGG1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞HOGG1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞HOGG1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P<0.05);转染后,细胞株形态无明显改变;其群体细胞倍增时间为2.05天,稍短于正常A549细胞(2.17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(P<0.05);SOD活力比正常A549细胞显著增加(P<0.05)。结论成功建立HOGG1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。

碱基切除修复通路基因XRCC1、hOGG1多态性与吸烟对肺癌患者生存的影响

目的:DNA损伤修复作为维持体内基因稳定性和修复DNA损伤的重要机制,在肿瘤的发生、发展、转归及预后中发挥重要作用,DNA损伤修复基因多态性通过影响DNA损伤修复能力进而影响肿瘤患者生存。本研究旨在探讨DNA损伤修复基因XRCC1、hOGG1多态性对肺癌患者生存的影响。方法:收集420例原发性非小细胞肺癌病例,采用TaqMan SNP技术检测肺癌患者外周血DNA XRCC1(rs25487)和hOGG1(rs1052133)多态性。采用Kaplan-Meier法分析生存情况,Log-rank法进行单因素检验,Cox回归用来计算调整混杂因素的风险比(Hazard Ratio,HR)。结果:患者临床特征和预后风险的分析显示,年龄≥60岁和病理分期晚期(Ⅲ/Ⅳ期)是影响肺癌预后的独立危险因素,P值分别为1.000E-4和3.828E-11。DNA修复基因XRCC1和hOGG1多态性与肺癌患者生存情况的分析未见不同基因型的生存曲线的分布具有统计学差异。按照吸烟情况分层后,在轻度吸烟者(吸烟量<40包/年)中,携带hOGG1突变型G等位基因较携带野生型C基因型生存率低(P=0.0213),经Cox回归分析显示携带G等位基因的患者死亡风险为野生型的8.24倍。而在非吸烟者和重度吸烟者中未见多态性对患者生存的影响。结论:本研究首次发现碱基切除修复通路基因hOGG1 rs1052133多态性对肺癌患者生存存在一定影响,尤其是在轻度吸烟者中,携带突变型等位基因增大肺癌患者死亡风险,相关机制有待进一步大规模样本验证。

DNA氧化损伤修复基因hOGG_1高表达细胞株的建立

目的联合pcDNA3.1(+)/Myc-HisA-hOGG1和pGL3promoter荧光质粒稳定转染人肺腺癌A549细胞获得hOGG1基因高表达细胞株,并初步探讨转染细胞生物学特性的变化。方法成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A载体后,大量抽提阳性重组子并在Fu GENE6的介导下联合pGL3promoter荧光质粒转染A549细胞(转染组),同时设空白对照组(A549)和阴性对照组[PGL3+pcDNA3.1(+)/Myc-HisA转染的A549细胞]。生物荧光检测转染细胞hOGG1mRNA表达的改变,蛋白质免疫印迹法检测转染细胞hOGG1蛋白表达水平。将3组细胞于不同高氧条件下培养,相差显微镜观察形态学变化,彗星试验比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况,同时测定DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化。结果转染细胞荧光素酶稳定表达,蛋白印迹检测转染组hOGG1蛋白明显高于两对照组细胞,提示hOGG1基因高表达细胞株建立成功。相同高氧条件下,转染组形态学变化明显减轻,彗星细胞率和olive tail moment明显低于空白组和阴性对照组,修复完成率高,修复时间缩短(P<0.05),测定氧化损伤标志物8-OHdG明显下降,提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均增高(P<0.05)。结论 hOGG1基因的高表达可减轻细胞对DNA氧化损伤的敏感性,提升细胞DNA的修复能力。

碱基切除修复基因HOGG1特异性锤头状核酶表达载体的构建及其功能的初步研究(英文)

目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物,但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉素主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)是一种DNA氧化损伤的修复酶,可特异性的切除由活性氧产生的8-羟基鸟嘌呤。针对这一机制,设计并合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因,构建其真核表达载体并初步探讨在该基因作用下,人肺腺癌A549细胞株对阿霉素的药物敏感性的影响。方法人工设计并合成核酶基因(RZ),将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,阳性重组子由BamH和EcoR酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE6的介导下引入A549细胞株,RT-PCR(逆转录多聚酶链反应)法鉴定转染,并半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。MTT法检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化;彗星试验检测细胞转染前后DNA氧化损伤修复能力的改变。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列成功克隆入pcDNA3.1(+)中,命名为pcDNA3.1(+)-RZ。经RT-PCR法鉴定质粒成功导入靶细胞中,并检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降36%,与空白细胞组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测显示转染细胞组对阿霉素的药物敏感性增加,与未转染细胞组之间差异具有统计学意义(P<0.05);彗星试验表明在1.0μg/mL阿霉素作用下,转染细胞组较未转染细胞组DNA损伤程度增加(P<0.05),但无时效关系。结论成功构建HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体。核酶在A549细胞内有效抑制靶基因HOGG1的表达,增加了该细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性。为进一步研究HOGG1基因的功能奠定了基础。

