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Reg Ⅲγ修饰HuMSCs对柯萨奇B3病毒诱导的心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响
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作者 蹇强 李丹 +1 位作者 程玮 孙敏 《中西医结合心脑血管病杂志》 2023年第8期1415-1422,共8页
目的:观察胰岛再生源蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)修饰人脐带间充质干细胞(HuMSCs)对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的小鼠心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响。方法:从新鲜脐带组织中提取HuMSCs,倒置显微镜观察形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达;采... 目的:观察胰岛再生源蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)修饰人脐带间充质干细胞(HuMSCs)对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的小鼠心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响。方法:从新鲜脐带组织中提取HuMSCs,倒置显微镜观察形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达;采用含过表达RegⅢγ的慢病毒感染HuMSCs,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测RegⅢγ mRNA表达水平。将40只小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组,每组10只。模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组采用腹腔注射CVB3建立心肌炎模型,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组再分别尾静脉注射HuMSCs、RegⅢγ-HuMSCs。14 d后,采用高分辨率小动物超声成像系统记录小鼠心脏超声指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-23含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡水平,免疫组织化学染色测定心肌组织T淋巴细胞表面抗原(CD4、CD8)和巨噬细胞特异性抗体(CD68)的表达。结果:分离的细胞呈典型纺锤形,细胞表面抗原CD44、CD73、CD90呈高表达,CD34、CD45、人类白细胞抗原-DR蛋白(HLA-DR)呈低表达,说明成功分离到HuMSCs。经过慢病毒感染的HuMSCs有明显绿色荧光蛋白表达,RegⅢγ mRNA表达水平高于未感染的细胞(P<0.05),说明成功得到RegⅢγ修饰的HuMSCs。与对照组比较,模型组小鼠射血分数(EF)、缩短分数(FS)降低,左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)升高,血清IL-2、IL-6和IL-23含量增加,IL-4和IL-10含量减少,心肌组织内炎性细胞浸润明显,TUNEL阳性率增加,CD4、CD8及CD68蛋白表达均呈强阳性(P<0.05);与模型组比较,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织炎性细胞浸润减少,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达均下降(P<0.05);相较于HuMSCs组,RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织未见明显炎性细胞浸润,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达下降(P<0.05)。结论:RegⅢγ修饰的HuMSCs可减轻CVB3诱导的小鼠心肌炎心肌损伤与炎性细胞浸润,改善心脏功能。 展开更多
关键词 心肌炎 柯萨奇B3病毒 胰岛再生源蛋白Ⅲγ 人脐带间充质干细胞 humscs 炎性细胞 小鼠 实验研究
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hUMSCs向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch1和神经元素3的表达
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作者 韩晶 洪艳 +1 位作者 王琪 檀梦天 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第7期773-780,共8页
目的:探讨人间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch信号通路受体Notch1与神经元素3(Ngn3)变化。方法:分离培养并鉴定hUMSCs,采用分阶段联合诱导法(前10 d用含EGF低糖培养基诱导,后11 d用含激活素A和尼克酰胺高糖培养... 目的:探讨人间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch信号通路受体Notch1与神经元素3(Ngn3)变化。方法:分离培养并鉴定hUMSCs,采用分阶段联合诱导法(前10 d用含EGF低糖培养基诱导,后11 d用含激活素A和尼克酰胺高糖培养基诱导)诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化,设单独培养的hUMSCs作为对照;观察诱导分化前后细胞的形态变化,免疫细胞化学法检测诱导后细胞Ngn3、胰高血糖素(Glucagon)表达鉴定胰岛前体细胞,电镜下观察诱导后胰岛前体细胞改变;采用免疫细胞化学法、real-time PCR法及Western blot法检测诱导第7天、第14天及第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达;Western blot法检测诱导并加入γ分泌酶抑制剂(DAPT)后第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达水平。结果:诱导后Glucagon免疫组化染色呈阳性,出现胰岛前体细胞集落,电镜下可见胞体内有分泌颗粒;real-time PCR和Western blot结果显示,Notch1水平在诱导后第7天时最高,Ngn3水平至第14天时达到峰值;添加Notch信号通路抑制剂后Ngn3表达水平升高。结论:Notch信号通路可能通过激活Notch1受体与下游基因Ngn3共同调控体外诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化过程。 展开更多
