人钠/二羧基转运蛋白2融合蛋白载体的构建及其原核表达

目的 :观测和鉴定人钠 /二羧基转运蛋白 2 (hSDCT2 )在大肠杆菌中的表达 ,并分离、纯化其蛋白产物。方法 :应用DNA重组技术 ,构建重组表达质粒pGEX hSDCT2 ;IPTG诱导其表达。采用谷胱甘肽偶联的Sepharose 4B亲和层析纯化GST hSDCT2 ,经FactorXa酶切和二次亲和层析后 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和WesternBlotting进行鉴定。结果 :成功构建hSDCT2基因融合蛋白载体 ,SDS PAGE及WesternBlotting显示GST hSDCT2融合蛋白表达于原核细胞 ,蛋白产量约占菌体总蛋白量的 2 5 %。经酶切及二次纯化后 ,获得纯化的hSDCT2蛋白。结论 :人钠 /二羧基转运蛋白 2可在大肠杆菌中稳定表达。