万古霉素敏感性下降金黄色葡萄球菌(VISA/hVISA)的研究进展

万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌(VISA/hV ISA)日益增多,已经成为公共健康的重要威胁。来自临床或实验室的VISA/hV ISA菌株表现出一些共同特征,如细胞壁增厚,自溶活性降低,毒力减弱,醋酸盐代谢异常。金葡菌从VSSA到VISA/hV ISA的转化是一个逐步演变的过程,VISA中一些调控基因的变异,特别是如wal KR、graRS、vra SR、rpo B、rpo C、rpo D、agr、msrR、fdh2、sle1等基因连续的变异与金葡菌对万古霉素的耐药性相关。VISA/hV ISA中相应基因的变异也是VISA/hV ISA对宿主毒力减弱,持续定殖及对宿主适应性改变的遗传基础。为了预防和控制VISA/hI VSA感染,应全面了解其生物学特性,开发简便有效的检验方法,探索制定灵活的治疗策略,达到有效防治的目的。

万古霉素对hVISA生物膜构成的影响

目的探讨万古霉素对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)生物膜构成的影响,及其与万古霉素治疗hVISA失败率高的关系。方法将临床菌株hVISA(05307)和Mu3(ATCC 700698,hVISA的参考菌株)暴露于不同浓度的万古霉素。单独的肉汤和不含抗生素的细菌悬浮液分别作为阴性和阳性对照组。使用结晶紫(CV)染色测量hVISA的生物膜总量,并且使用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜的三维结构。细胞外基质(ECM)中的蛋白质组分,细胞外多糖黏附素(PIA)和细胞外DNA(eDNA)分别采用直接和间接的方法定量.结果与阳性对照组相比,只有1倍最低抑菌浓度(MIC)的万古霉素处理组增加了hVISA的生物膜总量。另外,各组提取的ECM中PC和蛋白质的表达没有明显区别。加入DNase I处理后,1×MIC万古霉素处理组的生物膜总量被显著抑制到与万古霉素未处理组相近的水平。结论1×MIC的万古霉素诱导的eDNA释放是万古霉素增强hVISA生物膜形成主要因素,这可能是万古霉素治疗hVISA感染失败率高的原因之一。

MRSA对糖肽类抗生素耐药趋势及机制初探

目的:分析确定MRSA的van基因的表达与对糖肽类抗生素的耐药趋势的相关性。方法:分析MRSA菌株耐药谱确定对糖肽类抗生素耐药性的变化趋势,通过PCR筛选出现耐药趋势的MRSA菌株中van基因的表达情况。结果:MRSA菌株对糖肽类抗生素药敏结果中位数和频数分布趋势都显示向耐药方向的偏态分布,而van基因在85株MRSA中没有阳性表达菌株。结论:MRSA菌株对糖肽类抗生素出现明显的向耐药方向发展的趋势,而van基因的表达与这种耐药趋势不呈现明显的相关性,证明对于糖肽类抗生素的耐药机制还会更加复杂,尤其是hVISA的出现对MRSA对糖肽类抗生素耐药机制具有指导意义。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的流行性及mgrA基因对万古霉素耐药性影响的研究

目的 监测郑州大学第一附属医院近5年来异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycinintermediated Staphylococcus aureus, hVISA)的流行性,并进一步研究金黄色葡萄球菌mgrA基因对万古霉素耐药性的影响。方法采用琼脂稀释法和E-test法检测万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC);MHA5T和菌群曲线分析法(PAP/AUC)检测hVISA,Real-time RT-PCR法测定hVISA和non-hVISA菌株中mgrA基因的mRNA表达水平,通过SOE-PCR+同源重组的方法敲除mgrA基因。结果 823株MRSA中共检出hVISA 147株,检出率为17.9%,hVISA菌株mgrA基因的mRNA表达水平是non-hVISA菌株的2.65倍,明显高于non-hVISA菌株(t=7.326, P<0.001),成功构建mgrA基因缺失株,并发现mgrA基因缺失株万古霉素耐药性有所下降。结论 本地区hVISA的流行率为17.9%,并且5年来检出率呈逐年上升的趋势,mgrA基因可能与万古霉素耐药性有关,本研究推测mgrA基因下调可使万古霉素耐药性下降,研究为进一步明确金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药机制提供了新的理论基础。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的筛选和生物被膜形成能力的研究

目的调查笔者医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分离率,并探索hVISA菌株的生物被膜形成能力.方法收集临床139例MRSA菌株,采用浓度为5mg/L的替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)进行hVISA筛选,应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)法进行确证,报告笔者医院hVISA的发生率.用刚果红琼脂和结晶紫染色法检测hVISA的生物被膜形成能力,微量肉汤稀释法和K-B纸片法检测生物被膜中细菌对抗生素的敏感度.结果经过PAP-AUC方法检测,从139株MRSA中确定1例为hVISA阳性,hVISA的分离率为0.72%.分离出来的hVISA菌株可以形成生物被膜,hVISA菌株的最低抑制生物被膜浓度(MBIC)明显升高,K-B法检测显示它对利奈唑胺和替加环素敏感.同时,研究发现低浓度的万古霉素可能对生物被膜的形成有促进作用.结论笔者医院hVISA的发生率虽然不高,但此菌株可以形成生物被膜,形成生物被膜后细菌对万古霉素敏感度降低,需要引起临床的高度重视,此时可尝试换用利奈唑胺或替加环素.

