hOP-1成熟肽基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :构建hOP - 1成熟肽基因表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为研究OP - 1的功能作用以及制备OP - 1抗体奠定基础。方法 :构建hOP - 1/pEH4表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达OP- 1,SDS -PAGE对表达产物进行检测 ,凝胶薄层扫描判定蛋白表达量。结果 :pEH4/OP - 1重组表达载体转化DH5α,经温度诱导后 ,SDS -PAGE显示Mr约为 14× 10 3 的新蛋白条带。薄层扫描测定 ,表达蛋白占菌体总蛋白量的 33%。结论 :构建的hOP - 1/pEH4表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中获得OP -

hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建

目的 证实人牙乳头细胞中OP 1的表达 ,获得hOP 1全长基因及其高效真核表达载体。方法 提取人牙乳头细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增hOP 1全长基因并克隆入T载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定后。构建高效真核表达载体pCI OP 1并筛选鉴定。结果 PCR扩增得到一特异性的约 13 0 0bp的片段 ,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致。构建的pCI OP 1质粒 ,用于基因转染纯度较好。结论 人牙乳头细胞中首次克隆到hOP 1全长基因 。

人成骨蛋白-1成熟肽基因5’端的修饰及其在大肠杆菌中的表达

目的：对人成骨蛋白－１（ＯＰ－１）成熟肽基因进行修饰、克隆并在大肠杆菌中表达、检测，为ＯＰ－１的进一步纯化、复性、诱骨活性的研究以及未来的临床应用奠定基础。方法：在不改变氨基酸的前提下，用ＰＣＲ的方法对ＯＰ－１的成熟肽Ｎ端序列加以修饰，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３’端０．４２ｋｂ基因片段克隆于温控型大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０，受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。用鼠抗牛天然ＢＭＰｓ单抗对表达产物进行ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ确证。结果：工程菌经４２℃、５ｈ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带，分子量在１．６×１０４ｕ左右，约占菌体总蛋白的１９．８％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后，可获得纯度较高的重组人成骨蛋白－１成熟肽（ｒｈＯＰ－１）。表达产物的ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｎｇ确证确均呈阳性反应。结论：表达产物即为目的蛋白，使ｈＯＰ－１成熟肽基因５’端的修饰及其在大肠杆菌中的表达在国内第一次获得成功。

大肠杆菌重组人成骨蛋白-1的非诱导表达特性

目的 研究大肠杆菌重组人成骨蛋白 1的非诱导表达特性。方法 通过水质、起始pH、接种量、葡萄糖添加量、甘油添加量、装液量、转速等实验研究不同营养条件和培养条件对OP 1非诱导表达的影响。通过传代实验 ,考察该系统OP 1表达的稳定性。结果 水质对OP 1的表达没有明显影响 ,2 %～ 4 %的接种量有利于OP 1的表达 ,起始pH以 6 0为宜。葡萄糖对OP 1的表达有较大影响 ,2 %～ 4 %的葡萄糖添加量可以获得较高表达。甘油的添加能明显促进OP 1的表达 ,最适添加量为 0 3% ,较对照提高表达 81 7%。该表达系统对溶氧的需求不大 ,装液量和转速分别以 12 5～ 15 0ml和 15 0r min为宜。在优化条件下 ,最适表达时间为 2 4～ 2 6h ,OP 1的表达量可达到菌体蛋白的 4 0 %。优化的营养条件和培养条件对本系统OP 1的表达和质粒的稳定有利 ,10次传代可保持 90 %表达。结论 建立了非诱导表达的摇瓶发酵工艺 ,对其非诱导表达特性有了较为深入的了解 ,为进一步放大研究奠定了基础。

新型HIV-1蛋白酶抑制剂的合成

HIV-1蛋白酶为成熟病毒颗粒的正常组装提供必需的结构蛋白和功能蛋白,因此,HIV-1蛋白酶抑制剂可有效阻止病毒的进一步感染。然而,耐药性一直是抗HIV药物面临的一个关键科学问题,设计一类具有新型骨架特征的HIV-1蛋白酶抑制剂不失为一种好的解决方案。以Darunavir为先导化合物,运用骨架跃迁和拼合等药物设计策略,设计合成了3个结构新颖的化合物,均未见文献报道,目标化合物经~1HNMR、^(13)CNMR和MS确证。

黄龙野生酒花与栽培酒花杂交F_1的POD研究

将陕西黄龙野生酒花 (♂ )与 8种栽培酒花 (♀ )进行杂交 ,对各杂种 F1实生苗观察 ,采 F1地下根状茎 ,分别用质量分数为 7%、1 2 %的不连续垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳分析过氧化物同工酶 ( POD)。结果显示 :各杂种 F1与相对应的母本 (栽培种 )比较 ,同工酶谱发生了很大变化 ,上部慢带区酶带数量和酶活性明显增加 ,酶谱显示出中下部快带区偏母、中上部慢带区随父 (野生种 )的互补型 。

一种基于M/D/1排队模型的可用带宽测量算法

由于液体流模型不能反映实际背景流的突发性及包长分布,基于液体流模型的可用带宽测量技术在突发背景流及多跳链路下测量精度较低。因此,提出了一种基于M/D/1排队模型的高精度可用带宽测量算法FPU(five-packet-unit for available bandwidth measurement)。该算法采用五包结构构成探测单元,结合探测包TTL值设置,分别测量瓶颈链路前后的平均探测包间隔,并基于M/D/1排队模型计算可用带宽,减小了背景流的抖动及多跳链路带来的测量偏差。探测时,大部分探测包在瓶颈链路前后被丢弃,减小了探测流对网络的入侵度。仿真表明,相比现有算法,FPU算法具有更高的测量精度和更好的适应性。