DNA修复基因hOGG1多态与肺癌遗传易感性

背景与目的 :研究修复8_羟基鸟嘌呤的hOGG1基因Ser326Cys多态与中国人肺癌易感性的关系。 材料与方法 :采用病例_对照分子流行病学方法 ,以PCR_限制性片段多态(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术 ,对128名正常对照和124例肺癌患者hOGG1基因第326位点Ser/Cys多态性进行分析 ,并比较不同基因型与肺癌发病危险的关系。 结果: 对照组和肺癌组人群的Cys等位基因频率基本相同(37.5 %和39.9 %) ,但肺癌组的Cys/Cys基因型频率为19.4 % ,高于对照组的10.2 %。与携带Ser/Ser或Ser/Cys基因型者比较 ,携带Cys/Cys基因型个体患肺癌的危险约增加1倍(OR^ =2.12 ,95 %CI=1.03～4.39)。 结论: hOGG1基因Ser326Cys多态可能与中国人肺癌易感性相关 ,可以作为肺癌遗传易感性标志物 ,用于易感个体的预警和预防。

hOGG1基因多态与结直肠癌和肝细胞癌遗传易感性

目的探讨hOGG1基因第326密码子多态（Ser326Cys）与中国人群结直肠癌（CRC）和肝细胞癌（HCC）遗传易感性的关系。方法采用TaqMan方法检测345例CRC与670例对照以及175例HCC与119例对照的hOGG1Ser326Cys基因型分布及差异。结果总体上，hOGG1 Ser326Cys基因型分布在HCC-对照、CRC-对照以及不吸烟的CRC-对照人群间均无显著性差异（P〉O．05）。但在吸烟人群中，326Cys是CRC发生的危险因素（OR=1．58，95％CI=1．14～2．19，P=0．006）；与Ser／Ser基因型及Ser等位基因携带者（Ser／Ser、Ser／Cys基因型）相比，Cys／Cys基因型的CRC风险显著增加至2．40倍（95％CI=1．20～4．78，P=0．013）及2．02倍（95％CI=1．21-3．37，P=0．008）。结论hOGG1Ser326Cys多态可能与HCC发病风险无关，但Cys／Cys基因型增加中国吸烟人群的CRC发病风险。

肝细胞癌hOGG1 mRNA及其蛋白的表达

目的:通过检测DNA修复酶hOGGlmRNA及其蛋白在肝细胞癌中表达程度,探讨hOGGl在肝细胞癌发生、发展中的作用.方法:应用RT-RCR研究正常肝细胞株L-02、肝癌细胞株SMMC7721,HepG2和肝癌(26例)及癌旁组织(21例)中hOGGlmRNA的表达,同时用免疫组织化学方法检测了上述肝癌组织(17例)及癌旁组织(15例)中hOGGl蛋白的表达.结果:三株细胞均有hOGGlmRNA表达,但hOGGlmRNA在正常肝细胞株L-O2中的表达显著低于肝癌细胞株SMMC7721、HepG2中的表达(分别为0.270±0.014,0.66±0.011,0.624±0.020,P<0.05).肝癌组织hOGGlmRNA表达较癌周组织明显降低(P<0.05).HOGGl蛋白肝组织表达阳性率为87.2%,主要在肝细胞胞质表达,在肝癌组织中表达比癌周组织明显降低(P<0.05).结论hOGGlmRNA及其蛋白在肝癌细胞株及癌周组织中表达量升高。

