hVEGF_(121)与βhCG融合蛋白的克隆、分离纯化与初步鉴定

构建一种新型抗肿瘤融合蛋白疫苗,包含hVEGF121和βhCG抗原表位,并探索融合蛋白的纯化条件和方法。采用PCR方法,克隆VEGF和βhCG基因,并通过限制性内切酶NcoⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ将两个基因逐个插入pET-28a(+)质粒中,利用质粒自带的卡那霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。对重组菌进行乳糖诱导表达后,通过超声破碎,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析等方法进行融合蛋白的分离纯化,Western-blot鉴定。测序结果表明成功构建重组载体pET-28a-VEGF-M2-X10-βhCG-CTP37,重组基因长993 bp,编码331个氨基酸残基。SDS-PAGE显示,经乳糖诱导,Escherichia coli BL21(DE3)重组菌表达hVEGF121-M2-X10-βhCG-CTP37多肽,约占菌体总蛋白量的35%。融合蛋白经分离纯化后纯度可达到电泳纯,约占蛋白冻干粉的80%。结论:克隆、测定了融合蛋白基因,并在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达hVEGF121-M2-X10-βhCG多肽,同时成功分离纯化此多肽。