关键词 间质干细胞 胰岛前体细胞 NOTCH1 Ngn3 人脐带间充质干细胞 γ分泌酶抑制剂 诱导
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胰岛素样生长因子-I对人脐带间充质干细胞增殖影响的量效关系 被引量:1
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作者 徐斌 唐军 刘毅 《中国美容医学》 CAS 2011年第8期1247-1250,共4页
目的:探讨不同剂量胰岛素样生长因子-I对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖的影响及其量效关系。方法:取第2代hUCMSCs接种于96孔板,分为7组(G1,G2…,G7)。前5组分别加入含不同剂量IGF-I(40,60,80,100,120μg/L)的体积分数为0.02的胎牛血... 目的:探讨不同剂量胰岛素样生长因子-I对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖的影响及其量效关系。方法:取第2代hUCMSCs接种于96孔板,分为7组(G1,G2…,G7)。前5组分别加入含不同剂量IGF-I(40,60,80,100,120μg/L)的体积分数为0.02的胎牛血清培养液;第6组加入体积分数为0.05的胎牛血清培养液做为阳性对照,第7组加入体积分数为0.02的胎牛血清培养液做为阴性对照,采用MTT法观察不同剂量的IGF-I对细胞增殖的影响。结果:①第3天、第6天,G1组、G2组和G7组之间差异无显著性(P>0.05);G3组、G4组和G5组之间差异无显著性(P>0.05);②第3天,G6组增殖高于G1组与G2组,低于G3组、G4组和G5组,差异有显著性(P<0.000或<0.006);第4天,G6组增殖高于其余各组,差异有显著性(P<0.000或<0.006)。③第3天、第6天,G1组、G2组和G6组低于G3组,G4组,G5组,差异有显著性(P<0.000);G6组增殖高于G7组,统计分析差异有显著性(P<0.000)。结论:外源性IGF-I对hUCMSCs增殖的促进作用,随IGF-I浓度增高而有增强趋势,100μg/L为其较适合浓度,为实现hUCMSCs体外快速扩增提供适宜的条件。 展开更多
关键词 humscs IGF-I 组织工程
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Identification of microRNAs and messenger RNAs involved in human umbilical cord mesenchymal stem cell treatment of ischemic cerebral infarction using integrated bioinformatics analysis 被引量:13
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作者 Yin-Meng Qu Xin Sun +3 位作者 Xiu-Li Yan Hang Jin Zhen-Ni Guo Yi Yang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第9期1610-1616,共7页
In recent years,a large number of differentially expressed genes have been identified in human umbilical cord mesenchymal stem cell(hUMSC)transplants for the treatment of ischemic cerebral infarction.These genes are i... In recent years,a large number of differentially expressed genes have been identified in human umbilical cord mesenchymal stem cell(hUMSC)transplants for the treatment of ischemic cerebral infarction.These genes are involved in various biochemical processes,but the role of microRNAs(miRNAs)in this process is still unclear.From the Gene Expression Omnibus(GEO)database,we downloaded two microarray datasets for GSE78731(messenger RNA(mRNA)profile)and GSE97532(miRNA profile).The differentially expressed genes screened were compared between the hUMSC group and the middle cerebral artery occlusion group.Gene ontology enrichment and pathway enrichment analyses were subsequently conducted using the online Database for Annotation,Visualization,and Integrated Discovery.Identified genes were applied to perform weighted gene co-suppression analyses,to establish a weighted co-expression network model.Furthermore,the