含凝血酶切点的hTNFα-hPgnK_5的原核表达及活性鉴定

目的在原核细胞中表达融合蛋白ｈＴＮＦα－ｈＰｇｎＫ５并鉴定其活性。方法构建ｈＴＮＦα－ｈＰｇｎＫ５基因的表达载体，并在大肠杆菌ＤＨ５α中进行表达。以ＭＴＴ法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性。结果成功地构建了ｈＴＮＦα－ｈＰｇｎＫ５表达载体并获得表达。免疫印迹分析表明，该融合蛋白具有ｈＰｇｎＫ５的免疫活性。体外实验表明，该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性。结论ｈＰｇｎＫ５蛋白可与ｈＴＮＦα可共同表达，表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细增殖。

hTNFA-hPgnK5融合蛋白的原核表达及测定

目的 获得 h TNFα- h Pgn K5融合蛋白基因 ,在原核细胞中表达融合蛋白 ,探索其活性 .方法 PCR法改造h TNFα基因 ,消除其终止密码子 ,构建 h TNFα- h Pgn K5融合蛋白基因 .在大肠杆菌 DH5α中表达该融合蛋白 ,测定其体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性 .结果 h TNFα基因经 PCR法改造 ,去除了终止密码子 ,并在 3 端引入 Bam HI位点 .h TNFα- h Pgn K5融合蛋白基因构建完成 ,并在原核系统中获得表达 ,免疫印迹反应表明该融合蛋白具有 h Pgn K5免疫活性 .体外实验表明该融合蛋白可抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞的增殖 .结论 h Pgn K5蛋白可与 h TNFα一起表达 。