RNA干扰技术沉默STAT3对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人前列腺癌细胞PC3及LNCaP的生长抑制作用.方法:针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,转染PC3及LNCaP细胞;采用Western印迹、Northern印迹等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对PC3及LNCaP细胞体外生长抑制作用;用流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导细胞凋亡.结果:成功构建pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染PC3及LNCaP细胞;Western印迹,Northern印迹结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制STAT3基因表达,抑制率为60%～75%;MTT及FCM结果证明上述重组质粒可显著抑制PC3及LNCaP细胞的体外生长并诱导PC3细胞凋亡.结论:pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3可抑制STAT3在人前列腺癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡.

靶向hTERT的小干扰RNA诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的机制

[目的]研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的 siRNA诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的分子机制。[方法]化学合成的靶向hTERT的siRNA以脂质体法转染PC3细胞;应用寡核苷酸芯片技术分析细胞凋亡相关基因的转录谱变化;应用Westernblot检测细胞中hTERT、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、凋亡抑制基因Bcl-2和胞浆Cytc的蛋白水平变化;流式细胞术分析细胞凋亡率变化;比色法测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性改变。[结果]靶向hTERT的siRNA能有效抑制hTERT基因表达;转染hTERT-siRNA48h后可引起TRAIL的表达上调,Bcl-2表达下调,Cytc释放增加,Caspase-3活性增强,细胞凋亡率升高。[结论]靶向hTERT的小干扰RNA通过活化线粒体信号传导途径诱导PC3细胞凋亡。

shRNA抑制活化诱导的胞苷脱氨酶(AID)对前列腺癌细胞C4-2表型的影响

目的:探讨AID在前列腺癌中的表达情况,AID对前列腺癌细胞C4-2的侵袭、迁移、增殖以及凋亡方面的影响。方法:应用靶向敲减AID的慢病毒对前列腺癌细胞C4-2进行干扰,运用Western-blot、免疫组化、平板克隆形成、流式、Transwell实验对前列腺癌组织和前列腺癌细胞C4-2表型的变化情况进行研究。结果:临床前列腺癌样本中AID高表达,良性前列腺增生组织中AID低表达,正常前列腺组织不表达(*P<0.05);shRNA干扰以后的shAICDA-C4-2单克隆细胞株中AID的表达量显著降低,其增殖、迁移和侵袭能力阳性对照组(Monoclonal6)与阴性对照组(NC)相比分别降低49%、80%、63%,凋亡率阳性对照组(Monoclonal6)为阴性对照组(NC)的3.2倍。结论:前列腺癌组织中AID高表达,AID在促进前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制前列腺自细胞的凋亡中具有极其重要的作用。AID表达极可能与前列腺癌的进展、预后明显相关。