国内首例Costello综合征患儿HRAS基因突变分析

目的通过对1例临床疑似Costello综合征的患者进行HRAS基因分析并确诊。方法提取患者及其父母的基因组DNA,PCR扩增HRAS基因的第2～5个编码外显子并直接测序。Pubmed检索Costello综合征的临床表现、实验室检查和治疗干预方法。结果在HRAS基因第2外显子第34位碱基序列处发现一个已知错义突变c.34G>A,p.Gly12Ser。患者父母DNA未检测到相同突变。结论 Costello综合征是一种罕见的常染色体显性遗传病,患者有特征性面容、极度喂养困难史和生长发育落后等,确诊有赖于HRAS基因突变分析。

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的构建基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg(EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果成功构建了基于Cre-LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL/6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg(EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5~15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论成功建立运用Cre-LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。

Costello综合征HRAS基因突变研究

目的:报告1例Costello综合征及其临床特点,确定其基因突变情况。方法:收集患者临床资料,抽取先证者及其家庭成员外周血,提取基因组DNA,对先证者DNA进行全外显子组测序,经数据过滤确定候选基因后进行Sanger测序验证。结果:先证者HRAS基因的2号外显子存在新发杂合突变c.34G>A,导致其编码的氨基酸发生错义突变(p.Gly12Ser),父母均不携带此突变。结论:患者确诊为Costello综合征,HRAS基因的c.34G>A杂合突变可能是导致患者出现临床症状的致病原因。

1例Costello综合征HRAS基因新发突变病例报道及文献学习

目的:报道1例HRAS基因新发杂合突变c.34G>A(p.G12S)的Costello综合征患儿,结合文献学习该病的病因、临床表现、诊断及治疗。方法:采集患儿病史并观察患儿的特殊面貌,取患儿及其父母外周血行高精度临床外显PLUS的检测分析,且在Pubmed上检索Costello综合征病因、临床表现、诊断及治疗方法。结果:患儿有喂养困难病史,并有鼻梁低平、稀疏或卷曲的头发、耳位低等特殊面容,并且临床外显PLUS检测结果示患儿HRAS基因存在新发杂合突变c.34G>A(p.G12S),同时测序数据显示患儿父母未携带此突变,此突变为新发突变。结论:根据临床表型,结合HRAS基因突变分析结果,该患儿可确诊Costello综合征。临床上如发现有不明原因的喂养困难,且有特殊面貌的患儿,均应注意有无Costello综合征可能,该病需依靠基因分析进行确诊。

HRAS基因单核苷酸多态性与精神分裂症及非典型抗精神病药物疗效的关联研究

目的·探讨中国汉族人群精神分裂症患者HRAS原癌基因(HRAS proto-oncogene,HRAS)rs11246176位点多态性与精神分裂症及非典型抗精神病药物疗效的相关性。方法·纳入460例急性发作期精神分裂症患者(病例组)及386名健康对照者(对照组)。精神分裂症患者均予以非典型抗精神病药物治疗,并完成26周随访。采用阳性和阴性症状量表(PositiveandNegativeSyndromeScale,PANSS)分别于入组时、入组13周和入组26周评定患者情况,计算26周时的减分率作为评定药物疗效的标准(减分率≥50%为有效,<50%为无效),据此将患者分为有效组和无效组。采集所有对象的外周静脉血,提取DNA,采用TaqMan探针基因分型技术对HRAS基因rs11246176位点进行基因分型,应用SHEsis和SNPstats软件比较病例组与对照组、有效组与无效组等位基因和基因型频率分布差异以及不同遗传模式下基因型频率分布差异。采用表达数量性状基因座(expressionquantitativetraitloci,eQTL)关联分析探讨rs11246176位点多态性与人脑内HRAS基因表达的关系。结果·rs11246176等位基因及基因型频率在病例组与对照组间的差异无统计学意义(均P>0.05)。有效组中A等位基因频率高于无效组,差异有统计学意义(P=0.010);有效组A等位基因携带者(AA+AG基因型)频率高于无效组,差异有统计学意义(P=0.040)。另外,rs11246176位点A等位基因携带者在26周时的PANSS减分率显著高于GG基因型(P=0.010)。eQTL分析发现正常高加索人和非裔美国人背外侧前额叶皮层rs11246176位点AA基因型的HRAS mRNA表达水平最高,其次为AG型,GG型表达水平最低(P=0.000)。结论·HRAS基因rs11246176位点可能与中国汉族人群精神分裂症的发生无关,但可能与非典型抗精神病药物的疗效有关,非典型抗精神病药物可能对A等位基因携带患者的疗效较好。