protein-protein interaction network for differentially expressed genes from turquoise modules was built using Cytoscape(version 3.40)and the most highly correlated subnetwork was extracted from the protein-protein interaction network using the MCODE plugin.The predicted target genes for differentially expressed miRNAs were also identified using the online database starBase v3.0.A total of 3698 differentially expressed genes were identified.Gene ontology analysis demonstrated that differentially expressed genes that are related to hUMSC treatment of ischemic cerebral infarction are involved in endocytosis and inflammatory responses.We identified 12 differentially expressed miRNAs in middle cerebral artery occlusion rats after hUMSC treatment,and these differentially expressed miRNAs were mainly involved in signaling in inflammatory pathways,such as in the regulation of neutrophil migration.In conclusion,we have identified a number of differentially expressed genes and differentially expressed mRNAs,miRNA-mRNAs,and signaling pathways involved in the hUMSC treatment of ischemic cerebral infarction.Bioinformatics and interaction analyses can provide novel clues for further research into hUMSC treatment of ischemic cerebral infarction. 展开更多
关键词 nerve REGENERATION ischemic cerebral infarction human umbilical cord mesenchymal STEM CELL TREATMENT bioinformatics analysis DIFFERENTIALLY EXPRESSED genes DIFFERENTIALLY EXPRESSED mRNAs inflammatory response STEM CELL therapy weighted gene co-suppression analysis WGCNA protein-protein interaction network PPI humsc neural REGENERATION
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脐带间充质干细胞移植对老年痴呆小鼠SAMP8学习记忆的影响 被引量:2
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作者 周会芳 张密霞 +3 位作者 高丽 庄朋伟 徐倩 张艳军 《世界中医药》 CAS 2015年第9期1383-1386,共4页
目的:探讨脐带间充质干细胞(HUMSCs)移植对老年痴呆小鼠SAMP8学习记忆能力的影响。方法:培养人脐带间充质干细胞,通过尾静脉以高中低3个剂量(2.5×105/0.2 m L/20 g、5×105/0.2 m L/20 g、1×106/0.2 m L/20 g)分别向7月龄... 目的:探讨脐带间充质干细胞(HUMSCs)移植对老年痴呆小鼠SAMP8学习记忆能力的影响。方法:培养人脐带间充质干细胞,通过尾静脉以高中低3个剂量(2.5×105/0.2 m L/20 g、5×105/0.2 m L/20 g、1×106/0.2 m L/20 g)分别向7月龄SAMP8老年痴呆小鼠移植HUMSCs,并设立移植生理盐水组和R1小鼠正常对照组。HUMSCs移植45 d后,MORRIS水迷宫和跳台实验检测其学习记忆能力。结果:与R1正常对照小鼠比较,SAMP8老年痴呆小鼠生理盐水组学习记忆能力明显降低;和移植生理盐水组比较,细胞移植低剂量组水迷宫逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05);跳台潜伏期显著延长(P<0.05),错误次数显著减少(P<0.05),结论:低剂量的脐带间充质干细胞移植能增强老年痴呆小鼠SAMP8的学习记忆能力。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 移植 SAMP8 学习记忆
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人脐带间充质干细胞体外诱导分化胰岛样细胞及形态学观察
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作者 袁丽丽 张炳强 +3 位作者 王玮玮 李蒙 张嘉澍 胡鑫童 《济宁医学院学报》 2017年第2期93-97,102,共6页