鼻拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的流行情况

目的了解我院住院患者鼻腔拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(hVISA)的发生率。方法收集临床57例来自鼻拭子的金黄色葡萄球菌标本,分别采用浓度为2mg/L和4mg/L万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIA2V、BHIA4V)、浓度为5mg/L替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)和宏量E-test法(MET)进行hVISA筛选,同时应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)作为hVISA检测的金标准进行确证,从而确定我院hVISA的发生率。结果BHIA2V、BHIA4V和BHIA5T筛选阳性菌株分别为33、0和5株,MET方法阳性菌株数为0,PAP-AUC确证hVISA菌株数为0,因此我院鼻拭子中未分离出hVISA。结论BHIA2V筛选方法假阳性数太高,不适合用于临床hVISA初筛;MET的价格比较高,不适合常规开展;因此我们建议将BHIA4V和BHIA5T作为临床上hVISA的常规筛选方法,筛选阳性结果通过MET方法进行验证,最后通过PAP-AUC确证。虽然从我院鼻拭子中未检出hVISA,但是金黄色葡萄球菌的分离率是比较高的,尤其是ICU和呼吸科监护室的住院患者,这仍然需要引起临床高度重视,合理使用抗生素尤其是糖肽类药物,避免hVISA和VISA的发生。

中南地区金黄色葡萄球菌流行病学及耐药性研究

目的研究中南地区2011年6月至2012年5月金黄色葡萄球菌的耐药情况及基因型分布。方法采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC），多重PCR方法对MRSA菌株进行SCCmec（staphylococcalcassettechromosomemec）和agr（accessorygeneregulator）分型。用MHAST（含有5μg／ml替考拉宁的M—H琼脂）初筛hVISA（heterogeneousvall-comycin—intermediateStapylococcusaarells）菌株，MHAST初筛阳性的菌株用金标准PAP／AUC法（popu—lationanalysisprofile／areaunderthecurve）进行确证。结果352株金黄色葡萄球菌主要分离自血液标本（40．1％）和分泌物标本（24．7％），其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）118株，检出率为33．5％。MRSA菌株对头孢菌素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、利福平、克林霉素、红霉素和四环素等抗菌药物耐药率均显著高于MSSA，差异有统计学意义（P〈0．05）。MRSA对氯霉素和甲氧苄啶／磺胺甲嗯唑耐药率较低，分别为10．2％和7．4％，未发现万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素及替加环素耐药的菌株。118株MRSA中共检测出hVISA20株，检出率为16．9％。MRSA菌株主要为SCCmecⅢ型，占80．5％；其次是Ⅳ型占8．5％。agr分型主要为agr．1型，占81．4％；其次为agr-2型，占15．3％。结论中南地区金黄色葡萄球菌耐药现象严重，MRSA基因型主要为SCCmecllI型和agr-1型，hVISA流行率极高，达16．9％，应引起临床高度重视，合理使用抗菌药物尤其是糖肽类药物，以避免VISA和VRSA（vancomycin—resistantStapylococcusattreus）株的产生，致使临床治疗失败。

血培养中异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分布及特征分析

目的研究血培养中异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,hVISA)的流行性及分子生物学特点。方法采用MHA5T(含有5μg/ml替考拉宁的MH琼脂)和菌群曲线分析法(populats profiles/area under the curve,PAP/AUC)检测hVISA,PCR方法对hVISA菌株进行SCCmec(staphylococcal cassette chromosome mec)﹑多位点序列分型(multilocus-sequence typing,MLST)﹑金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus aureus protein A,spa)和附属基因调节子(accessory gene regulator,agr)分型检测,TritonX-100诱导自溶性检测hVISA菌株和万古霉素敏感金黄色葡萄球菌(vancomycin-sensitive Staphylococcus aureus,VSSA)菌株的自溶性差异,real-time PCR方法检测hVISA和VSSA菌株中vraR、mgrA、icaA、icaR、pbp4和agr基因的表达差异。结果血培养中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出率为39.5%,136株MRSA中共检出hVISA 31株,hVISA的阳性率为22.8%,hVISA菌株的万古霉素最小抑菌浓度(MIC)主要集中在1.5μg/ml(占54.8%)和2μg/ml(占25.8%),而VSSA菌株万古霉素MIC主要分布在0.5μg/ml(占46.7%)和0.75μg/ml(占39.0%)。hVISA的主要流行克隆为ST239-SCCmecⅢ-t030-agrⅠ型,有22株,占71.0%,与VSSA相比,hVISA菌株自溶性有所下降(χ^2=13.583,P=0.032)。RT-PCR结果显示与VSSA菌株相比,hVISA菌株中vraR、mgrA和icaA表达水平分别升高了1.58倍、1.53倍和1.06倍(P<0.01),而icaR、agr和pbp4基因的表达水平分别下降了0.85倍、0.61倍和1.03倍(P<0.05)。结论hVISA的流行率高达22.8%,主要流行克隆为ST239-SCCmecⅢ-t030-agrⅠ型,应引起临床高度重视,注意抗生素的合理使用,加强院感防控,避免hVISA菌株流行克隆的传播以及VISA和万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)的产生。

对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌研究进展

随着MRSA的越发,万古霉素在临床上的使用越来越频繁,成为治疗MRSA的最后一道防线;然而,对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的出现,临床上抗感染治疗面临极大困难,引起了医学界普遍的关注。本文对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的发展,耐药状况,作用机制,相关治疗和热门争议话题等方面的研究进展作一综述。