HRAS基因T81C位点多态性与甲状腺癌发病的关系

目的探讨HRAS基因T81C多态性与中国北方汉族人群甲状腺癌（PTC）的关系。方法选择2009年5月—2013年4月间在牡丹江市第一人民医院及牡丹江医学院附属红旗医院、附属二院就诊的经病理诊断为PTC的200例患者作为病例组;同时选择性别相同、年龄接近（±3岁）的200例无肿瘤家族史的同期健康体检者作为对照组。所有研究对象均为在本地区居住5年以上的汉族居民。调查人群的一般情况（既往史、遗传史、职业史、生活环境等）,并检测人群HRAS基因的T81C多态性。结果携带TC基因型（OR=3.391,95%CI：2.164-5.314）可增加乳头状甲状腺癌的发生风险。调整吸烟、居住地区、甲状腺疾病家族史等传统因素后,携带TC基因型仍能增加PTC的发生风险（OR=3.510,95%CI：2.127-5.792）。结论 HRAS基因81位T→C多态性是我国北方汉族人群乳头状甲状腺癌的危险因素。

CB6F1-Tg(HRAS)Nifdc小鼠与CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic小鼠的脏器及血液生理指标测定与比较分析

目的比较自主建立的C57BL/6J-Tg(HRAS)转基因小鼠与BALB/c J小鼠的杂交1代小鼠CB6F1-Tg(HRAS)Nifdc(简称CB6F1-NIFDC)与日本转基因小鼠模型杂交1代小鼠CBy B6F1-Tg(HRAS)2Jic(简称CB6F1-CIEA)的脏器及血液生理指标异同,丰富自建模型的基础数据。方法选取8周龄的CB6F1-NIFDC及CB6F1-CIEA各10只,雌雄各半,活体称体质量,随后解剖并测定其主要脏器质量及血液生理指标。结果自主建立的CB6F1-NIFDC及日本引进的CB6F1-CIEA小鼠模型的部分脏器质量和血生理参数有差异性,脏器质量结果表明,雌性小鼠的心、肝、肺、左右肾等指标存在一定差异;雄性小鼠的肝、肺、左右肾、胸腺、左右睾丸指标质量有差异。22项血液生理指标方面,雌性小鼠在RBC、HGB等7项指标差异极显著(P<0.01);而雄性小鼠在RBC、HCT等5项指标差异极显著(P<0.01)。结论本文测定了两种模型脏器指标及生理指标,为自建模型在新药安全评价实验中的应用提供参考。

RAS基因家族在实体瘤中突变率的研究进展

RAS基因家族包含3种原癌基因,即KRAS、NRAS和HRAS。在多种肿瘤中RAS基因突变使其激活成为有致癌活性的癌基因。点突变、表达量升高以及插入/转位突变等是其常见的激活方式。深入了解RAS基因家族的突变特征以及其在各种肿瘤中的发生率,可以对肿瘤的发生、发展、早期诊断、靶向治疗以及预后起到很好的指导作用。本文分别从KRAS基因突变、NRAS基因突变以及HRAS基因突变3个方面,对RAS基因家族在实体瘤中突变率的研究进展进行文献回顾。

以难治性房性心动过速为突出表现的新生儿Costello综合征1例

目的:探讨1例Costello综合征的诊治经验,提高儿科医师对该病的认识。方法:回顾性分析1例新生儿期起病的Costello综合征的临床资料,并复习相关文献。结果:早产儿因“呼吸困难、腹胀42 d”转诊至深圳市儿童医院,以房性心律失常、呼吸机依赖、特殊面容、肌张力低下为主要临床表现。基因检测发现HRAS基因c.34G>A(p.G12S),为杂合新生致病性突变,确诊Costello综合征。经过地高辛、普罗帕酮、普萘洛尔、索他洛尔等抗心律失常治疗,心律好转,成功撤离呼吸机。但家属因考虑预后不良放弃治疗,出院后1天频发房性期前收缩,死于心源性休克。结论:对于心律失常患儿,合并喂养困难,特殊面部及皮肤外观,需要尽快完善基因检测明确诊断,并监测心电图及心脏彩超,根据心律情况调整抗心律失常药物治疗方案,心脏受累是其预后的决定因素。