目的构建人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,HUMSCs)体外培养体系,并诱导其向胰岛样细胞分化。方法体外分离培养HUMSCs,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对HUMSCs特异标记物进行检测;先后加入... 目的构建人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,HUMSCs)体外培养体系,并诱导其向胰岛样细胞分化。方法体外分离培养HUMSCs,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对HUMSCs特异标记物进行检测;先后加入β-巯基乙醇及高糖的分步诱导法诱导HUMSCs向胰岛样细胞分化,采用RT-PCR、双硫腙染色对诱导后细胞进行胰岛样细胞鉴定。结果 FCM结果显示HUMSCs表达CD29、CD73、CD90及CD105,不表达或低表达CD45、CD86、HLA-DR及CD34;诱导的胰岛样细胞表达PDX-1和Insulin,双硫腙染色阳性。结论 HUMSCs可经分步诱导法分化为胰岛样细胞,能为细胞移植治疗糖尿病提供丰富的种子细胞。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 分化 胰岛样细胞
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壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵复合人脐带间充质干细胞构建组织工程骨修复骨缺损的实验研究 被引量:5
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作者 吕振京 孙国栋 +3 位作者 焦延鹏 周长忍 林永新 李志忠 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1361-1365,共5页
目的:探索壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵复合人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)构建的组织工程骨植入动物骨缺损处的成骨能力。方法:体外构建组织工程骨;健康新西兰大白兔构造骨缺损模型兔后随机分为3... 目的:探索壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵复合人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)构建的组织工程骨植入动物骨缺损处的成骨能力。方法:体外构建组织工程骨;健康新西兰大白兔构造骨缺损模型兔后随机分为3组,即A:组织工程骨植入组;B:支架材料植入组;C:空白对照组,于术后4、8、12周取骨缺损标本,进行大体标本、影像学、组织学观察成骨情况。结果:术后12周,3种检测手段均发现A组新生骨已经完全将骨缺损填充,并有部分皮质骨将骨缺损两端连接。B组虽有部分骨痂形成,但无连续骨质。C组术后仅有少量骨痂形成。A组成骨能力明显强于B、C组。结论:本实验构建的组织工程骨能修复大段的骨缺损,具有良好的成骨能力,可以作为骨移植的替代材料。 展开更多
关键词 壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵 人脐带间充质干细胞 组织工程骨 骨缺损
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Human umbilical cord mesenchymal stem cells as cell carriers in the treatment of gliomas: research status and prospects
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作者 Qianxu Jin Zongmao Zhao 《Journal of Translational Neuroscience》 2020年第2期22-33,共12页
Human umbilical cord mesenchymal stem cells(HuMSCs)have the multi-difFerentiation potential to differentiate into various types of cells without immune rejection.They are considered to be an ideal source of neural ste... Human umbilical cord mesenchymal stem cells(HuMSCs)have the multi-difFerentiation potential to differentiate into various types of cells without immune rejection.They are considered to be an ideal source of neural stem cells and also an ideal cell carrier for gene therapy.Because of the invasive growth of brain gliomas,most of them have no obvious boundaries with normal brain tissues.It is difficult to completely remove them by surgery and the remaining cells become the main source of tumor recurrence.In recent years,gene therapy has become a new method for the treatment of gliomas.The vector carrying the target gene is introduced into HuMSCs in a certain way to correct gene defects or play other roles.The differentiation potential of HuMSCs makes it an ideal source of nerve cells to play a greater role in gene therapy of glioma.Therefore,this article reviews the current status and prospects of HuMSCs as cell carriers in the treatment of glioma. 展开更多
关键词 human umbilical cord mesenchymal stem cells(humscs) GLIOMA cell carrier gene therapy targeted therapy
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人脐带间充质干细胞对急性肺损伤氧化应激的影响 被引量:2