hOGG1基因Ser326Cys位点的多态性与胆管癌的遗传易感性研究

目的胆管癌（cholangiocarcinoma,CC）病因远未阐明,早期诊断困难。DNA修复酶8-羟基鸟嘌呤糖苷酶（human 8-hydroxyguanine glycosylase,hOGG1）Ser326Cys（rslo52133）多态性与许多肿瘤的发病相关,但是与CC的关系却未见报道。旨在探讨hOGG1基因Ser326Cys位点的多态性在CC发病中的作用。方法用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）方法检测了59例CC和100例正常对照的hOGG1基因Ser326Cys位点的基因分型,并比较不同基因型与CC发病危险的关系。结果 hOGG1基因rs1052133多态性位点的Ser/Ser、Ser/Cys和Cys/Cys基因型在CC中的频率分别为15.3%、59.3%和25.4%,在对照组中分别为13.0%、44.0%和43.0%;以Ser/Ser基因型作为参照,Ser/Cys、Cys/Cys和Ser/Cys＋Cys/Cys基因型均不增加CC的发病风险;对于女患者,以Ser/Ser基因型作为参照,Ser/Cys和Ser/Cys＋Cys/Cys基因型与其相比,虽未达到统计学差异,但有增加CC发病风险的趋势[优势比（odds ratio,OR）值分别为3.81和2.917,95%可信区间（confidence interval,CI）分别为0.404~35.905和0.319~26.68]。结论 hOGG1基因Ser326Cys位点的多态性可能与CC的遗传易感性无关。

食管癌患者XRCC1,XRCC3及hOGG1蛋白的表达与临床因素的相关性研究

目的检测人类X射线交错互补修复基因(X-ray repair cross-compplementing gene1,XRCC1)、人类8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(human 8-hydroxyguanine glycosylase 1,hOGG1)基因和人类X射线交错互补修复基因(X-rayrepair cross-compplementing gene 3,XRCC3)蛋白在食管癌和癌旁组织中的表达,探讨3种蛋白与食管癌发生及发展的关系。方法采用蛋白免疫印迹法检测XRCC1、XRCC3及hOGG1蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达,应用ECL法显影并以其灰度值来表示蛋白表达的量。结果 XRCC1、XRCC3及hOGG1蛋白在癌组织中的表达高于癌旁组织(P均<0.05)。同时XRCC1蛋白在癌组织与癌旁组织中的差异程度与民族有相关性(P<0.05)。结论 XRCC1、XRCC3及hOGG1蛋白表达水平与食管癌的发生可能具有相关性,并且XRCC1蛋白还可能参与食管癌的进展。

HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究

目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,阳性重组子由BamHI和EcoRI酶切 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A5 4 9,RT -PCR(逆转录多聚酶链反应 )法半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。结果 :经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3 .1(+)的BamHI和EcoRI酶切位点之间 ,命名为pcDNA3 .1(+) -RZ。经RT -PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降 36 % ,与空白细胞组差异有显著性。结论 :成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A5 4 9细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。

hOGG1基因多态性与肺癌化疗疗效及预后关系的研究

目的:探讨DNA损伤修复基因hOGG1 Ser326Cys多态性与中晚期肺癌化疗疗效的关系及与肺癌患者生存的关系。方法:收集150例非小细胞肺癌病例,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerise chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测外周血hOGG1 Ser326Cys多态性,采用χ2检验和非条件Logistic回归模型分析hOGG1基因多态性与肺癌化疗疗效的关系。采用Kaplan-Meier方法 Log-rank检验分析hOGG1多态性与肺癌患者生存时间的关系。结果:Ⅲ期肺癌患者的化疗受益率明显高于Ⅳ期(OR=1.369,95%CI=1.091-1.717,P=0.016),年龄<60岁的化疗受益率高于≥60岁者(OR=2.052,95%CI=1.083-3.754,P=0.029),携带hOGG1基因突变纯合型Cys/Cys的化疗受益率高于野生型Ser/Ser(OR=3.453,95%CI=1.217-9.697,P=0.047)。但生存情况分析发现,不同基因型生存曲线的分布无统计学差异。结论:hOGG1多态性与中晚期肺癌化疗效果显著相关,但对肺癌远期生存无明显影响。

原发性肝癌DNA修复酶hOGG1,hMTH1基因表达与DNA氧化损伤的修复

目的:探讨DNA修复酶hOGG1和hMTH1基因表达对DNA氧化损伤产物8-OHdG的修复调控及其在肝癌发生和防御机制中的作用.方法:RT/实时PCR定量检测23例HCC患者癌和癌旁组织中hOGG1和hMTH1基因的表达,HPLC/ECD法测定其8-OHdG含量.结果:HCC患者癌旁组织8-OHdG含量明显高于癌组织(133vs56nmol/gDNA,P<0.01),且与炎症程度密切相关.而癌组织中hMTH1表达较癌旁组织显著升高(0.476vs0.256,P<0.05).hOGG1表达在HCC和癌旁组织间无显著差异.但hOGG1和hMTH1表达之间存在显著的相关性(r=0.81,P<0.01).结论:慢性肝脏炎症反应可能是肝细胞内DNA氧化损伤及肝细胞癌变的重要原因.DNA修复酶hOGG1和hMTH1可能协同参与肝细胞内DNA氧化损伤的修复,在肝癌发生和防御机制中起到作用.

