骨肉瘤细胞中SORBS1的表达和定位

目的构建人SORBS1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以GST-hSORBS1为模板,利用PCR扩增hSORBS1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hSORBS1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化hSORBS1蛋白。结果hSORBS1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体3*Flag中,Western blot检测到3*Flag-hSORBS1融合蛋白表达,且在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞周边,并成功纯化hSORBS1蛋白。结论成功构建3*Flag-hSORBS1真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达,并纯化hSORBS1蛋白。3*Flag-hSORBS1蛋白主要定位在细胞周边。