Costello综合征二例并文献复习

目的探讨Costello综合征的临床特征。方法分析2例Costello综合征患儿的临床特征、基因突变类型和随访情况,并以"Costello综合征""科斯特洛综合征""Costello syndrome"或"HRAS gene"为关键词,在中国知网、万方数据库及PubMed检索相关文献,总结国内外报道的该综合征的临床特征及基因类型。结果 2例患儿均表现为特殊面容(卷发、厚唇),且生长发育迟缓,均存在HRAS基因第2外显子杂合点突变。确诊后均予2例患儿神经营养药物治疗,并让其定期运动和接受语言康复训练及个性化教育等,其运动和智力均有改善,但身高仍明显落后。经检索文献发现,国内外报道的Costello综合征患者的临床特征与上述2例患儿相似,以特殊面容、喂养困难、身材矮小和智力低下为主要临床表现,部分患儿尚有心血管、骨骼肌或中枢神经系统异常等表现,且伴发肿瘤易感性。结论 Costello综合征发病率极低,累及多系统病变。特殊体征及HRAS基因测序有助于疾病的诊断。

Costello综合征1例报告

1病例资料患儿女,8岁。因“自幼双眼睫毛过长”来我院眼科就诊。眼部检查:患儿双眼角膜明,瞳孔等大、等圆,晶状体透明,视网膜正常;眼压正常;角膜映光:正位;交替遮盖:不动;未发现眼球震颤;双眼眼球运动良好。双眼视力均为0.8,双眼睫毛长且乱生(图1A)。出生及疾病史:第2胎,足月顺产,出生顺利;否认吸氧史,否认心脑血管疾病史。

PI3K-AKT及MEK-ERK通路介导的HRAS-siRNA抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的:探讨HRAS对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K-AKT通路的影响。方法:利用Rfect将HRAS-siRNA转入人舌癌鳞癌CAL-27细胞,同时设置阴性对照组及空白对照组,检测HRAS蛋白的表达水平,CAL-27细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,并检测PI3K-AKT及MEK-ERK通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT、ERK、p-ERK表达水平。结果:实验组HRAS蛋白的表达水平明显低于阴性对照组及空白对照组; HRAS-siRNA明显抑制CAL-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、p-ERK的表达水平明显降低。结论:HRAS-siRNA可明显抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭能力,推测其机制可能与PI3K-AKT及MEK-ERK信号通路有关。

正常胎盘及葡萄胎滋养细胞H-ras和C-myc基因产物表达

目的：探索ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白在正常胎盘发育中的作用及ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白表达与葡萄胎临床预后关系。方法：用免疫组化方法，分析４０例正常胎盘及５０例葡萄胎组织Ｈ－ｒａｓ和Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达情况。结果：孕早期胎盘ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白的表达部位主要在细胞滋养细胞，表达率分别为７０％和８０％，孕中期表达部位主要在合体滋养细胞，表达率逐渐降低，足月时表达消失。葡萄胎ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白表达率分别为５２％和６０％，ｍｙｃ基因蛋白表达与滋养细胞的增生程度有关（Ｐ＜００１），ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白表达与葡萄胎恶变有关（分别Ｐ＜００１，Ｐ＜００５）。结论：ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白的过度表达与葡萄胎恶变有关。

1例试管婴儿患Costello综合征的基因诊断

目的对1例临床疑似Costello综合征的试管婴儿进行基因诊断。方法收集了1例疑似Costello综合征的试管婴儿的临床资料,采集患儿及其双亲的外周静脉血,提取基因组DNA,进行slim版全外显子组测序,通过生物信息学分析发现可疑的基因突变,最后利用Sanger测序验证该突变。结果患儿生长发育迟缓,并有特殊面容,其HRAS基因存在一个错义突变:c.34G>A(p.Gly12Ser)。患者父母未检测到该突变。结论结合临床表现和HRAS基因突变分析,本例试管婴儿被确诊为Costello综合征。

Costello综合征1例报道并文献复习

Costello综合征(Costello syndrome,CS)(MIM:218040)最早由爱尔兰医生Costello于1971年报道,并在1977年进一步阐释[1]。此病致病基因HRAS(MIM:190020)2005年被定位于11号染色体p15.5。患儿生后即有极度喂养困难,明显的运动、体格和智力发育落后,并可伴发先天性多系统畸形和丑陋面容,以及较高的肿瘤易感性。本研究报道1例基因诊断明确的CS患者,并通过文献复习介绍此病的临床表现、诊断要点、确诊方法、干预治疗措施。

伴有肌张力障碍表现的Costello综合征一例

10月龄男婴,因生长发育迟缓伴肌张力障碍收入院,伴有特殊面容。经过二代测序及家系一代验证,在HRAS基因发现一个已知杂合突变c.34G>T(p.G12C),确诊为Costello综合征(CS),未在父母外周血中检测到该突变。