人成骨蛋白-1成熟肽基因在大肠杆菌中的克隆与表达

本实验报告了人成骨蛋白 - 1成熟肽基因在大肠杆菌中的克隆与高效表达。通过计算机软件分析 ,采用大肠杆菌偏爱密码子设计并分段合成了人成骨蛋白 - 1成熟肽编码基因片段。用 PCR技术扩增目的基因片段 ,先克隆到 p UC1 9载体上 ,测序正确后再将其克隆到 p BV2 2 0表达载体上 ,以DH5α为宿主菌 ,42℃ ,6 h诱导表达。经 SDS- PAGE鉴定分析 ,在约 1 6× 1 0 3处有一新的蛋白质条带 ,扫描分析表明 ,该条带占菌体总蛋白含量的 40 %左右。

一种高精度相位微跃1 PPS信号发生器的研制

为满足高精度时间同步的需要,研制了一台高精度相位微跃秒脉冲信号发生器原理样机。分别给出了DDS(direct digital synthesizer)和CPLD(complex programmable logic device)技术实现信号合成、移相原理,在此基础上,深入分析了两种技术的优缺点,研究将CPLD和DDS两种技术相结合的方法,采用CPLD对参考信号进行计数延迟的方式实现整数倍周期时间长度的相位粗调,并合成秒脉冲信号;结合DDS的内部相位偏置寄存器,实现对合成信号小数倍周期时间长度的相位细调。整个系统采用数字控制合成的方法,设计简单,易于控制。实验结果表明,该发生器产生的秒脉冲信号与参考信号偏差的标准差为95.8 ps,相位微跃分辨率500 ps,可以满足高精度时间同步过程中高精度相位偏移的要求。

1×1跳频与1×3跳频分析

本文中的实际案例是作者在Z地一次全网的跳频整改工作,从实际案例出发,探讨了1×1跳频与1×3跳频的优缺点,从自身网络的特性出发,选择了1×1的跳频方式,同时提出了现实网络中我们真正需要关心的东西。

中国香型啤酒花札一的品质分析和评价

采用顶空固相微萃取方法对国产香型啤酒花品种札一的压缩花和液态CO2浸膏中的挥发性成分进行了分析,并测定了该啤酒花品种的总树脂、软树脂、硬树脂、α-酸、β-酸和啤酒花多酚等多项指标,并与国外优质香型花SAAZ的各项影响酿造性能的参数进行了比较。结果表明,札一啤酒花具有较低的α-酸含量(3.40%,w/w),其β-酸含量在3.50%(w/w),合葎草酮在α-酸中所占的比例为23.92%;挥发性成分中β-法呢烯的相对含量达到了11.52%(w/w),在浸膏中的相对含量更高(14.48%);α-香柠檬烯的含量在压缩花和浸膏中分别为0.90%和1.56%,与国际优质香型啤酒花的含量指标相符合,表明札一具有优质香型啤酒花的品质,其液态CO2浸膏基本保持了压缩花的风味特征。

基于单向训练预补偿的双向跳空方法研究

为进一步解决传统0/1式跳空系统的物理层安全问题,安全通信的单向限制,同时提高系统训练效率,提出了一种基于单向训练预补偿的双向0/1式跳空方法。通信双方只需要通过一次单向训练,获取信道信息,利用此信道信息设计通信双方的预补偿系数,并对发射信号进行预补偿。接收方使用初始接收权值就可以对信号进行正确接收。最后计算出接收方和窃听方的接收信噪比和误比特率,并与预补偿反向训练0/1式跳空方法(BTM-PC)进行比较。理论分析和实验仿真表明,该方法能够有效地保障系统双向通信的安全性,提升系统的训练效率,同时在不降低合法用户的接收性能的情况下,提升系统的防窃听能力。

一种新的跳频脉冲信号的运动补偿方法

随机跳频脉冲信号的运动补偿是雷达信号处理中的难点 ,本文采用伪随机的方式 ,即在各脉组间采用同一随机编码序列 ,来产生随机跳频脉冲信号 ,从而大大简化了信号的复杂度 ,并在此基础上设计了一种简单可行的运动补偿方法%D%D前后正负跳频脉组比较法。分析表明 ,采用伪随机的方式对原始信号的分辨性能没有太大的影响。所提出的方法具有运算量少 。

Temperature regulates negative supercoils to modulate meiotic crossovers and chromosome organization

Crossover recombination is a hallmark of meiosis that holds the paternal and maternal chromosomes(homologs)together for their faithful segregation,while promoting genetic diversity of the progeny.The pattern of crossover is mainly controlled by the architecture of the meiotic chromosomes.Environmental factors,especially temperature,also play an important role in modulating crossovers.However,it is unclear how temperature affects crossovers.Here,we examined the distribution of budding yeast axis components(Red1,Hop1,and Rec8)and the crossover-associated Zip3 foci in detail at different temperatures,and found that both increased and decreased temperatures result in shorter meiotic chromosome axes and more crossovers.Further investigations showed that temperature changes coordinately enhanced the hyperabundant accumulation of Hop1 and Red1 on chromosomes and the number of Zip3 foci.Most importantly,temperature-induced changes in the distribution of axis proteins and Zip3 foci depend on changes in DNA negative supercoils.These results suggest that yeast meiosis senses temperature changes by increasing the level of negative supercoils to increase crossovers and modulate chromosome organization.These findings provide a new perspective on understanding the effect and mechanism of temperature on meiotic recombination and chromosome organization,with important implications for evolution and breeding.