hOGG1 ser326cys基因多态性与宫颈癌遗传易感性的关系

目的探讨广东汉族妇女hOGG1 ser326cys基因多态性与宫颈癌关系,为宫颈癌的预防和治疗提供新的思路。方法利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对86例宫颈癌患者和102名健康对照的hOGG1 ser326cys多态位点进行分型,采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与宫颈癌易感的相关性。结果ser/ser(CC)、ser/cys(CG)、cys/cys(GG)基因型在病例组中的频率分别为19.8%、52.3%和27.9%,在对照组中分别是23.5%、44.1%和32.4%,两组间基因型频率分布差异无统计学意义(2=1.26,P=0.532);携带hOGG1cys(G)变异等位基因与宫颈癌危险性无明显相关(OR=0.94,95%CI0.63～1.41,P=0.767)。结论hOGG1基因ser326cys多态位点与广东汉族妇女宫颈癌易感无相关性。

术前化疗对hOGG1及PARP在原发性肝癌组织中表达的影响

目的:探讨术前化疗对损伤修复机制的影响.方法:应用EnVision免疫组化法检测41例正常肝组织、187例(术前未做化疗患者99例和术前行经肝动脉插管化疗患者88例)原发性肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织中hOGG1和PARP的表达.结果:正常肝组织、术前化疗组与术前未化疗组肝癌组织中,hOGG1蛋白细胞核表达阳性分度依次递增,而PARP蛋白细胞核表达阳性分度依次递减,三者之间差异均有显著性差异(均P<0.05).PARP癌旁组织阳性表达强度(P=0.038)、ALT(P=0.001)、病理分级(P=0.040)是肿瘤复发的危险因素,外周血淋巴细胞数(P=0.026)、化疗(P=0.049)是肿瘤复发的保护因素.结论:术前化疗可以杀伤对氧化损伤敏感的肝癌细胞.

DNA修复基因hOGG1多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的研究

目的:研究DNA修复基因hOGG1多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的关系。方法:采用病例-对照研究方法,以聚合酶链式反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)技术,分析了132例哈萨克族食管癌患者(病例组)和133名正常对照者(对照组)hOGG1基因rs2072668C/G位点基因型分布,并比较不同基因型与食管癌发病风险的关系。结果:CC、CG、GG基因型在病例组中的频率分别为25.2%、51.3%和23.5%,在对照组中是28.3%、54.3%和17.4%,两组间基因型频率分布差异无统计学意义(χ2=1.206,P=0.547);携带hOGG1G变异基因与哈萨克族食管癌危险性无明显相关(OR=1.203,95%CI=0.818～1.770)。结论:hOGG1基因rs2072668C/G位点多态性与新疆地区哈萨克族食管癌易感性无相关性。

hOGG1基因在氯化镉恶性转化16HBE细胞系过程中的表达

目的探讨OGG1基因在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中mRNA的表达情况。方法用半定量反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hOGG1基因mRNA的表达情况。结果与16HBE细胞比较,hOGG1基因mRNA在第32代细胞及成瘤细胞的表达明显低下(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE细胞系恶性转化过程中hOGG1基因表达逐渐下降,hOGG1基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。

hOGG1基因多态性与川北地区肺癌易感性关系的研究

目的探讨四川北部地区汉族人群8-羟基鸟嘌呤糖苷酶(hOGG1)基因Ser326Cys位点多态性状况及其与该地区肺癌易感性的关系,并与其他地区人群进行比较。方法采用病例对照研究方法和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerise chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法检测四川北部地区肺癌患者125例和非肿瘤患者125例(对照组)hOGG1基因第326位点Ser/Cys基因型分布,并比较不同基因型与肺癌发病危险的关系。结果病例组的Ser/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys基因型频率分别为15.2%、27.2%、57.6%,而对照组分别为32.0%、42.4%、25.6%。χ2检验显示两组基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。与携带Ser/Ser基因型相比,携带Ser/Cys基因型者患肺癌风险增加(OR=1.351,95%CI=0.674～2.707,P=0.397),而携带Cys/Cys基因型者肺癌风险增加3倍(OR=4.737,95%CI=2.384～9.413,P=0.000)。结论 hOGG1基因Ser326Cys多态性可能与四川北部肺癌易感性有关,携带Cys/Cys基因型肺癌风险明显增加。