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作者 李海宁 刘卓拉 +1 位作者 陈彦 崔蕾 《中国实用医药》 2012年第5期3-5,共3页
目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)氧化应激失衡的作用。方法人脐带间充质干细胞的分离,培养和鉴定。将30只Wistar大鼠随机分为生理盐水(NS)对照... 目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)氧化应激失衡的作用。方法人脐带间充质干细胞的分离,培养和鉴定。将30只Wistar大鼠随机分为生理盐水(NS)对照组(A组)、LPS模型组(B组)和HUC-MSCs移植组(C组),每组10只。移植6h后,处死各组大鼠,取肺组织行病理学观察,肺湿/干重比测定,丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性检测。结果流式细胞术结果显示,纺锤样细胞高表达CD29、CD44和CD105,极低表达CD34,符合HUMSCs的特征。与A组比较,B组W/D和MDA含量明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组W/D和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05)。结论在大鼠模型中人脐带间充质干细胞移植能减轻肺损伤,并能降低肺组织MDA含量和提高SOD活性。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 肺损伤 氧化应激
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人脐带间充质干细胞与sertoli细胞共培养下向男性生殖细胞分化的研究 被引量:1
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作者 谢丽春 杨汉华 +4 位作者 赖秀蓝 陈晓东 陈业增 刘思征 马廉 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2016年第6期293-299,共7页
目的探讨用睾丸支持细胞(SCs)模拟的睾丸微环境,通过共培养技术诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的可能性,为男性不育治疗寻求一种新的途径。方法采用差异贴壁法分离、培养、扩增出HUMSCs,从新生昆明小鼠的睾丸中分离... 目的探讨用睾丸支持细胞(SCs)模拟的睾丸微环境,通过共培养技术诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的可能性,为男性不育治疗寻求一种新的途径。方法采用差异贴壁法分离、培养、扩增出HUMSCs,从新生昆明小鼠的睾丸中分离培养出SCs,制备SCs饲养层,将HUMSC:s加入SCs饲养层中共培养,显微镜观察诱导前及诱导后第7 d、14 d细胞的形态学变化;RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记DAZL、VASA及Stella的表达。结果 HUMSCs在共培养体系中逐渐失去细小成纤维样的形状,形成类似精原细胞样的圆形细胞菌落,诱导7 d、14 d后,RT-PCR、细胞免疫荧光均可以检测到男性生殖细胞特异性标记VASA、DAZL及Stella的表达。结论在睾丸SCs模拟的睾丸微环境,HUMSCs不仅发生形态学的变化,而且能表达生殖细胞的特异生物学特性,表明在特定的微环境中,细胞与细胞间的相互接触是微环境中控制HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的必不可少的因素。SCs与HUMSCs的直接接触诱导其向男性生殖细胞分化的诱导研究,为迫切需要的男性不育治疗提供了一个新的实验参考系统。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 细胞间的直接接触 环境依赖性 男性生殖细胞 睾丸支持细胞
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双病毒共感染的人脐带间充质干细胞多重靶向肝癌细胞的治疗体系的建立 被引量:1
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作者 杨圆圆 卢杨 +3 位作者 张晓龙 张晴 李真真 张砚君 《生物医学工程与临床》 CAS 2016年第5期450-457,共8页
目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(... 目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(WJ)分离培养HUMSC。以pGL3-basic、pCDH1-MSC1-EF1-Ds Red、pAd-Track等载体为基础,用聚合酶链反应(PCR)、overlap PCR、酶切、连接等技术构建pGL3-hTERTp报告基因载体、pLentiR.E1A慢病毒表达载体、pAd-hTERTp腺病毒表达载体,经测序验证其正确性。利用双荧光素酶的方法鉴定hTERTp的特异性。利用实时定量PCR的方法分别检测MSC.pLentiR+pAd-Track(共转染腺病毒及对照慢病毒的MSC)和MSC.pLentiR.E1A+pAdTrack中不同时间点的病毒相对拷贝数,用电子显微镜观察HUMSC中病毒颗粒的产生。流式细胞术检测由双病毒共感染的HUMSC包装出的腺病毒对HepG2细胞系的感染效率。Transwell方法研究双病毒感染对HUMSC向HepG2细胞趋化的影响。结果成功从脐带WJ组织中分离培养HUMSC。成功构建载体pGL3-hTERTp、pLentiR.E1A、pAd-hTERTp。双荧光素酶方法证明hTERTp在不同肿瘤细胞中具有较高的转录活性,而在正常细胞中转录活性极低。Ad-Track及LentiR.E1A共同感染HUMSC后,随着腺病毒早期复制基因E1A逐渐表达,Ad-Track启动复制程序,最终将MSC裂解并释放具有感染能力的病毒颗粒,进一步感染HepG2细胞。感染双病毒的HUMSC与对照组一致在LentiR.E1A感染后32 h内可以穿过Transwell小室,向培养HepG2细胞的下室迁移。结论经过E1A修饰的HUMSC可包装出携带hTERTp肿瘤特异启动子的复制缺陷型腺病毒,并进一步感染肿瘤细胞的多重靶向治疗系统,为肿瘤的靶向基因治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 E1A 腺病毒 慢病毒 人端粒酶逆转录启动子(hTERTp) 载体 肿瘤细胞
