端粒、端粒酶结合因子hPinx1基因启动子的克隆及活性分析

目的:克隆端粒、端粒酶结合因子hPinx1基因的启动子,分析并鉴定其活性调控元件。方法:采用PCR技术从人肝癌细胞系HepG2基因组中扩增出hPinx1启动子,构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列,在HepG2细胞中检测其活性。结果:克隆了hPinx1基因转录起始位点上游4661bp且序列正确;活性分析表明hPinx1启动子含有多个调控元件,其中核心序列位于530bp内,在1329～2174bp间存在正调控序列,在2174～4661bp间存在负调控序列。结论:构建的hPinx1启动子具有活性,为hPinx1的功能研究提供了重要基础。

PinX1基因在肾癌组织的表达及临床意义

目的分析抑癌基因PinX1在肾癌中的表达,探讨PinX1在肾癌发生、发展和预后中的作用及临床意义。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测56例肾癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶催化亚基(hTERT)的mRNA表达水平,同时应用免疫组化方法检测PinX1蛋白表达水平,分析PinX1表达与肾癌分期、分级及临床特征之间的关系。结果 PinX1表达与肾癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间有显著相关性(P<0.05),与hTERT表达呈负相关。PinX1在肾癌和癌旁表达具有显著性差异(P<0.05)。肾癌分期分级越高,PinX1表达越低,有淋巴结转移的PinX1表达要低于无淋巴结转移(P<0.05)。结论 PinX1的下调可能与肾癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关。检测PinX1的表达水平对评价肾癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。