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Role of miR-128/216a Regulating Isl1 Expression during Differentiation of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells into Insulin-Producing Cells
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作者 MU Tianchi WANG Tao +2 位作者 GAO Zhenyu PAN Xin LIU Yingxue 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS CSCD 2023年第2期177-184,共8页
Islet-1(Isl1),a LIM homeodomain protein,is expressed in the embryonic pancreatic epithelium.As a key transcription factor,Isl1 can not only regulate insulin gene expression in normal glucose condition but also maintai... Islet-1(Isl1),a LIM homeodomain protein,is expressed in the embryonic pancreatic epithelium.As a key transcription factor,Isl1 can not only regulate insulin gene expression in normal glucose condition but also maintainβ-cell function and impact pancreaticβ-cell target genes.Some experiments have suggested that Micro RNA(miRNA)can play a critical role during the induction of insulinproducing cells(IPCs).However,it is unclear whether miRNA may regulate Isl1 expression during differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells(HUMSCs)into IPCs.In this investigation,we induced HUMSCs into IPCs with a modified two-step protocol,activin A,retinoic acid(step1)and conophylline,nicotinamide(step2).To find the miRNA regulating Isl1 expression,we respectively used Target Scan,miRDB and RNAhybrid to predict and got the result,miR-128 and miR-216a.The miRNAs can inhibit Isl1 expression by dual luciferase assay.The results of real-time Polymerase Chain Reaction(PCR)showed that Isl1 expression level was almost reciprocal to that of miR-128 and miR-216a during differentiation of HUMSCs into IPCs.Furthermore,over-expression of miR-128 or miR-216a downregulated expression levels of Isl1 and Maf A.Therefore,miR-128 or miR-216a may regulate expression of islet-specific transcription factors to control differentiation of HUMSCs into IPCs. 展开更多
关键词 microRNA(miRNA) Isl1 human umbilical cord mesenchymal stem cells(humscs) insulin-producing cells(IPCs)
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人脐带间充质干细胞治疗大鼠糖尿病神经性足溃疡的疗效及VEGF表达变化 被引量:11
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作者 王瑛 但齐琴 +5 位作者 王庆萍 周宁 金醒眆 侯宗柳 彭葆坤 王廷华 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期29-33,共5页
目的调查人脐带间充质干细胞(HUMSC)治疗对糖尿病大鼠足溃疡中血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的影响。方法用高脂饲料喂养的成年SD大鼠4周并给予链脲佐菌素腹腔注射(首次注射25mg/kg,1周后再次注射40mg/kg)制作糖尿病模型,然后挤压坐... 目的调查人脐带间充质干细胞(HUMSC)治疗对糖尿病大鼠足溃疡中血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的影响。方法用高脂饲料喂养的成年SD大鼠4周并给予链脲佐菌素腹腔注射(首次注射25mg/kg,1周后再次注射40mg/kg)制作糖尿病模型,然后挤压坐骨神经,并在足部制作切口涂抹金黄色葡萄球菌诱导大鼠糖尿病神经性足溃疡形成;随后将培养鉴定的HUMSC涂于溃疡表面,治疗10d。测量溃疡体积,RT-PCR和Western blot测定溃疡组织VEGF基因和蛋白表达变化,免疫组化确定VEGF细胞定位及血管密度变化。结果 HUMSC移植促进足溃疡体积明显缩小(P<0.05),VEGF基因和蛋白水平表达明显上调(P<0.05);VEGF主要定位于血管;溃疡周组织血管密度明显增加(P<0.05)。结论 HUMSC移植可能通过调节VEGF的有效表达促进糖尿病神经性足溃疡修复。 展开更多
关键词 糖尿病足溃疡 人脐带间充质干细胞 表皮生长因子
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构建携带人/鼠IFN-γ重组腺病毒体外转染人脐带间充质干细胞的实验研究 被引量:2
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作者 李慧 胡琼英 贾永前 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期805-810,共6页
目的构建人/鼠干扰素(IFN-γ)的重组腺病毒,体外转染人脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs),为研究IFN-γ在预防和治疗移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)中的作用提供实验依据。方法采用PC... 目的构建人/鼠干扰素(IFN-γ)的重组腺病毒,体外转染人脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs),为研究IFN-γ在预防和治疗移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)中的作用提供实验依据。方法采用PCR法从含有人/鼠IFN-γ基因的质粒中扩增出目的基因片段IFN-γ,然后定向克隆到穿梭质粒载体pDC316中,构建pDC316-IFN-γ,经酶切、PCR及测序鉴定后,再将IFN-γ定向克隆至腺病毒骨架载体,从而构建携带IFN-γ的重组腺病毒载体,并转染人胚肾细胞系293细胞,进行重组腺病毒(Ad-IFN-γ)的包装、生产和纯化;用半数组织培养感染量(50%tissue culture infective dose,TCID50)法检测重组腺病毒滴度。将Ad-IFN-γ及空病毒(Ad-null,作为载体阴性对照)分别转染HUMSCs,在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用Western blot与ELISA法鉴定IFN-γ蛋白的表达。结果成功构建了携带IFN-γ的重组腺病毒,鼠IFN-γ(Ad-mIFN-γ)的滴度为1.0×1010 IU/mL,人IFN-γ(Ad-hIFN-γ)的滴度为1.6×1010 IU/mL,Ad-GFP的滴度为1.0×109 IU/mL。Ad-IFN-γ转染HUMSCs后24h开始观察到绿色荧光,72h时该荧光表达更强;Western blot和ELISA法均证实HUMSCs表达IFN-γ蛋白。结论成功构建了携带人/鼠IFN-γ基因的重组腺病毒载体,并证实其可有效转染HUMSCs。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 脐带间充质干细胞 腺病毒载体 转染
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人脐带干细胞移植对大鼠糖尿病足及BDNF表达的影响 被引量:1
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作者 王瑛 周宁 +5 位作者 王庆萍 金醒眆 侯宗柳 彭葆坤 但齐琴 王廷华 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期931-934,共4页
目的探讨人脐带间充质干细胞(HUMSC)移植对大鼠糖尿病足溃疡及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法成年SD大鼠分为正常组、糖尿病足溃疡组和HUMSC治疗组,每组12只。后两组大鼠用高能饲料喂养结合链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型... 目的探讨人脐带间充质干细胞(HUMSC)移植对大鼠糖尿病足溃疡及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法成年SD大鼠分为正常组、糖尿病足溃疡组和HUMSC治疗组,每组12只。后两组大鼠用高能饲料喂养结合链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型,模型诱导成功后通过坐骨神经损伤制作大鼠糖尿病足溃疡模型,然后将培养鉴定的HUMSC移植入溃疡周及表面。治疗后2周测定各组溃疡面积、感觉功能恢复程度(温痛觉);PCR检测溃疡组织BDNF基因表达变化,免疫组化确定BDNF细胞定位及BDNF灰度值变化。结果HUMSC移植组足溃疡面积较糖尿病足溃疡组缩小,后肢温、痛觉功能有一定程度恢复(P<0.05);溃疡组织BDNF基因和蛋白水平表达较糖尿病足溃疡组上调(P<0.05)。结论 HUMSC移植可促进糖尿病足溃疡修复,其分子机制可能与BDNF表达有关。 展开更多
关键词 糖尿病大鼠 足溃疡 人脐带间充质干细胞 BDNF表达
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人脐带间充质干细胞抗肿瘤机制的研究进展 被引量:2
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作者 陈文杰 汪建样 +1 位作者 殷明 殷嫦嫦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期78-82,共5页
人脐带间充质干细胞(HUMSCs)是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞群,具有分泌特定细胞因子、诱导肿瘤细胞凋亡、适用于基因编辑、安全性好及肿瘤趋向性等特性。有较多的研究者研究HUMSCs对肿瘤的作用,试图将HUMSCs作为肿... 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞群,具有分泌特定细胞因子、诱导肿瘤细胞凋亡、适用于基因编辑、安全性好及肿瘤趋向性等特性。有较多的研究者研究HUMSCs对肿瘤的作用,试图将HUMSCs作为肿瘤治疗的新方法。就HUMSCs抗肿瘤作用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 肿瘤趋向性 抗肿瘤
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